不規則抗體篩查在孕期檢查中的應用價值探究

尹超群

重慶市合川區人民醫院輸血科，重慶 401520

新生兒溶血癥（hemolytic disease of newborn）是一種由母嬰血型不合所引起的疾病之一[1]，多發于新生兒，母嬰血型不合時便可產生不規則抗體，而不規則抗體是引發新生兒溶血癥發生的主要因素[2]。因此，想要提前了解新生兒的溶血癥發生情況，在孕婦產前實施不規則抗體篩查極為重要。所以在該次研究中，該院將2016年10月—2018年6月期間在該院接受產前檢查的150例夫婦血型不合孕婦作為研究對象，對不規則抗體篩查在孕期檢查中的應用價值進行了研究分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將在該院接受產前檢查的150例夫婦血型不合孕婦作為該次研究的主要對象，將其作為研究組，所有150例孕婦，年齡范圍在22～38歲之間，孕婦平均年齡（27.5±8.3）歲，孕婦懷孕次數在 1～5 次之間，平均懷孕次數（2.2±1.0）次；另選取150例夫婦血型不合孕婦作為對照組，所有150例孕婦，年齡范圍在22～39歲之間，孕婦平均年齡（27.1±7.9）歲，孕婦懷孕次數在1～5次之間，平均懷孕次數（2.1±0.9）次。該院征求了所有孕婦及其家屬的同意，該次研究同時得到倫理委員會的許可。兩組孕婦的基礎信息經檢驗差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 新生兒溶血癥診斷標準

①新生兒出生3 d之內，出現黃疸癥狀，且癥狀逐漸加重；②新生兒出生1～4 d內，未早產新生兒血清總膽紅素含量達到220.6 μmol/L以上，早產新生兒血清總膽紅素含量達到256.5 μmol/L以上，且持續2周以上；③新生兒未由于其他因素而引發溶血癥[3]。

1.3 研究方法

該院為研究組150例孕婦進行不規則抗體篩查，對照組150例孕婦不進行不規則抗體篩查。該次研究中用到的儀器和試劑主要包括強生專用離心機和孵育器、單克隆抗A單克隆抗B抗體、RhD(IgM)抗體、巰基乙醇應用液、標準紅細胞、IgG抗人球檢測卡等。

1.3.1 不規則抗體檢測步驟 患者不抗凝血液或EDTA.K2 抗凝血 2～3 mL，3 400 r/min 離心 5 min，離心備用。檢測前將未開的抗人球蛋白檢測卡置于離心機當中，離心5 min，隨后取出備用。在抗人球蛋白檢測卡上填寫受血者的姓名、住院號、篩選細胞編號等基礎信息，并撕掉卡上的封條。接著在每孔中加入bliss液1滴，使用微量移液器加入受血者血清或血漿40 μL，隨后在相應編號孔中滴加濃度為3%的I、II、III號譜紅細胞各10 μL，再將檢測卡放入孵育箱當中10 min，最后將其放入離心機當中進行5 min的離心處理，并觀察結果。若3組細胞均無凝集，則抗體篩選為陰性；若3組細胞任一組或一組以上出現凝集，則抗體篩為陽性。

1.3.2 ABO血型和RhD血型檢查步驟 該次研究采用試管法，患者EDTA.K2抗凝血2～3 mL，3 400 r/min離心5 min，取一試管，向其中加入1 mL鹽水和40 μL積壓紅細胞，混勻后制成濃度為3.8%的紅細胞懸液備用。

（1）ABO血型檢測：①正定型：取A、B兩支試管，試管中分別加入抗-A血清和抗-B血清1滴，并在試管中各加入1滴待檢測紅細胞懸液，搖勻后在3400r/min的轉速下離心15 s。若A管血清凝集，B管無凝集，則正定型為A型；若A管無凝集，B管血清凝集，則正定型為B型；若A、B管均無凝集，則正定型 O型；若A、B管均凝集，則正定型為AB型。

②反定型：配制3.8%的A、B、O標準紅細胞，取3支試管分別標記A、B、O后向各管中加入被檢血清或血漿1滴，再向相應試管中加入A、B、O標準紅細胞懸液各1滴，搖勻后在3 400 r/min的轉速下離心15 s。若A和O細胞不凝集，B細胞凝集，則反定型為A型；若B和O細胞不凝集，A細胞凝集，則反定型為B型；若O細胞不凝集，A、B細胞均凝集，則反定型為O型；若A、B、O細胞均不凝集，則反定型為AB型[4-6]。

③正反定型必須一致，才能出具患者的血型鑒定報告。

（2）RhD血型檢測：取一試管加入1滴RhD(IgM)抗體試劑，然后加1滴待檢紅細胞懸液，混勻后3 400 r/min離心15 s，若出現紅細胞凝集，則為RhD陽性；若無紅細胞凝集，則為RhD陰性。

1.3.3 lgG抗A/B效價測定 在lgG抗A/B效價測定方面，分別取研究組夫婦血清和2-Me應用液各0.2 mL，將試管口塞緊，置37℃水浴2 h以中和完全抗體。接著取小試管10支，用蠟筆編1～10號，在每管中加生理鹽水0.2 mL，在第一管中加中和血清0.2 mL，作倍量稀釋。然后將未開的IgG抗人球檢測卡放入專用離心機離心5 min備用，在IgG抗人球檢測卡上標明患者姓名、待測孔編號，撕掉卡上的封條，在各待測孔加入5%A或B型紅細胞懸液10 uL，再加入相應編號試管中的倍量稀釋中和血清40 uL。最后將卡放入37℃專用孵育器中孵育10 min，移出放入專用離心機離心5 min，取出觀察結果。以紅細胞凝集的最高稀釋度的倒數即為lgG抗A/B效價。如果效價在1:64及以上則為陽性，并對效價在1:64及以上的孕婦進行護理干預，反之則為陰性。如果孕婦為O血型，丈夫為AB血型，則需要進行lgG抗A和抗B效價測定，如果夫婦二人的血型相符合，則不需要進行lgG抗A/B效價測定[7-8]。

檢查結束后，對研究組孕婦不規則抗體檢出情況和兩組新生兒溶血癥發生情況進行調查。

1.4 統計方法

使用SPSS 19.0統計學軟件處理數據并進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，進行t檢驗，孕婦不規則抗體檢出率和新生兒溶血病發病率用百分數表示，進行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 孕婦不規則抗體檢出情況

研究組150例孕婦，經lgG抗A/B效價檢查，lgG抗A/B效價1∶64及以上孕婦77例 （51.33%），lgG抗A/B效價1∶64以下孕婦73例（48.67%）；經不規則抗體檢測，陰性孕婦140例（93.33%），陽性孕婦10例（6.67%）。 見表 1。

表1 研究組孕婦不規則抗體檢出情況[n(%)]

2.2 新生兒溶血病發生情況

在新生兒溶血病發生情況方面，研究組中144例（96.00%）新生兒未發病，6 例（4.00%）新生兒發病，其中5例新生兒血清總膽紅素＜205 μmol/L，1例新生兒血清總膽紅素在205～300 μmol/L之間；對照組中127例（84.67%）新生兒未發病，23例（15.33%）新生兒發病，其中6例新生兒血清總膽紅素＜205 μmol/L，12例新生兒血清總膽紅素在205～300 μmol/L之間，5例新生兒血清總膽紅素＞300 μmol/L。數據經檢驗差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 兩組新生兒溶血病發生情況對比[n(%)]

3 討論

新生兒的血型由父母雙方的血型來確定[9]，當新生兒從父親遺傳來的血型抗原為新生兒母親沒有的，新生兒紅細胞進入母體后使新生兒母親產生相應的抗體，產生抗體后由胎盤進入新生兒體內，最終引發免疫反應的發生，導致新生兒發生溶血病[10-11]。因此，在孕婦生產前實施有效的檢查，并根據檢查結果進行針對性的干預治療具有重要的臨床意義。在該次研究中，經不規則抗體篩查和lgG抗A/B效價測定，研究組中不規則抗體陽性孕婦10例，陽性率為6.67%，效價在1∶64及以上的孕婦77例，占全組的51.33%，孕婦通過合理有效的護理干預后，研究組中發生溶血病的新生兒僅6例，新生兒溶血病發生率為4.00%，對照組中發生溶血病的新生兒多達23例，新生兒溶血發生率高達15.33%，數據經檢驗差異有統計學意義（P＜0.05）。 在劉福慧等人[12]的研究當中，經不規則抗體篩查和lgG抗A/B效價測定的孕婦，更根據檢查結果進行系統性干預，生產后新生兒溶血病發生率僅為6.00%，低于對照組新生兒溶血病的發生率（15.00%），與該次研究的結果相對比，基本吻合。

綜上所述，在孕婦懷孕期間進行不規則抗體篩查，對于預防孕婦產后新生兒溶血病診斷具有重要意義。