不同時間對新鮮冰凍血漿的質量參數影響

(商丘市中心血站，河南 商丘 476100)

新鮮冰凍血漿(Fresh frozen plasma,FFP)是血液在采集后6～8 h內分離，-50℃迅速冷凍，-30℃中保存1年，包含幾乎全部凝血因子(不穩定因子FⅤ和FⅧ)，新鮮冰凍血漿主要包含免疫球蛋白、凝血因子及血漿蛋白，主要治療和預防出血性疾病、凝血性疾病及大量輸血導致的凝血功能障礙[1-3]。目前我國醫院尚未全面實行冷鏈箱，無法對血漿應用全程監控，血漿的不穩定性及融化后不及時輸注嚴重影響臨床治療效果[4]。研究表明多袋血輸注時間多為190～330 min，無法證明所輸血液是否符合存放要求，超出時限的血液是否應當報廢，是目前無法解決的事情[5]。本研究收集100份輸血科發出的血漿，分析不同時間點的血漿凝血因子及凝血功能，旨在探索不同時間對新鮮冰凍血漿的質量參數影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年12月～2017年6月100份輸血科發出的血漿，所有血漿均來源于中心血站采集的無償獻血者，并完全合格血漿。無償獻血者年齡選取18～22歲，采取3 300 g，15 min低溫離心，所有血漿均采用虹吸法制備，每份要求血站留取15～20 mL。-20℃保存。

1.2 方法

37℃血漿融化儀中融化100份新鮮冰凍血漿，融化后的冰凍血漿于超凈臺中，遵循無菌操作對其進行分袋處理，共6袋，分別室溫下放置0 h、0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h，分別對應對照組、實驗組A、實驗組B、實驗組C、實驗組D、實驗組E。因不同人血液成分基礎值有較大波動，故以同一血漿標本在室溫下放置0 h 為對照組，排除個體差異的干擾。實驗中主要儀器及試劑血漿融化儀(NAI-XYJ，上海那艾精密儀器有限公司)，生物安全柜(1300 系列 II 級 A2 型，賽默飛公司)，全自動血凝儀(CS-2000，日本SYSMEX公司)，PC，ATⅢ，FⅤ和FⅧ凝血因子試劑盒等均由sigma公司生產。凝血因子FⅧ∶C、凝血因子FⅤ∶C、抗凝血酶( AT) 和蛋白C( PC) 均采用sigma公司生產試劑盒檢測，凝血酶原時間( PT) 、活化部分凝血活酶時間( APTT) 、纖維蛋白原( FIB)均采用全自動凝血分析儀進行檢測。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 對照組與實驗組凝血因子變化情況(見表1)

2.2 對照組與實驗組凝血功能變化

0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h后的PT、APTT、Fbg及INR與0 h比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 對照組與實驗組凝血因子變化情況

注：1)與對照組比較，P<0.05

表2 對照組與實驗組凝血功能變化

3 討論

新鮮冰凍血漿是目前醫院常見的血液成分，主要治療和預防出血性、凝血性疾病或大量輸血導致的凝血功能障礙，同時也有利于提高患者的血漿蛋白水平[6]。《臨床輸血技術規范》指出37℃水浴后的新鮮冰凍血漿應當最多在室溫放置2h輸注，即使不能2h之內輸注應當低溫(2～6℃)保存24h之內。但冷鏈箱無法在臨床普及，因此臨床科室執行具有一定的困難。目前，室溫放置時間對新鮮血漿質量的影響尚無權威研究[7]。凝血酶原時間( PT) 是外源性凝血系統篩選試驗，主要反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ，Ⅶ、Ⅹ和纖維蛋白原的功能與水平，活化部分凝血活酶時間( APTT)是內源性凝血系統篩選試驗，主要反映凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ功能與水平，纖維蛋白原( FIB)是凝血過程中主要蛋白質，以上指標均能夠反映血漿凝血功能。凝血因子Ⅴ為不穩定因子，容易降解，凝血因子Ⅶ和Ⅷ在不同時段制備差別較大，半衰期為8～12 h，隨著融化后時間的延長將不斷下降，直至完全失去活性[7]。

本研究顯示，PT、APTT、Fbg及INR在0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h均與0 h差異無統計學意義(P>0.05)。PT為外源性凝血系統，主要反映Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ等凝血因子，12h之內無變化。表明外源性凝血因子多為穩定因子。Fbg可能是特殊的穩定結構導致12 h之內無變化。但APTT隨時間的變化與陳敬銀等[8]報道的不一致，可能原因分析為本研究所有100例血漿均為未經濾白全血虹吸法制備的。國外學者[9]報導全慮白全血制備血漿與非慮白全血制備血漿相比較，能夠減弱止血功能的細胞微粒。

凝血因子Ⅴ和Ⅷ均為不穩定因子，體外時間越長活性降低越多。本研究發現，放置8h后凝血因子Ⅷ明顯下降，差異有統計學意義(P<0.05)，可能與半衰期具有一定的關系。與陳敬銀[8]報道較為一致。本研究還檢測了37℃水浴后的新鮮冰凍血漿的AT和PC活性，超過8 h的AT和PC活性明顯降低。輸注新鮮冰凍血漿不僅能夠增加促凝因子，還增加抗凝血因子，輸注新鮮冰凍血漿不僅僅只有止血功能。國外研究報道，全血采集后24 h后分離血漿檢測生物學效價與8 h分離血漿的凝血因子Ⅷ略有下降，其他成分(PC、PS及AT)無變化，但與本研究中放置12 h的AT、PC、FⅧ∶C 下降的結果不一致，可能與解凍過程相關。

綜上所述，37℃水浴后的新鮮冰凍血漿放置8 h后AT、PC等抗凝成分和FⅧ∶C促凝成分均減少，APTT、PT、INR、Fbg甚至放置12 h之內基本無變化。