復(fù)方牛磺酸滴眼劑對(duì)紫外照射眼損傷模型兔眼的修復(fù)作用及其劑量組合優(yōu)化研究

劉錫軍，才 鳳，肖春瑩

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032； 2.遼寧省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院，遼寧 沈陽 110015）

牛磺酸是一種特殊的氨基酸，是人體必不可少的營養(yǎng)元素[1]。眼藥中的牛磺酸具有強(qiáng)化角膜的自我修復(fù)能力和對(duì)抗眼疾的作用[2-3]。有研究表明，維生素與眼病的發(fā)生及視力關(guān)系密切[4]。復(fù)方牛磺酸滴眼劑由牛磺酸、鹽酸萘甲唑啉、維生素B6、馬來酸氯苯那敏組成，外源性的牛磺酸能順利通過晶體細(xì)胞膜，不需要載體，且不消耗能量，對(duì)維持眼代謝功能十分重要，臨床主要用于防治近視和眼疲勞[5-6]。本研究中通過正交試驗(yàn)篩選出復(fù)方牛磺酸滴眼劑對(duì)家兔眼刺激損傷后的最佳修復(fù)劑量組合，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 試藥

復(fù)方牛磺酸滴眼劑，4種單一成分，9種劑量組合，規(guī)格為10 mL，空白基質(zhì)為透明質(zhì)酸鈉和氯化鈉，均由遼寧省藥物研究院提供。4種成分為牛磺酸（A）、鹽酸萘甲唑啉（B）、維生素 B6（C）、馬來酸氯苯那敏（D），以常用量為中劑量，適當(dāng)增減。因素水平見表1。

表1 樣品成分因素水平表（%）

1.2 動(dòng)物

日本大耳白種家兔50只，普通級(jí)，體質(zhì)量2.1～2.5 kg，雌雄兼用，由中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為SCXK（遼）2003-0013。

1.3 儀器

UV-1601型紫外燈，功率30 W，波長254 nm，沈陽市東陵燈具廠生產(chǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理[7]

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以表示，行t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法與結(jié)果[8]

取家兔45只，隨機(jī)分為9組，每組5只（10眼）。家兔以兔夾固定，將254 nm波長紫外燈置兔眼前40 cm處照射，照射強(qiáng)度為5000 μW／cm2。第1天上午照射3 h，下午1 h，第2，3天上午照射2 h，下午2 h，共照射12 h，以建立家兔紫外照射眼損傷模型。照射后立即給藥，給藥時(shí)，將家兔眼瞼提起，藥物滴入結(jié)膜囊內(nèi)，停留10 s以上，中間閉合眼瞼3次。每天滴眼藥4次，連續(xù)6d，每次每眼1滴（0.05 mL），間隔 2 h。另取 5只家兔作為空白對(duì)照組（等容量空白基質(zhì)）。

觀察紫外燈照射前及照射后第6天，家兔眼球結(jié)膜、角膜、虹膜的受損程度及眼分泌物，參照《化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)注[2005]106號(hào)，以下簡稱“化學(xué)藥原則”）中的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（見表2）進(jìn)行評(píng)分。將每只家兔的瞼球結(jié)膜、角膜、虹膜的刺激反應(yīng)分值相加即為該兔眼刺激反應(yīng)的總積分，將每只家兔眼刺激性反應(yīng)總積分相加后除以家兔數(shù)，即為該受試物對(duì)家兔刺激性的最后分值。分析樣品對(duì)模型兔眼球結(jié)膜、角膜、虹膜及分泌物的影響，結(jié)果見表 3至表 6。優(yōu)化的劑量組合分別為 A2B2C2D2，A2B2C2D3，A2B2C2D2，A2B2C2D2。

表2 兔眼刺激損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

3 討論

目前，對(duì)于藥物的安全性評(píng)價(jià)，大多采用“化學(xué)藥原則”，該方法由于具有客觀、全面的特性，廣泛用于藥物的刺激性評(píng)價(jià)，且效果良好。劉彥群等[9]曾將1%的殼聚糖液滴入家兔眼睛，觀察家兔的眼角膜、虹膜、結(jié)膜變化，用該評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)殼聚糖進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，1%的殼聚糖對(duì)家兔眼部無刺激。本試驗(yàn)中參照該標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)，結(jié)果對(duì)家兔眼球結(jié)膜、角膜、虹膜及分泌物有影響的是牛磺酸、鹽酸萘甲唑啉和維生素B6。優(yōu)化劑量組合為A2B2C2D2，即牛磺酸1%、鹽酸萘甲唑啉0.02%、維生素B60.02%、馬來酸氯苯那敏0.03%。以上結(jié)果表明，優(yōu)化劑量的復(fù)方牛磺酸滴眼劑治療眼疲勞作用明顯，這為該藥治療眼疲勞的適應(yīng)證提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

表3 對(duì)模型兔眼球結(jié)膜的影響（分值）

表4 對(duì)模型兔眼角膜的影響（分值）

表5 對(duì)模型兔眼虹膜的影響（分值）

表6 對(duì)模型兔眼分泌物的影響（分值）