Snail及E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其意義

張粉娟，王學春，李傳偉，董兵衛(wèi)，何會女，張渭波，代曉強

1.陜西省咸陽市中心醫(yī)院病理科 (咸陽712000)；2.泰山醫(yī)學院(泰安 271000)；

3.陜西省咸陽市中心醫(yī)院腫瘤科(咸陽 712000)

乳腺癌(Mammary cancer)是威脅女性健康的主要病因，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，屬于最常見的惡性腫瘤之一。全世界每年大約有150萬女性發(fā)生乳腺癌，死于乳腺癌的女性占1/3，它的發(fā)病常與遺傳有關，并且與年齡存在一定的關系，尤其多發(fā)于40～60歲之間的女性。早發(fā)現(xiàn)乳腺癌，并且實施早期治療，無疑是乳腺癌防治的最新發(fā)展方向。

目前，乳腺癌患者已經(jīng)趨于年輕化[1]。E-鈣黏素 (E-cadherin)是近年來研究的較多的一類腫瘤抑制因子,屬于鈣離子所依賴細胞粘附素家族中主要成員之一，是一類單拱橋的跨膜蛋白，大部分分布于胞漿區(qū)，主要表達于上皮細胞中,是乳腺癌的診斷標志。Snail是目前研究乳腺癌轉(zhuǎn)移及復發(fā)的重要調(diào)控因子。由于Snail可通過上調(diào)波形蛋白、成纖維細胞特異蛋白和 Rho 蛋白表達或下調(diào)鈣粘附蛋白E表達等途徑導致腫瘤上皮間質(zhì)化并促進腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生，因而 Snail 高表達往往意味著腫瘤轉(zhuǎn)移風險較大，且患者預后不良。Snail可以在E-cadherin缺失的腫瘤組織中表達，這就表明Snail可以作為腫瘤發(fā)生、進展過程中的重要因子。在組織中發(fā)現(xiàn)上皮-鈣粘素(E-cadherin)與轉(zhuǎn)錄因子Snail的異常表達，可以判斷腫瘤的良惡性，還可以促進腫瘤細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。所以，本研究擬通過應用免疫組織化學SP法，檢測乳腺浸潤性導管癌患者癌組織與癌旁組織中Snail及E-cadherin的表達，分析Snail及E-cadherin表達之間的相關性，為臨床對乳腺浸潤性導管癌的發(fā)生、發(fā)展進行早期準確診斷、干預及治療提供重要依據(jù)。

材料與方法

1 研究對象與樣本分組 將我院55例乳腺浸潤性導管癌患者作為研究對象。所有患者都是乳腺浸潤性導管癌患者，并且所有患者均符合乳腺癌的臨床診斷標準，全部患者在手術之前均未經(jīng)過任何放、化療及乳腺癌的相關治療。55例患者年齡為23～61歲，平均年齡為42歲，病程1～3年，平均病程(1.6±1.4)年。所有患者的一般資料相比較，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

2 方法及試劑 對所有患者復習原病理診斷資料，找出病理蠟塊組織，重新切片，每例切片4張，進行免疫組化染色。根據(jù)Elston和Ellis乳腺癌組織學分級法[2-3]進行半定量評測分級。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會合作制定的第7版腫瘤TNM分期[4]對乳腺癌進行分期。組織學分類按照2003年WHO乳腺腫瘤組織學分類[5]進行分類。免疫組化采用SP法，所有試劑來自邁新生物公司和上海達克生物公司。

3 實驗評判結(jié)果及統(tǒng)計學方法

3.1 實驗評判結(jié)果:患者間E-cadherin及Snail的表達各不相同，E-cadherin 表達的陽性物質(zhì)定位于細胞間連接和細胞膜處，以細胞膜著色為主。其中陽性腫瘤細胞數(shù)>90%為(),50%～90%為(),10%～50%為(+)，<10%為(-)，E-cadherin表達(+、-)均表示陰性表達，E-cadherin表達(、)均表示陽性表達[6]。Snail主要表達于細胞核/漿，按染色強度的深淺分為：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無著色，0分。按著色細胞百分比分為：一個視野內(nèi)著色細胞>76%為4分，51%～75%為3分，11%～50%為2分，1%～10%為1分，陰性0分。兩項得分相乘，滿3分為(+)，4分為()，5分以上為()。(-、+)為Snail陰性表達，(、)為Snail陽性表達[7]。

3.2 統(tǒng)計學方法:用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗(χ2)，等級數(shù)據(jù)應用秩和檢驗。當P<0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 E-cadherin及Snail的表達情況以及相關性

1.1 E-cadherin及Snail表達情況：E-cadherin在實驗組中陽性表達率為58.18%(32/55)，對照組中陽性表達率為98.18%(54/55)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(圖1～4)。Snail在實驗組中陽性表達率為87.27%(48/55)，對照組中陽性表達率為12.73%(7/55)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(圖5～8)。

1.2 E-cadherin及Snail的相關性：由癌旁組織到乳腺浸潤性導管癌組織，E-cadherin的陽性表達降低，而Snail的陽性表達增加，在乳腺浸潤性導管癌組織中，Snail的陽性表達明顯高于E-cadherin，因此E-cadherin和Snail的表達呈明顯的負相關(r=-0.341，P<0.01)。見表1。

表1 E-cadherin及Snail在對照組及實驗組中的表達

2 E-cadherin和Snail分別與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系

2.1 E-cadherin的表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系:E-cadherin的表達與患者是否絕經(jīng)、乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小、ER無關聯(lián)(P>0.05)，與患者年齡、乳腺浸潤性導管癌組織學分級、HER-2相關，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。見表2。

2.2 Snail的表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系:Snail的表達與患者年齡、乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小無關聯(lián)(P>0.05)，與乳腺浸潤性導管癌組織學分級、ER、HER-2相關，且差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

表2 E-cadherin的表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系

臨床病理特征分組 E-cadherin[例(%)]-級、+級級、級(%) χ2值P值年齡(歲)大于35歲 2(3.64)14(25.45) 7.9710.005小于35歲 21(38.18)18(32.73)月經(jīng)情況絕經(jīng)前 12(21.82)19(34.55) 0.2820.595絕經(jīng)后 11(20.00)13(23.64)乳腺癌腫瘤大小(cm)小于5 9(16.36)18(32.73) 1.5690.210大于5 14(25.45)14(25.45)組織學分級I級 8(14.55)2(3.64) 9.4940.009II級 12(21.82)17(30.91)III級 3(5.45)13(23.64)ER— 7(12.73)10(18.18) 0.8410.840+ 11(20.00)17(30.91) 3(5.45)4(7.27) 2(3.64)1(1.82)HER-2陽性 2(3.64)15(25.47) 9.1340.001陰性 21(38.18)17(32.73)

表3 Snail的表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系

討 論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移為一種多因素所造成的分階段過程。腫瘤細胞的浸潤轉(zhuǎn)移是腫瘤患者死亡的重要因素。超過80%的腫瘤來源于上皮組織，在上皮源性的腫瘤中可以看到細胞間粘附和細胞極性的缺失。如用免疫組化法對頭頸部腫瘤進行研究，結(jié)果會發(fā)現(xiàn)這些腫瘤組織中存在E-cadherin的表達減少，甚至缺失[8]。

E-cadherin是上皮細胞表面最重要的細胞間粘附分子之一，是典型的上皮性腫瘤的形成和浸潤轉(zhuǎn)移的抑制基因。E-cadherin介導的細胞粘附功能的缺失與所有上皮源性腫瘤細胞的分化、侵襲鄰近組織和遠處轉(zhuǎn)移的過程有關，而且可能在腫瘤的早期發(fā)生發(fā)展階段中產(chǎn)生重要的作用。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesen-chymal transition,EMT)[9-10]可以減弱E-cadherin的細胞間的黏附，并且增加細胞的運動性，使細胞侵入周圍組織。E-cadherin與乳腺癌諸多生物學標記因子的關系尚不十分明確[11]，與乳腺癌組織學分級具有一定的相關性[12]。

Rakha EA等利用免疫組化和組織芯片技術檢測了E-cadherin在1665例乳腺侵襲性非小葉癌患者的表達水平，并且長期臨床隨訪[13]。單因素分析顯示，E-cadherin的表達與腫塊體積大、組織學分級等不良預后因素有關系，與雌激素受體表達陰性和遠處是否轉(zhuǎn)移存在關系[14]。這個觀點在本次實驗中也得到了證實。

Snail已經(jīng)被證明抑制E-cadherin的表達，在進展過程中觸發(fā)EMT的發(fā)生,并且認為對Snail直接作用的靶基因是E-cadherin。Blanco等[15]分析了乳腺導管癌中的E-cadherin失活的不同機制，從而提出了Snail在人原位癌中的表達。EMT在腫瘤細胞的侵襲和遠處轉(zhuǎn)移中起著重要作用，因而成為腫瘤研究中的一個熱點[16]。EMT的中心環(huán)節(jié)是細胞運動能力和細胞間連接的崩解，其最重要的標志是上皮性標志物E-cadherin的丟失[17]。有研究表明，在上皮細胞去分化中，E-cadherin表達往往下降，而這種下降受轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控[18]，E-cadherin在EMT的過程中具有雙重作用：細胞的粘附和信號的轉(zhuǎn)導。Snail可能通過抑制E-cadherin的表達誘發(fā)EMT[19]，從而使上皮間連接破壞，導致癌細胞間黏附松散，容易脫離原發(fā)灶而發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。復習相關文獻，可知Snail高度表達于乳腺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、宮頸癌[20]中。本文研究可提示Snail在乳腺浸潤性導管癌中的表達是升高的，E-cadherin 的表達是降低的，兩者呈顯著的負相關，且二者均與乳腺浸潤性導管癌的病理分級、HER-2的表達密切相關。

綜上所述，Snail 及E-cadherin 的高表達是患者乳腺浸潤性導管癌發(fā)生、進展以及轉(zhuǎn)移的重要生物學標志。Snail 及E-cadherin 的有效檢測，對于乳腺浸潤性導管癌的轉(zhuǎn)移與預后，具有非常重要的意義，并且安全性較高。