細(xì)胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值△

張?jiān)葡?吳紅芳

(1.河南省南陽醫(yī)專第一附屬醫(yī)院病理科 南陽 473000；2.河南省南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)病理教研室 南陽 473000)

胸腔積液作為檢驗(yàn)標(biāo)本，在細(xì)胞病理學(xué)臨床診斷方面能被高效檢測出病理相關(guān)信息等，同時(shí)能鑒別出相關(guān)疾病的病變類型和病變程度等評估疾病的重要信息[1]。但是由于漿膜腔原發(fā)性間皮瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)極為相似，臨床上過去采用的細(xì)胞涂片的處理方式結(jié)合免疫檢查的方法很難將這兩類病變細(xì)胞準(zhǔn)確區(qū)別出來。近年研究發(fā)現(xiàn)，采用細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色的檢查方法，能有效區(qū)別不同來源和不同程度病變的病變細(xì)胞。為探討這一新的病理檢查方式應(yīng)用在胸腔積液標(biāo)本檢查的臨床效果，本研究收集相應(yīng)的胸腔積液標(biāo)本作如下研究。

1 對象與方法

1.1對象

選取在2016年4月～2017年5月我院收治的胸腔積液病例共76例，對每份標(biāo)本進(jìn)行兩種方式處理：細(xì)胞塊切片處理和常規(guī)細(xì)胞涂片處理。研究對象76例中，男37例，女39例，年齡20～74歲，平均年齡(49.4±12.8)歲。在得到患者簽署的知情同意書后開始研究。

1.2方法

(1)每個(gè)胸腔積液標(biāo)本分別取10ml,等量分裝在4個(gè)離心管中，確定離心半徑為50cm，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，分離出部分沉渣處理成簡單的細(xì)胞涂片；用10%福爾馬林中性固定液固定試鏡紙包裹剩下的離心沉渣，處理成細(xì)胞蠟塊后制成厚度約3μm的細(xì)胞塊切片；(2)對所有處理后的標(biāo)本進(jìn)行HE染色和免疫組化染色，觀察染色結(jié)果中標(biāo)本呈現(xiàn)出的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞黏附性以及細(xì)胞核不典型性，判斷細(xì)胞病變的良性、惡性和不肯定分類；(3)確定待研究的抗原蛋白為： MOC-31(上皮細(xì)胞表面糖蛋白)、BerEP4(腫瘤糖蛋白)、CEA(癌胚抗原)、WT-1(Wilm's 腫瘤基因-1)、CD51(整合素蛋白 αV)、Calretinin(鈣結(jié)合蛋白)、CK5/6(細(xì)胞角蛋白5/6)、Desmin(足細(xì)胞結(jié)蛋白)、TTF-1(甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1)和CK7(細(xì)胞角蛋白 7)，并觀察這些蛋白的陽性表達(dá)情況。

1.3判斷

每張切片隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)視野來觀察細(xì)胞陽性染色情況，將其中陽性細(xì)胞構(gòu)成比≥10%的情況，記為蛋白表達(dá)陽性。 觀察兩種標(biāo)本處理方法的檢出情況及構(gòu)成比，并對各選定的抗原蛋白陽性表達(dá)情況進(jìn)行比較分析。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS19.0專業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件對所有評分結(jié)果進(jìn)行分析，判斷兩組的病理檢測結(jié)果是否具有差異及差異的有效性。

2 結(jié)果

2.1病理診斷結(jié)果對比

常規(guī)細(xì)胞涂片組和細(xì)胞塊切片組的陽性檢出率[24(31.58%) VS 26(34.21%)]差異明顯，其中，常規(guī)細(xì)胞涂片組的不能確定診斷結(jié)果的占比偏高[26(34.21%) VS 0%](χ2=33.66，P<0.05)。

2.2抗原蛋白陽性表達(dá)情況對比

原發(fā)性間皮瘤WT-1、CK5/6、Desmin、Calretinin陽性表達(dá)率較高，而CK7、TTF-1、MOC-31、CEA 、BerEP4、CD51陽性表達(dá)率均較低；轉(zhuǎn)移性癌檢查中，兩組蛋白陽性表達(dá)率的規(guī)律與前者剛好相反，見表1。

3 討論

免疫組化染色法是運(yùn)用已標(biāo)記的特異性抗體以檢測細(xì)胞中的未知抗原，且利用酶形成的著色反應(yīng)來反映其活性、位置以及分布情況[1]。該診斷方法的操作簡單，陽性物質(zhì)定位精確，特異性較強(qiáng)，且細(xì)胞塊的運(yùn)用有效解決了常規(guī)細(xì)菌涂片方法的的單一性問題，可完整保存細(xì)胞標(biāo)本，連續(xù)切片性質(zhì)明顯，有助于對細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行多項(xiàng)檢查。細(xì)胞塊切片處理法結(jié)合結(jié)合免疫組化法檢查診斷胸腔積液標(biāo)本時(shí)，由于處理過程中的石蠟包埋、切片等操作，相對于常規(guī)細(xì)胞涂片處理操作，提高了病理檢查結(jié)果的準(zhǔn)確度[2]。更重要的是，細(xì)胞塊制作簡單，易于儲存，檢測過程中可有效避免交叉反應(yīng)，敏感性與特異性均較高，可在各大基層醫(yī)院中開展。本研究顯示，細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法能有效診斷出疾病的表達(dá)率：常規(guī)細(xì)胞涂片組的檢出率為65.79%，細(xì)胞塊切片組檢出率為100%；并且在間皮腫瘤標(biāo)本中，CK7、TTF-1、MOC-31、CEA、CD51、BerEP4蛋白的陽性表達(dá)率均較低，而WT-1、CK5/6、Calretinin、Desmin 蛋白的表達(dá)率較高，在轉(zhuǎn)移性癌變標(biāo)本中，目標(biāo)抗原陽性表達(dá)規(guī)律相反。細(xì)胞塊切片處理結(jié)合免疫組化法病理檢查能有效區(qū)分癌變疾病的原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性來源，具有重要的疾病輔助診治意義[3]。綜上所述，在胸腔積液病理診斷中，細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法能準(zhǔn)確、高效檢測出是否發(fā)生癌變疾病及癌變的來源。

表1 兩組標(biāo)本檢測的抗原蛋白表達(dá)情況對比統(tǒng)計(jì)

抗原蛋白良性惡性不確定涂片(26)細(xì)胞塊(50)轉(zhuǎn)移性癌惡性間皮瘤涂片(18)細(xì)胞塊(25)涂片(6)細(xì)胞塊(1)涂片(26)細(xì)胞塊(0)WT-122503231210Desmin20482151240CK5/621491141150Calretinin25500051250MOC-310217110030CK77114243030TTF-10116240000CD510315230000CEA7318220020BerEP40217230000