關 磊,吳廣璐,代明琴,余韓潔鈺,董 平,李 敬**,梁興國,2
(1.中國海洋大學食品科學與工程學院,山東 青島 266003;2.青島海洋科學與技術國家實驗室海洋藥物與生物制品功能實驗室,山東 青島 266235)
蝦青素(Astaxanthin)即3,3′-二羥基-4,4′-二酮基-β,β′-胡蘿卜素,結構中含有不飽和酮基和羥基共軛雙鍵結構,因而具有比β-胡蘿卜素更強的抗氧化活性,是已知的具有最強抗氧化活性的天然物質[1-2]。此外,蝦青素還具有良好的抗腫瘤活性、免疫增強活性,并可預防心血管疾病,因此食用蝦青素及其制品對保障人類健康具有重要的意義[3-5]。然而,蝦青素水分散性和穩定性差等缺陷不僅降低其生物利用率,而且嚴重限制了它在水基食品配方中的使用[6]。
為改善蝦青素的水分散性和穩定性,研究者們嘗試利用微/納米技術包埋/分散蝦青素,獲得了組成和理化性質各異的蝦青素水分散體系。例如Bustos-Garza等[7]以100%乳清蛋白為壁材制備的蝦青素微膠囊,其水分散性和穩定性良好。Li等[8]采用高壓均質法制備的固體脂質蝦青素納米粒具有明顯的光熱穩定性。劉楠等[9]制備的蝦青素/卵磷脂/殼聚糖納米粒的ζ電位在42~61 mV之間,分散體系穩定。然而,穩定分散的蝦青素微/納米體系能否改善蝦青素的體內抗氧化活性,以及其體內活性作用主要受哪些理化因素的影響等問題至今尚不清楚。藥劑學研究發現,藥物劑型對藥物療效的發揮起著至關重要的作用[10]。研究表明,納米包載的阿霉素抗腫瘤效果優于微膠囊包載的阿霉素,微膠囊包載的阿霉素的抗腫瘤效果優于游離的阿霉素[11-13],由此推測載體粒子的粒徑大小會對所包載物質活性作用的發揮產生重要影響。目前,關于蝦青素制品的抗氧化活性已有較多研究,但多集中于體外研究,對蝦青素在體內的抗氧化活性,特別是不同蝦青素劑型在體內活性和生物利用率方面缺乏系統和深入的研究與報道。
本文基于對蝦青素油與水分散型蝦青素制品(微囊粉和納米粉)理化性質的比較分析,重點研究了蝦青素劑型對蝦青素在體內發揮抗氧化活性的影響。選取蝦青素納米粉劑(Astaxanthinna nopower,Ast-nano)、蝦青素微囊劑(Astaxanthin microcapsule,Ast-micro)和蝦青素油(Astaxanthin oil,Ast-oil)為研究對象,通過建立急性酒精氧化損傷模型,比較3種不同劑型蝦青素制品的體內抗氧化效果,明確不同蝦青素劑型在體內功能差異,為蝦青素功能制品的合理高效利用提供理論依據及實驗支持。
蝦青素(Astaxanthin,Ast)、鮭魚精DNA(Salmon sperm DNA,DNA)購自Sigma公司;蝦青素油(Ast-oil)購自湖北雅仕達生物技術有限公司;蝦青素微囊劑(Ast-micro)由中國海洋大學食品科學與工程學院薛長湖教授惠贈;殼聚糖(Chitosan;分子量:70 KDa;脫乙酰度:90.25%)、殼寡糖(Water soluble chitosan;分子量:5 KDa;脫乙酰度:90%)購自浙江澳興生物科技有限公司;賴氨酸買自河南巧手食品添加劑有限公司;超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)試劑盒、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)試劑盒、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)試劑盒、蛋白質羰基(Protein carbonyl,PC)試劑盒及血漿和組織中蛋白測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所;乙醇、丙酮及甘露醇均為國產分析純。
昆明種雄鼠(25~30 g)購自青島大任富城畜牧有限公司。
旋轉蒸發器:RE-5210型,上海亞榮生化儀器;Rotavapor R-3型,瑞士Buchi公司;真空泵:V-700型,瑞士Buchi公司;精密增力電動攪拌器:JJ-1型,常州國華電器有限公司;激光粒度儀:3000HS型,英國Malvern儀器公司;場發射掃描電子顯微鏡:JSM-6700F型,掃描電子顯微鏡:JSM840型,日本電子株式會社;高效液相色譜儀:Chromaster型,配置二極管陣列檢測器(DAD),日本日立公司;真空冷凍干燥機:RLPHR 1-4LD型,德國CHRIST公司。
1.3.1 蝦青素納米粉劑(Ast-nano)的制備 參考Wang等[14]的方法略作調整,將蝦青素溶于乙醇/丙酮溶液(3∶1,v/v)后,用0.45 μm孔徑的聚偏氟乙烯膜抽濾得蝦青素溶液,調整鮭魚精DNA和殼聚糖的濃度為0.01 mg/mL,制備得到蝦青素/DNA/殼聚糖納米懸液,室溫避光保存。
選用殼寡糖和甘露醇、殼寡糖和賴氨酸兩種凍干保護劑體系制備Ast-nano:將納米懸液與殼寡糖/甘露醇溶液混合,使二者的最終濃度分別為0.05%(m/v)和0.25%(m/v),-80 ℃預凍8 h后進行冷凍干燥,收集粉紅色粉末,記為Ast-nano 1,最終凍干粉中保護劑含量約為70%。相似地,將納米懸液與殼寡糖/賴氨酸溶液混合,使二者在混合液中的濃度分別為0.05%(m/v)和0.005%(m/v),冷凍干燥,記為Ast-nano 2,最終凍干粉中保護劑含量約為65%。避光保存。
1.3.2 各劑型蝦青素制品的理化性質表征
微觀形態觀察:電子顯微鏡觀察新鮮制備Ast-nano及蝦青素微囊劑(Ast-micro)的微觀形態,將Ast-nano懸液滴加至云母板后置于室溫下干燥,同時將Ast-micro直接固定在云母板上,將樣品板放入噴霧室噴鍍金粉后,2個樣品分別用場發射掃描電子顯微鏡(FE-SEM)和掃描顯微鏡(SEM)觀察[14-15]。Ast-nano和Ast-micro的平均粒徑利用Nano Measure1.2軟件計算分析得到。
水合粒徑及ζ電位測定:激光粒度儀測定新鮮制備Ast-nano懸液及Ast-micro復溶后粒子的水合粒徑,多分散指數(Polydispersity index,PDI)和ζ電位[14]。
蝦青素含量測定:通過高效液相色譜(HPLC)檢測Ast-nano、Ast-micro和蝦青素油(Ast-oil)中蝦青素含量。各取3 mL Ast-nano和Ast-micro水溶液及Ast-oil油溶液用二氯甲烷/甲醇混合液(1∶1,v/v)重復萃取3次,收集下層萃取液旋轉蒸干后,再用1.5 mL二氯甲烷/甲醇混合液(1∶3,v/v)復溶,0.22 μm濾膜過濾后,進樣檢測[14],蝦青素含量的計算公式為:

(1)
溶解時間分析:分別稱取500 mg的混合均勻的Ast-nano和Ast-micro放入不同的20 mL血清瓶中,隨后加入5 mL去離子水,震蕩,計算加入去離子水到溶解完全的時間[16]。
1.3.3 動物分組、給藥及氧化損傷
分組方法:小鼠在25°C、12 h光照的房間中,自由飲水、覓食,適應1周后開始實驗。將40只小鼠按體重隨機分為5組,每組8只,設置為對照組、模型組、Ast-micro組、Ast-oil組、Ast-nano組(采用Ast-nano 1),實驗中動物均喂養普通飼料,自由飲水。
給藥方法:以蝦青素劑量為標準,Ast-micro、Ast-oil和Ast-nano的給藥劑量均為0.9 mg/kg·BW,對照組和模型組給予蒸餾水。連續灌胃30天,末次灌胃后,進行酒精急性氧化損傷。
氧化損傷:急性酒精氧化損傷方法參照中國食品藥品監督管理局于2012年制定的《抗氧化功能評價方法》中的標準方法,即在30天給藥結束后,模型組和實驗組(Ast-micro組、Ast-oil組和Ast-nano組)一次性給予50%乙醇12 mL/kg·BW,對照組給予同等體積的生理鹽水,自由飲水,6 h后取材(對照組不作處理,不禁食取材)。
1.3.4 樣品采集及測定 實驗結束,眼球取血并收集組織,部分全血制備2%溶血液;部分全血,2 000 r/min離心10 min分離血漿,置于-80 ℃待測;取一定質量的肝組織,生理鹽水沖洗、擦干、稱重、剪碎,置于組織勻漿液中,20 000 r/min勻漿10 s,間歇30 s,重復3次,制成一定質量分數組織勻漿(m/v),3 000 r/min離心10 min,取上清液置于-20 ℃待測。血液和肝臟中的谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、蛋白質羰基(PC)及組織總蛋白含量等指標均采用試劑盒測定完成。
計算模型組指標相對于對照組指標的變化率CRM/C(Change Rate,%):
(2)
計算實驗組指標相對于模型組指標的變化率CRX/M(Change Rate,%):
(3)
(2)和(3)式中指標分別指代各組的GSH、MDA、SOD及PC。
1.3.5 體重記錄及臟器指數的測定 實驗過程中,每2天測一次體重,記錄小鼠生長變化。實驗結束后,解剖并觀察心、肝、脾、肺、腎、胃、腦等主要臟器。考慮動物體重差異會造成個體之間臟器的重量差異較大,對組織進行臟器指數換算,即:

(4)

為分析蝦青素納米粉劑(Ast-nano)、蝦青素微囊劑(Ast-micro)和蝦青素油(Ast-oil)之間理化性質的差異,對它們的理化性質進行表征,結果如圖1和表1所示。首先,利用掃描電鏡觀察了Ast-nano和Ast-micro的微觀結構,由圖1可見,新鮮制備的Ast-nano呈規則的球形,分散均勻且粒子大小均一,平均粒徑約為50 nm;Ast-micro呈球形或橢球形,但粗糙的表面存在塌陷的情況,且可觀察到沙粒狀小顆粒(約10 μm)覆蓋于微球表面或已剝離球體表面,由Nano Measure1.2分析得到Ast-micro的平均粒徑為292 μm。隨后,選擇不同的凍干保護體系用于Ast-nano的冷凍干燥,并獲得了Ast-nano 1和Ast-nano 2兩種納米粉劑,對比溶解速度可知,Ast-micro最易溶于水,10 s內可實現快速溶解,表觀溶解度達800 mg/mL;Ast-nano 1和Ast-nano 2均可在30 s內充分溶解,且保護劑溶解度高(S賴氨酸=63 g)、添加量少的Ast-nano 2較保護劑溶解度低(S甘露醇=18.2 g)、添加量大的Ast-nano 1的溶解速度快,說明凍干保護劑的親水性和添加量對納米體系的溶解速率有較大影響。進一步檢測微/納米懸液中粒子的水合粒徑,以及PDI和ζ電位(PDI值和ζ電位作為表征膠體分散體系均勻度和穩定性的指標)發現[17],Ast-nano 1、Ast-nano 2和Ast-micro在復溶后的水合粒徑分別為547、305和190 nm,Ast-micro復溶后的水合粒徑顯著小于Ast-nano復溶后的水合粒徑,但Ast-micro懸液的PDI值為0.48,ζ電位為-18 mV,較大的PDI和近電中性的ζ電位說明Ast-micro的水相分散體系的均勻度和穩定性較差。而不同的Ast-nano:Ast-nano 1和Ast-nano 2的ζ電位均大于40 mV,特別是Ast-nano 2的PDI小于0.3,說明Ast-nano 2具有比Ast-nano 1更好的穩定性。最后,利用HPLC檢測Ast-micro和Ast-nano粉劑中的蝦青素含量,結果表明Ast-nano 2的蝦青素含量最高,高達18.34%,分別是Ast-nano 1和Ast-micro中蝦青素含量的6.35倍和2.49倍,主要得益于Ast-nano 2中保護劑添加量較少。另外,Ast-oil中蝦青素的含量最低,僅為0.31%,但其工藝相對簡單,易于產業化。
(A:新鮮制備蝦青素/DNA/殼聚糖納米混懸液場發射掃描圖;B:蝦青素微囊劑掃描圖。A:FE-SEM of freshastaxanthin/DNA/chitosan nano-suspensions;B:SEM of Ast-micro.)
圖1 新鮮制備蝦青素/DNA/殼聚糖納米混懸液及蝦青素微囊劑的掃描電鏡圖
Fig.1 Scanning electron micrographs of fresh astaxanthin/DNA/chitosan nano-suspensions and Ast-micro

表1 不同劑型蝦青素制品的理化性質結果Table 1 Results of physical and chemical properties of different astaxanthin products
注:蝦青素含量是指蝦青素納米粉劑、蝦青素微囊劑或蝦青素油中蝦青素所占比例;標有不同字母的數據表示相互之間差異顯著(P<0.05)。
Note:Astaxanthin content was the proportion of astaxanthin in Ast-nano,Ast-micro or Ast-oil;Data with different letters indicated significant differences (P<0.05).
①Sample;②Astaxanthin content;③Dissolution time;④Hydrous particle diameter;⑤Poly dispersity index(PDI);⑥Zeta potential;⑦Ast-micro;⑧Ast-oil
為評價蝦青素納米粉劑(Ast-nano)、蝦青素微囊劑(Ast-micro)和蝦青素油(Ast-oil)在體內抗氧化活性的差異,本研究建立了急性酒精氧化損傷模型。建模后,模型組小鼠均出現行動緩慢、站立不穩、嗜睡等明顯的酒精中毒現象,其與對照組小鼠各生化指標的比較結果見圖2。在模型組中,無論血漿還是肝臟,生化指標與對照組相比均存在顯著變化,GSH含量和SOD活力顯著下降,MDA與PC含量顯著增加。血漿和肝臟中GSH含量均超過21%,SOD活力下降超過17%,MDA與PC含量上升均超過25%,血漿中PC含量變化最大,變化率為83%。結果證實,模型組小鼠體內GSH含量顯著下降,顯示出GSH的耗竭,且酒精大量攝入造成的氧化應激使脂質和蛋白質分別氧化產生大量的MDA和PC,同時導致體內抗氧化酶SOD的活性降低,表明成功建立了小鼠急性酒精氧化損傷模型。

圖2 急性酒精氧化損傷小鼠肝臟和血漿中谷胱甘肽、丙二醛、超氧化物歧化酶及蛋白質羰基的變化率(n=8)Fig.2 Change rate of GSH,MDA,SOD and PC in liver and plasma of mice with acute alcohol oxidative injury (n=8)
2.3.1 小鼠體質量變化 為分析蝦青素納米粉劑(Ast-nano)、蝦青素微囊劑(Ast-micro)和蝦青素油(Ast-oil)對小鼠整體生存狀態的影響,本研究連續記錄了小鼠30天內的體質量變化(見圖3),各組小鼠體質量變化均無顯著差異(P>0.05),各組小鼠體質量均在正常波動范圍內逐漸增長,實驗結束時各組小鼠的體質量均維持在40 g左右。實驗過程中小鼠均無不良癥狀出現,健康狀態良好,未出現死亡現象,表明Ast-nano、Ast-micro和Ast-oil均對小鼠體質量變化無顯著影響。然而,Ast-oil組小鼠體質量較其余各組略高,分析原因是Ast-oil中的油脂含量較高造成小鼠體質量增長較快。
2.3.2 臟器指數 臟器指數可反映動物總體營養狀態及器官狀況,因此,本研究在實驗結束后,解剖并觀察心、肝、脾、肺、腎及腦等主要組織的狀態,均未發現異常。將組織稱重并計算臟器指數,如圖4所示,各組小鼠的心指數均在0.5%左右,脾指數在0.23%左右,肺指數在0.5%左右。肝、腎及腦等組織的臟器指數均在一定范圍內波動,肝臟指數波動范圍較大,為4.16%~4.64%,而腎指數和腦指數的波動范圍較小,分別為1.27%~1.44%和0.95%~1.13%。臟器指數在正常范圍內產生波動的現象是由動物個體差異造成的[18],各組小鼠的心、肝、脾、肺、腎及腦等的臟器指數之間并不存在顯著性差異(P>0.05)。因此,實驗表明Ast-nano、Ast-micro和Ast-oil灌胃給藥后均不會對小鼠臟器產生影響。
為評價蝦青素納米粉劑(Ast-nano)、蝦青素微囊劑(Ast-micro)和蝦青素油(Ast-oil)在體內的抗氧化效果,本文對肝臟和血漿中GSH含量、SOD活性、MDA及PC含量進行測定,并計算實驗組生化指標相對于模型組的變化(見圖5),變化率值越大表明抗氧化效果越明顯。肝臟中檢測結果顯示,Ast-nano、Ast-micro和Ast-oil均對氧化損傷小鼠起到保護作用。然而,Ast-nano、Ast-micro和Ast-oil對氧化損傷小鼠的保護作用卻顯著不同。Ast-nano組小鼠肝臟中的GSH含量和SOD活性相對于模型組小鼠變化最為明顯,變化率分別約為80%和31%。Ast-micro組小鼠肝臟中的GSH和SOD變化率分別約為57%和23%。Ast-oil對GSH和SOD的作用效果最弱,二者的變化率分別約為39%和20%。同樣,對MDA和PC而言,Ast-nano的作果最強,變化率分別約為-38%和-41%。Ast-micro組MDA和PC的變化率分別約為-25%和-27%,Ast-oil組MDA和PC的變化率分別約為-24%和-25%,說明Ast-micro對MDA和PC作用效果略微優于Ast-oil。結果表明,不同劑型蝦青素制品對肝臟氧化后的抗氧化效果不同,Ast-nano優于Ast-micro和Ast-oil,Ast-micro優于Ast-oil。

圖3 不同蝦青素制劑(蝦青素給藥劑量均為0.9 mg/kg·BW)對小鼠體質量的影響(n=8,P>0.05)Fig.3 Effect of different astaxanthin formulations (The astaxanthin dosage was 0.9 mg/kg·BW)on the body weight of mice (n=8,P>0.05)

圖4 灌胃給藥30天后不同蝦青素制劑(蝦青素給藥劑量均為0.9 mg/kg·BW)對小鼠臟器指數的影響(n=8,P>0.05)Fig.4 Effect of different astaxanthin formulations(The astaxanthin dosage was 0.9 mg/kg·BW)on viscera index in mice after 30 days of intragastric administration(n=8,P>0.05)

圖5 蝦青素微囊劑、蝦青素納米粉劑和蝦青素油對肝臟(A)和血漿(B)中生化指標的影響(n=8,*:P<0.05)Fig.5 Effects of Ast-micro,Ast-nano and Ast-oil on biochemical indexes in the liver (A)and plasma (B)(n=8,*:P<0.05)
血漿中檢測結果顯示,Ast-nano可顯著提高GSH含量和SOD活性,降低MDA和PC含量。相較于模型組,Ast-nano組中GSH和SOD的變化率分別為47.42%和43.25%,MDA和PC的變化率分別為-36.94%和-37.69%。口服Ast-micro后,小鼠血漿中GSH和SOD相對于模型組的變化率分別為15.04%和30.85%,MDA和PC相對于模型組的變化率分別為-5.69%和-13.4%。同樣,口服Ast-oil后,血漿中的GSH、SOD及PC也會發生顯著變化,與模型組相比變化率分別為13.97%,37.23%和-14.04%。然而,令人意外的是,Ast-oil組中MDA的含量相對于模型組而言不降反增,這種現象可能是由油脂攝入過多在體內積累,進而被氧化所導致[19]。實驗數據表明蝦青素制品的不同劑型對機體氧化損傷后血液中抗氧化酶、抗氧化物質及脂質氧化和蛋白質氧化產生的抗氧化作用不同,體內抗氧化效果Ast-nano優于Ast-micro優于Ast-oil。
目前,商品蝦青素制品主要分為水分散和油分散兩大類。由于蝦青素見光易分解,易被氧化等特點[20-21],油分散蝦青素多采用膠囊配方,且在市場較為常見。水分散蝦青素制品主要有固體粉劑和乳劑,相對于乳劑,固體粉劑更利于長期穩定和貯運。粉劑溶于水后為膠體或懸濁液體系[22-24]。蝦青素含量和溶解時間為評價固體粉劑水分散效果的兩大重要指標。本文對所選用的蝦青素納米粉劑(Ast-nano)和蝦青素微囊劑(Ast-micro)進行了蝦青素含量、溶解時間等理化性質的測定。實驗結果顯示,Ast-nano和Ast-micro中蝦青素含量分別為18.34%和7.36%,與雨生紅球藻中蝦青素含量(5%)相比分別提高了266.8%和47.2%,表明Ast-nano和Ast-micro均能顯著提高水相體系中的蝦青素含量。同時,Ast-nano、Ast-micro在冷水中的溶解時間均不超過30 s,屬于速溶制劑[25]。這些結果預示著Ast-nano和Ast-micro均可良好分散于水相體系中,大大拓展蝦青素制品的應用范圍。
在蝦青素不同劑型制備的基礎上,本文建立了急性酒精氧化損傷模型以研究不同蝦青素制劑對氧化損傷小鼠的保護作用。蝦青素能夠有效地清除氧自由基,防止氧化應激反應產生的大量氧自由基對細胞DNA、細胞膜脂質和蛋白質造成損傷,使機體維持正常狀態[26-28]。谷胱甘肽(GSH)、蛋白質羰基(PC)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定結果表明,Ast-nano、Ast-micro和Ast-oil在清除自由基、降低過氧化物和增強機體抗氧化性能等方面均具有顯著功效,然而不同劑型蝦青素制品的抗氧化效果卻不盡相同。總體而言,蝦青素水分散制劑產生的抗氧化效果優于油分散制劑,可能是由于過量油脂增加了腸道消化負擔,反而不利于Ast-oil的吸收利用[29]。這與Huo[30]和Failla[31]等報道的食品基質中的脂質種類和含量影響脂溶性類胡蘿卜素在腸道的吸收相一致。此外,令人感到意外的是蝦青素油組小鼠血漿中的MDA含量不降反升,竟比氧化損傷模型組的還高1.8%,猜測其原因可能是:油脂攝入過多在體內積累,進而被氧化所會導致血漿中MDA含量升高[32],同時過量的脂質在消化液的作用下會形成體積較大脂類混合微團,不利于脂類物質在小腸中的吸收[33]。另外,Ast-nano具有更明顯的體內抗氧化效果:Ast-nano可使氧化損傷小鼠血漿中的GSH、SOD、MDA和PC四項生化指標恢復到正常水平,而蝦青素微囊劑組小鼠血漿中GSH和MDA的變化率約為蝦青素納米粉劑組的33%和14%;同樣,Ast-nano也可使氧化損傷小鼠肝臟中的生化指標恢復至正常水平,而蝦青素微囊劑組中生化指標的相對變化率約為蝦青素納米粉劑組的70%。對于Ast-nano和Ast-micro產生的體內抗氧化差異,猜測其可能與包載蝦青素粒子的大小及所帶電荷的種類和多少等因素有關:Ast-nano復溶后的ζ電位均為正值,大于40 mV,Ast-micro復溶后的電位為-18 mV。由于小腸黏膜細胞表面分布大量的負電荷,更易于粘附和吸收正電荷納米粒[34],而且Cook等[35]研究表明,殼聚糖作為吸收促進劑可顯著增強納米粒的吸收,因此Ast-nano發揮出更佳的抗氧化效果。基于此,可知蝦青素納米制劑的抗氧化效果依次為:Ast-nano優于Ast-micro優于Ast-oil,說明水分散型的蝦青素微/納米體系顯示出比蝦青素油的更強抗氧化作用。除此之外,結果表明蝦青素對氧自由基抑制途徑均產生顯著的促進作用,各指標間的變化上差異顯著,表明蝦青素對各個抑制途徑的作用不同,這與Hirotaka等的研究結果相似[36]。
研究表明,蝦青素納米粉劑(Ast-nano)和蝦青素微囊劑(Ast-micro)均具有較好的水分散性且蝦青素含量較高,有利于蝦青素制品在水基食品和醫藥制品中的廣泛應用,從而大大拓展其應用范圍。同時,本研究還表明,不同劑型蝦青素對酒精造成的氧化應激均會產生正向作用,提高機體抗氧化酶活性和降低脂質過氧化,但不同的劑型對蝦青素抗氧化功能的發揮產生的作用不同。對比不同劑型蝦青素的抗氧化研究結果發現,納米粉劑更有利于蝦青素抗氧化功能的發揮。本研究結果為高活性蝦青素制品的開發和微/納米營養載運系統的理性設計提供了有力的理論依據和技術支持。