MicroRNA-802和RAB23在前列腺癌中的表達水平及臨床意義

（海南省第三人民醫院 泌尿外科，海南 三亞 572000）

前列腺癌是男性生殖系統常見的惡性腫瘤，在歐美等一些發達國家，前列腺癌在男性惡性腫瘤的發病率僅次于肺癌[1]。我國前列腺癌的發病率和病死率相對較低，但由于生活習慣的改變、診療技術的革新及人口老齡化等因素，我國前列腺癌的發病率逐年上升，嚴重威脅我國男性健康[2-3]。目前，前列腺癌的治療方法還是常規手術切除再輔助放化療等，然而，5%的前列腺癌患者在診斷時仍然存在轉移性病變。為使晚期前列腺癌患者獲得滿意的治療效果，迫切需要找到一種更有效治療前列腺癌的新指標[4]。MicroRNA（miRNA）是長度約為22核苷酸的非編碼RNA，在細胞增殖分化和凋亡等生物過程中發揮重要作用[5]。通過Oncomine數據庫整合前列腺癌組織（對比于正常前列腺組織）表達譜分析發現microRNA-802（miR-802）在前列腺癌中升高，提示miR-802可能在前列腺癌中起關鍵作用。RAB23是Hedgehog（Hh）信號通路的負調控因子，與肝癌、肺癌、胃癌等多種腫瘤密切相關，而目前RAB23與前列腺癌關系研究相對較少，其在前列腺癌中的作用尚未清楚[6-8]。因此，本研究通過探討前列腺癌組織中miR-802和RAB23表達水平及RAB23與病理參數的關系，為前列腺癌的預后及治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2016年12月在海南省第三人民醫院泌尿外科手術切除的前列腺癌標本60例。年齡（68.74±6.82）歲，并選取其相對應癌旁組織（距腫瘤邊緣＞5 cm）作為對照。術后立即將標本置于液氮中保存。納入標準：①初次治療，臨床和病理資料保存完好；②無其他類型的腫瘤且無轉移；③術前未接受放化療及雄激素剝奪治療；④所有標本均經病理學證實。收集患者年齡、血清前列腺特異抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、Gleason 評分、病理分期及手術切緣陽性等情況。生化復發：前列腺癌術后連續2次PSA監測水平均超過0.2 μg/L。

1.2 免疫組織化學檢測miR-802和RAB23的表達

取前列腺癌組織及癌旁組織病理石蠟塊進行切片，厚度為3 μm，經烤片、脫蠟、脫水后進行抗原修復，滴入過氧化氫阻斷內源性過氧化氫酶活性，分別加入兔多克隆miR-802抗體和兔多克隆RAB23抗體（美國 Santa Cruz公司）（稀釋比 1∶ 100），4℃過夜，加入辣根過氧化物酶HRP標記親和純化山羊抗兔二抗（IgG）（武漢艾美捷科技有限公司），室溫30 min，DAB顯色，蘇木精復染，酒精脫水，二甲苯透明，封片。采用雙盲法進行結果判定，隨機選取5個高倍視野（×400）確定陽性染色細胞的數量和所占的比例。染色強度（I）評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；同時計數陽性細胞百分率（P）；＞50%為3分，＜25%～50%為2分，＜5%～25%為1分，陽性細胞≤5%為0分；組織學評分H=I×P，0～1分為陰性表達，≥2分為陽性表達。

1.3 隨訪

在手術結束后對患者采用復診或電話方式進行隨訪。隨訪截至2017年12月31日，隨訪5～53個月，平均25.81個月，無失訪者。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 19.0統計軟件。計數資料采用例（%）表示，不同組織中miR-802和RAB23的表達差異采用配對χ2檢驗，miR-802和RAB23的表達情況與前列腺癌患者臨床病理特征的關系采用χ2檢驗進行判斷；生存期采用中位數和四分位數M（P25，P75）表示，采用非參數檢驗；miR-802和RAB23的表達情況與前列癌患者預后采用Kaplan-Meier生存曲線分析，行Log-Rank檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 miR-802和RAB23在前列腺癌組織及癌旁組織中的表達

miR-802和RAB23在前列腺癌組織中的陽性率高于癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 miR-802和RAB23表達與前列腺癌患者臨床病理參數的關系

miR-802和RAB23表達與年齡和術前PSA不相關；與Gleason評分相關，評分越高，表達率越低；與病理分期相關，表達高則病理分期早（P＜0.05）。見表2。

表1 miR-802和RAB23在癌旁組織及前列腺癌組織中的表達比較 [n =60，例（%）]

2.3 miR-802和RAB23表達與前列腺癌患者預后的關系

miR-802和RAB23表達陰性組3年生存率及生存期與miR-802和RAB23表達陽性組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），miR-802和 RAB23表達陰性組較miR-802和RAB23表達陽性組高。見表3和圖1。

表2 前列腺癌患者臨床病理參數與miR-802和RAB23表達的關系 例（%）

表3 miR-802和RAB23表達與前列腺癌患者預后的關系

圖1 miR-802和RAB23表達陽性、陰性組Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

據統計，2016年美國180 890例新發前列腺癌病例，并有26 120例前列腺癌患者死亡，同時，我國前列腺癌病死人數約占全球前列腺癌死亡人數的5%[9-10]。目前關于前列腺癌惡性程度有效的評估指標仍缺乏，同時“腫瘤即是一種基因病”理論已經得到廣泛認可。因此，尋找一種或幾種前列腺癌標志物可以指導臨床診斷和治療尤為重要。

miRNA最早在1993年被發現，廣泛存在于真核生物細胞內，具有高度的組織特異性和保守性，目前已經發現上千種miRNA，占人類基因數量的1%～3%，卻調控超過30%的基因表達，約有50%腫瘤的變異區域內可檢測到miRNA基因，且其結果具有可重復性，提示miRNA可能與腫瘤發生、發展密切相關[11-13]。同時每個靶基因又受大量miRNA調控，選擇與靶基因相關性最高的miRNA進行干預，是一種新的分子靶向治療方法[14]。通過靶基因的數據庫（Targetscan和Pic Tar）對RAB23的靶miRNA進行預測，發現有20個miRNA與RAB23結合，如hsa-miR-425、hsamiR-142-3p、miR-196b、miRNA-802等。再通過熱力學穩定性和序列保守性評分，結果發現，miRNA-802作為RAB23的首選靶miRNA作進一步研究。關于miRNA-802的研究最早是在肝組織中，當肝組織受損時，miRNA-802的表達升高，且其升高程度與肝組織受損程度呈正相關[15]。基因干擾是引起特定基因達到沉默作用的技術，被《Science》譽為2002年度生物科技重大突破項目的第一位[16]。通過基因干擾技術，阻斷miRNA-802的表達，為抑制RAB23活性提供了可能[17]。

RAB23是RAB家族的重要成員，位于染色體6pl1-6p12，參與了調控細胞膜及囊泡的物質運輸，從而影響細胞增殖和遷移[18]。RAB家族成員中有幾個可以是惡性腫瘤的驅動因素，RAB23與癌癥關系最為突出，且研究較為清楚。RAB23主要有持續激活型RAB23、持續抑制型RAB23和野生型RAB23。通過轉染，用顯微鏡觀察發現，持續激活型RAB23和野生型RAB23主要表達于細胞內，而持續抑制型RAB23主要表達于胞漿，通過對Hh信號通路的負調控作用，將信息傳遞到細胞內[19]。研究發現，RAB23在肝癌、胃癌、乳腺癌及前列腺癌等組織中高表達，且與腫瘤大小呈正相關，說明RAB23促進腫瘤細胞的增殖和遷移[20]。本研究結果顯示，miR-802和RAB23在前列腺癌組織中的陽性率高于癌旁組織；miR-802和RAB23表達與Gleason評分相關，評分越高，表達率越低；miR-802和RAB23表達與病理分期相關，表達高則病理分期早；miR-802和RAB23表達陰性組3年生存率及生存期均高于miR-802和RAB23表達陽性組。

綜上所述，miR-802和RAB23 mRNA在前列腺癌組織中的表達陽性率高于癌旁組織，陰性表達能獲得較好的預后。本研究推斷miR-802和RAB23在前列腺癌的發生發展過程中發揮重要作用，有望成為前列腺癌早期診斷、預后判斷及個體化治療的新型分子標志物。