血清gelsolin和補體C9檢測水平與肺結核病灶侵及胸膜的相關性分析

劉長利 南琴 石海平 南芳

1陜西省結核病防治院內一科，西安710100；2陜西省結核病防治院醫務科，西安710100；3陜西省結核病防治院內七科，西安710100；4空軍軍醫大學第二附屬醫院呼吸科，西安710038

結核病是由結核分枝桿菌感染引起，盡管在減少結核病發病率方面取得了重大進展，但仍有2/5的人沒有得到診斷，并促進了結核病的傳播[1]。聯合國結核病控制全球戰略的目標是到2030年將結核病病死率降低90%，結核病發病率降低80%[2]。為實現這些目標，新的診斷工具對控制結核病流行至關重要。繼發性肺結核是成年人肺結核中最常見的類型[3]。目前，痰涂片、痰培養、肺部影像學及γ干擾素釋放試驗(interferon gamma release assay，IGRA)等檢查對繼發性肺結核診斷提供了參考，但其敏感度較低，檢驗也不方便；使用非痰標本(如血液)進行檢測，簡化檢驗操作，提高敏感度對結核病診斷和治療具有重要意義[4]。gelsolin是一種肌動蛋白結合蛋白，1979年首次在兔肺巨噬細胞中發現，在機體抗損傷方面發揮重要作用[5]。有研究表明，肺損傷患者中gelsolin的濃度顯著降低，這表明gelsolin可能是肺結核診斷的一個潛在標志[6]。補體C9由巨噬細胞產生和分泌，具有激活補體經典途徑的功能，同時能刺激外周血單核細胞、多形核細胞和/或內皮細胞[7]。有研究提示，補體C9與肺結核的生理學病變有關[8]。但gelsolin和補體C9在繼發性肺結核患者的診斷方面研究較少。因此，本研究檢測繼發性肺結核患者血清中gelsolin和補體C9水平，探討它們與肺結核病灶侵及胸膜的關系，為肺結核病灶侵及胸膜患者病情評估提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2017年1月至2018年12月在陜西省結核病防治院收治初治繼發性肺結核患者100例，根據肺結核病灶是否侵及胸膜分為未侵及胸膜組[37例，男16例，女21例，年齡(51.57±19.18)歲，年齡范圍為27～70歲]和侵及胸膜組[63例，男32例，女31例，年齡(48.07±16.31)歲，年齡范圍為22～69歲]。所有患者均符合《肺結核診斷和治療指南》[9]標準。侵及胸膜：經胸部CT掃描顯示肺實質結核病灶為浸潤病變，侵及胸膜患者病變累及臟層胸膜，導致局部胸膜反應，但不伴有胸腔積液和胸膜粘連。病例納入標準：(1)所有患者均為初治繼發性肺結核；(2)伴有不同程度肺結核癥狀(如發熱、盜汗、咳嗽、咳痰等)；(3)痰涂片、痰培養及IGRA檢測中有一項或多項指標為陽性；(4)胸部CT可見活動性肺結核征象。病例排除標準：(1)入院前接受抗生素和祛痰治療的患者；(2)合并獲得性免疫缺陷綜合征、糖尿病、矽肺的患者；(3)合并惡性腫瘤或嚴重肝腎疾病的患者；(4)其他非結核性肺部疾病的患者。本研究征得研究對象知情同意并簽署知情同意書，同時獲得醫院醫學倫理學委員會批準。

1.2 病史及標本采集 收集所有患者的臨床資料，計算體質量指數(body mass index，BMI)。進行CT檢查，根據多田顱內血腫計算公式計算肺結核病灶侵及胸膜面積[10]。痰涂片用涂片法進行檢測，痰培養用MGIT 960培養。痰菌檢查為涂片法和MGIT 960培養至少1項陽性。采集患者入院第2天清晨空腹靜脈血5 ml，離心分類血清后-80℃保存備用。用酶聯免疫吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)檢測血清中gelsolin水平，試劑盒購自美國BD公司；用免疫透射比濁法檢測血清中補體C9水平，試劑盒購自中國上海北加生化試劑有限公司；IGRA用中國海口VTI生物研究院研發生產的IGRA試劑盒(A.TB)檢測。

1.3 統計學分析 用IBM SPSS 19.0統計軟件進行統計分析。實驗結果采用±s，用t檢驗進行判斷；計數資料采用例數進行表示，用χ2檢驗進行分析；進行Pearson相關分析；以結核病灶侵及胸膜為應變量(Y)，臨床資料為自變量(X)進行Logistic多元逐步回歸分析，篩選出結核病灶侵及胸膜的影響因素；繪制出研究對象受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線，確定血清gelsolin和補體C9診斷結核病灶侵及胸膜的效能，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2 組患者臨床資料的比較 2組患者的年齡、性別、BMI和血紅蛋白之間差異無統計學意義(t=0.970、χ2=0.532、t=1.308、t=1.248，P值均＞0.05)；侵及胸膜組白蛋白、IGRA水平低于未侵及胸膜組，差異有統計學意義(t=12.274、10.917，P值均＜0.05)；侵及胸膜組痰菌檢查陽性率和gelsolin、補體C9水平高于未侵及胸膜組，差異有統計學意義(χ2=5.420、t=61.230、21.195，P值均＜0.05)(表1)。

表1 2組研究對象基本資料的比較

2.2 血清中gelsolin和補體C9與白蛋白、侵及胸膜面積、IGRA、痰菌檢查的相關性分析 血清中gelsolin和補體C9與白蛋白無相關性(r=-0.153、-0.116，P值均＞0.05)；血清中gelsolin與侵及胸膜面積、IGRA、痰菌檢查呈正相關(r=0.851、0.492、0.695，P值 均＜0.05)；血清中補體C9與侵及胸膜面積、IGRA、痰菌檢查呈正相關(r=0.641、0.430、0.510，P值均＜0.05)(表2)。

表2 血清中gelsolin和補體C9與白蛋白、侵及胸膜面積、IGRA、痰菌檢查的相關性分析

2.3 多元逐步回歸分析 進行Logistic多元逐步回歸分析，結果顯示回歸方程差異有統計學意義(χ2=16.754，P＜0.05)。血清gelsolin、補體C9和痰菌檢查陽性為結核病灶侵及胸膜的危險因素(χ2=4.689、4.431、8.552，P值均＜0.05)(表3)。

2.4 血清gelsolin、補體C9和痰菌檢查診斷結核病灶侵及胸膜的效能 血清gelsolin、補體C9和痰菌檢查診斷結核病灶侵及胸膜的ROC曲線下面積(area under curve，AUC)分別為0.88、0.74和0.89，有一定的診斷價值。3組AUC進行比較，痰菌檢查的最大，gelsolin次之，補體C9最小，但痰菌檢查和gelsolin的AUC差異無統計學意義，但痰菌檢查診斷的敏感度和特異度均最高，分別為76.64%和95.65%(表4)。

表3 結核病灶侵及胸膜的危險因素多元逐步回歸分析

3 討論

肺結核是結核病最常見的臨床表現，但也可能發生肺外形式的疾病，主要累及淋巴結和胸膜。結核分支桿菌感染后，宿主會產生復雜的反應，這對維持機體的生理穩態和清除病原體至關重要[11]。盡管一些研究已經證明gelsolin是由單核細胞和肺泡巨噬細胞產生的，但對結核病患者的gelsolin水平與疾病狀態的研究較少[12]。

結核病的發展過程包括激活促炎反應和抗炎反應，以及非免疫途徑的主要改變，這在一定程度上導致了大量的細胞損傷。除了各種其他細胞成分，肌動蛋白也會從細胞中大量滲出損傷的細胞，在此過程中被認為是耗盡的細胞外肌動蛋白。gelsolin是一種結合肌動蛋白，具有聚合、解聚和剪切肌動蛋白絲的功能，在細胞移動性、細胞骨架結構動態重排過程中的信號轉導、凋亡調節、腫瘤發生調節、機體抗損傷等方面發揮重要作用，是損傷的預后標志物[13]。gelsolin在N端具有Ca2+不敏感的肌動蛋白微絲斷裂結構域，在C端具有Ca2+敏感的肌動蛋白微絲結合結構域。這使得gelsolin可以清除循環系統中的肌動蛋白，同時維持內環境的穩定[14]。此外，gelsolin可通過直接激活血小板，促進血凝塊的形成，并對肺內皮細胞和毛細血管有負面影響[6]。因此，降低血液中gelsolin水平非常重要。研究表明，危重外科患者和嚴重外傷性患者血漿gelsolin水平顯著增加，降低gelsolin后可顯著改善預后[15]。有一些關于感染性肺疾病的研究提示，血漿gelsolin可能是肺疾病嚴重程度的候選生物標志物[16]。本研究結果顯示，肺結核病灶侵及胸膜患者血清中gelsolin水平明顯升高，并與病灶侵及胸膜面積呈正相關，因此推測gelsolin升高可能與肺結核病灶侵及胸膜有關。

補體成分在經典途徑的免疫監測中發揮著重要作用。經典補體通路的啟動發生在補體C1，在病原體刺激后啟動級聯反應，活化的補體C5b與補體C6～9結合，形成膜攻擊復合物，破壞細胞膜的完整性和質子梯度，導致細胞裂解素的形成[17]。補體C9是補體通路的終末成分，一般由肝臟產生并在血漿中循環。有研究顯示，結核患者血清補體C9水平高于健康人群，同時活動性結核患者的補體C9水平較穩定期肺結核患者高[18]。本研究結果與上述結果相一致，同時對肺結核病灶侵及胸膜具有一定的診斷價值。雖然其診斷價值低于痰菌檢查和gelsolin，但相對于痰菌檢測來說，補體C9檢測更為方便、快捷，因此，有進一步研究的價值。同時，高補體C9水平可以刺激單核細胞，對單核細胞趨化因子1的產生受到抑制，但對結核病患者外周血單核細胞或單核細胞中趨化因子1的表達情況知之甚少[19]。我們將在后續進行相關機制的研究。

綜上所述，肺結核病灶侵及胸膜患者血清中gelsolin和補體C9水平升高，可作為肺結核病灶侵及胸膜的指標。其檢測具有無創傷、操作簡單、可重復性強等特點，值得推廣引用。但本研究為單中心的研究，其結果的穩定性和重復性還是在大樣本、多中心的研究中進行驗證，我們將在后續的研究中進行完善。

表4 gelsolin、補體C9和痰菌檢查診斷結核病灶侵及胸膜的效能

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突