卵巢癌患者血清人附睪蛋白4、抗繆勒管激素水平與T淋巴細胞水平的相關性研究

朱莉，鄧飛，秦惠萍，賀春蘭，孫兆霞，姚佳佳

1青海省中醫院檢驗科，西寧810000

2青海紅十字醫院檢驗科，西寧810000

3青海大學醫學檢驗中心，西寧810001

卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤，其病死率居婦科惡性腫瘤首位，嚴重影響女性的生命健康及生活質量[1]。目前，卵巢癌的發病機制尚未明確，普遍認為與遺傳和內分泌因素等有關，早期卵巢癌的臨床癥狀缺乏典型性，隨著病情不斷發展可出現腹脹、腹痛、消瘦等癥狀[2]。人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）最早于1991年被發現，是早期診斷和鑒別診斷卵巢癌的重要血清標志物[3-4]；抗繆勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）屬于轉化生長因子β超家族的一種多肽，是由兩個相同的70 kD亞基組成的二聚糖蛋白，當機體缺乏AMH時，繆勒管可發展為子宮、輸卵管和陰道上部[5]。但臨床上對HE4、AMH在卵巢癌中的表達及與T淋巴細胞水平的相關研究較少[6]。因此，本研究探討HE4、AMH在卵巢癌中的水平及與T淋巴細胞水平的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年1月青海省中醫院和青海省紅十字醫院收治的卵巢癌患者。納入標準：①均符合卵巢癌診斷標準，均經病理學檢查確診；②均接受手術治療，且患者均可耐受手術；③意識清楚，能與醫生進行溝通、交流。排除標準：①合并凝血異常、精神異常；②合并認知功能障礙或伴有自身免疫疾病；③臨床資料不完整。依據納入和排除標準，本研究共納入78例卵巢癌患者作為觀察組，年齡19～71歲，平均年齡為（54.98±5.32）歲；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期20例，Ⅲ期35例，Ⅳ期18例；病理類型：漿液性囊腺癌32例，黏液性囊腺癌27例，子宮內膜癌18例，透明細胞癌1例。選取醫院同期收治的卵巢良性腫瘤患者。納入標準：均符合卵巢良性腫瘤診斷標準，經病理學檢查確診。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②合并嚴重肝腎功能異常、自身免疫系統疾病；③臨床資料不完整。依據納入和排除標準，本研究共納入53例卵巢良性腫瘤患者作為對照1組，年齡16～68歲，平均年齡為（43.59±5.13）歲；病理類型：卵巢畸胎瘤12例，子宮內膜異位囊腫33例，漿液性囊腺瘤8例。選取在醫院同期進行健康體檢的女性健康者39例作為對照2組，年齡17～67歲，平均年齡為（44.18±5.31）歲。3組受試者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法和觀察指標

入院后次日清晨抽取了觀察組與對照1組患者空腹靜脈血5 ml，健康體檢當天抽取了對照2組受試者空腹靜脈血5 ml。采用化學發光儀檢測3組受試者血清HE4（參考值＜70 pmol/L）和AMH水平；采用流式細胞儀檢測觀察組與對照1組患者T淋巴細胞亞群水平，包括CD3+、CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8+。

1.3 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件對所有數據進行統計分析。計數資料以例數和率（%）標準，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.13 組受試者HE 4和AMH水平的比較

3組受試者HE4和AMH水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。觀察組患者HE4水平明顯高于對照1組患者和對照2組受試者，AMH水平明顯低于對照1組患者和對照2組受試者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。對照1組患者與對照2組受試者HE4和AMH水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 3組受試者HE 4和AMH水平的比較（±s）

表1 3組受試者HE 4和AMH水平的比較（±s）

注：a與對照1組比較，P＜0.01；b與對照2組比較，P＜0.01

AMH（ng/L）0.52±0.11a b 1.52±0.64 1.55±0.49 115.344 0.000 HE4（pmol/L）341.54±22.37a b 57.71±7.13 55.19±5.63 6750.807 0.000組別觀察組（n=78）對照1組（n=53）對照2組（n=39）F值P值

2.2 觀察組和對照 1組患者 T淋巴細胞水平的比較

觀察組患者 CD3+、CD4+水平和 CD4+/CD8+均明顯低于對照1組患者，CD8+水平明顯高于對照1組患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表2）

表2 觀察組和對照 1組患者 T淋巴細胞水平的比較（±s）

表2 觀察組和對照 1組患者 T淋巴細胞水平的比較（±s）

組別觀察組（n=78）對照1組（n=53）t值CD3+（%）57.46±2.46 69.57±4.89 18.688 CD4+（%）27.43±2.14 42.37±4.61 24.966 CD8+（%）24.21±2.44 21.11±2.09 7.554 CD4+/CD8+1.13±0.21 2.01±0.57 12.465P值0.0000.0000.0000.000

2.3 觀察組患者HE 4、AMH水平與T淋巴細胞的相關性分析

觀察組患者HE4與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均呈負相關（P＜0.05），與CD8+呈正相關（P＜0.05）；AMH與 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均呈正相關（P＜0.05），與CD8+呈負相關（P＜0.05）。（表3）

表3 HE 4、AMH水平與 T淋巴細胞的相關性（r值）

3 討論

卵巢癌是女性病死率最高的生殖系統惡性腫瘤，早期卵巢癌患者的臨床癥狀缺乏典型性，多數患者確診時已處于中晚期，遠期預后較差[7-8]。因此，早診斷、早治療卵巢癌對改善患者的預后具有重要的意義。HE4基因位于人染色體20q12-13.1，其編碼的HE4蛋白的分子量為20～25 kD。臨床研究表明，HE4在卵巢癌患者中表達水平較高，而在卵巢良性腫瘤中表達水平較低或不表達[9-10]。HE4是一種從人體附睪上皮細胞中發現的新型腫瘤標志物，在正常組織、良性病變組織或血清中表達水平相對較低，但在卵巢癌患者中表達水平相對較高。本研究結果顯示，觀察組患者HE4水平明顯高于對照1組患者和對照2組受試者，AMH水平明顯低于對照1組患者和對照2組受試者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。表明HE4在卵巢癌患者中水平較高，可直接參與腫瘤的發生發展過程。AMH又稱為繆勒管抑制物，最早于20世紀40年代發現。成熟的AMH主要由二硫鍵連接72 kD單體形成二聚體糖蛋白，屬于轉化生長因子β超家族成員，且可通過AMH受體Ⅱ發揮生物學作用[11]。臨床研究表明，AMH在評估卵巢儲備方面具有明顯的優勢，是卵巢衰老最準確的生物標志物，且該指標不受月經周期、妊娠及藥物的影響[12]。由此可見，HE4、AMH可反映卵巢功能，在卵巢癌的診斷、治療中發揮重要作用。

腫瘤細胞可通過自分泌與旁分泌，改善并維持自身的生存和發展狀態，促進腫瘤的增殖與生長。全身與局部組織均可通過代謝、免疫、結構或功能改變等方式影響腫瘤的發生發展過程。研究顯示，腫瘤組織與腫瘤微環境相互促進、相互依存，但二者又相互拮抗，是現代腫瘤生物學的核心[13]。免疫功能是生物體進化、個體發育過程中相對重要的防衛能力，也是腫瘤微環境的重要組成部分。健康機體的免疫功能包括抵抗外界傳染因子的免疫防護功能、機體清除受損細胞及維持內環境穩態的能力，可及時發現并清除細胞。人體免疫主要包括細胞免疫與體液免疫，且以細胞免疫為主。研究顯示，T淋巴細胞不僅在免疫耐受中發揮重要的作用，還在腫瘤免疫逃逸中發揮作用，多表現為CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+的下降，CD8+水平的升高[14]。因此，通過測定T淋巴細胞水平可反映腫瘤微環境的免疫情況。本研究結果顯示，觀察組患者CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均明顯低于對照1組患者，CD8+水平明顯高于對照1組患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。表明卵巢癌的發生發展過程中伴有免疫水平的下降，導致腫瘤微環境向促進卵巢癌方向發展。為進一步了解HE4、AMH與腫瘤微環境的相關性，本研究采用相關性分析，結果顯示，觀察組患者HE4與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負相關（P＜0.05），與CD8+呈正相關（P＜0.05）；AMH與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈正相關（P＜0.05），與CD8+呈負相關（P＜0.05）。表明HE4、AMH在卵巢癌患者中水平異常，且與腫瘤微環境存在相關性。

綜上所述，卵巢癌患者中HE4水平較高，AMH水平較低，與T淋巴細胞存在相關性，測定其水平有助于評估患者疾病嚴重程度并指導臨床治療。