培美曲塞聯合奧沙利鉑治療肺癌的療效與機制研究

（天津市第五中心醫院 血液腫瘤科，天津 300450）

肺腺癌（lung adenocarcinoma）是肺癌的一種，屬于非小細胞癌，居肺癌4大類型之首，肺腺癌起源于支氣管黏膜上皮或較小的支氣管，少數起源于大支氣管的黏液腺，多數為周圍型肺癌[1-2]。早期肺腺癌一般沒有明顯的臨床癥狀，往往是在胸部X射線檢查時被發現。表現為圓形或橢圓形腫塊，一般生長較慢，但有時早期即發生血行轉移。在不適合靶向藥物的晚期肺腺癌的主要治療手段仍然是化療，臨床上治療肺腺癌多為控制病情、延長患者生存期、改善患者生活質量等[3-4]。因此，尋找一種治療有效率高、不良反應小的臨床化療方案顯得極為重要。培美曲塞聯合鉑類藥物對晚期肺腺癌具有較好的臨床療效。本研究通過給予肺腺癌患者培美曲塞聯合奧沙利鉑治療，觀察其臨床療效及對NOD1/NF-κB/R1P2信號通路的調控作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月—2017年1月天津市第五中心醫院收治的晚期肺腺癌患者80例。隨機分為兩組：觀察組接受培美曲塞聯合奧沙利鉑化療；對照組接受培美曲塞聯合順鉑化療。每組40例，經病理學確診。觀察組：男性22例，女性18例；平均發病年齡為（63.67±4.85）歲；臨床分期為ⅢB期以上無手術機會的姑息化療的患者。對照組：男性20例，女性20例；平均發病年齡為（65.18±5.03）歲；臨床分期為ⅢB期以上無手術機會的姑息化療的患者。所有患者自愿接受臨床檢查，經本院醫學倫理委員會批準并簽署知情同意書。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方案

觀察組接受培美曲塞聯合奧沙利鉑化療：第1天給予培美曲塞 500 mg/m2，靜脈滴注10 min，第2天給予奧沙利鉑按體表面積靜脈滴注135 mg/m2，每3周為1個療程，治療2個療程。對照組接受培美曲塞聯合順鉑化療：第1天給予培美曲塞500 mg/m2，靜脈滴注10 min，第1～3天給予順鉑25 mg/m2靜脈滴注，每3周為1個療程，治療2個療程。所有患者用藥前1 周開始注射維生素 B121 000 μg、并連續服用葉酸400 μg/d，直至化療結束后3周。

1.3 觀察療效和不良反應

觀察兩組患者治療后的臨床效果及不良反應發生情況。依據實體瘤療效評價標準（RECIST）評定肺癌患者化療的臨床療效，并測量腫瘤直徑大小。其中完全緩解（complete remission,CR）和部分緩解（partial remission,PR）為有效，穩定（stable disease,SD）和進展（progressive disease,PD）為無效。評定方法：①CR：化療后腫瘤完全消失，持續超過1個月；②PR，病灶基線長徑總和縮小≥30%。③SD：縮小未達PR或增加未達PD。④PD：病灶基線長徑總和增加≥20%或出現新病灶。

1.4 血清NOD1、NF-κB、R1P2和Caspase-3蛋白含量檢測

采集肺癌患者化療前后清晨空腹靜脈血3 ml。分離血漿并低溫 2 000 r/min 離心 15 min，取血清待檢。采用ELISA法檢測患者血清NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3蛋白含量，嚴格按照試劑盒說明書步驟操作（上海晶抗生物工程有限公司），測定波長450 nm處光密度（OD）值。

1.5 NOD1、NF-κB、R1P2及 Caspase-3 mRNA表達水平檢測

采用real-time PCR法對NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表達水平進行檢測。Trizol提取肺腺癌組織中的總RNA，轉錄合成cDNA進行real-time PCR操作。實驗采用相對定量法，采取閾值循環數（cycle threshold,CT）值比較法，計算 NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表達水平的相對百分比。目的基因的量 =2-ΔΔCt。

1.6 統計學方法

數據分析采用SPSS 22.0統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以例表示，比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 療效比較

兩組患者的化療結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）（見表1）。化療后觀察組和對照組患者腫瘤直徑與化療前比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；化療后腫瘤直徑均縮小（見表2）。觀察組消化道反應和白細胞減少與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），觀察組患者不良反應例數較對照組少；肝腎損傷和神經毒性差異無統計學意義（P ＞0.05）（見表3）。

2.2 NOD1、NF-κB、R1P2及 Caspase-3蛋白含量的比較

兩組患者化療后血清內NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3蛋白含量與化療前比較，差異有統計學意義（P＜0.05），化療后升高。見表4。

2.3 患者NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表達水平的比較

兩組患者化療后癌組織NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表達水平與化療前比較，差異有統計學意義（P＜0.05），化療后升高。見表5。

表1 兩組患者臨床療效比較（n =40，例）

表2 兩組患者化療前后腫瘤直徑比較（n =40，cm，±s）

表2 兩組患者化療前后腫瘤直徑比較（n =40，cm，±s）

組別 化療前 化療后 t值 P值對照組 2.95±0.47 2.35±0.31 6.740 0.001觀察組 3.03±0.51 1.99±0.28 11.305 0.001 t值 1.784 3.287 P值 0.587 0.028

表3 兩組患者不良反應比較（n =40，例）

表4 兩組患者化療前后NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 蛋白含量的比較（n =40，±s）

表4 兩組患者化療前后NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 蛋白含量的比較（n =40，±s）

組別 化療前 化療后 t值 P值NOD1對照組 0.63±0.08 1.15±0.19 -5.101 0.013觀察組 0.67±0.10 1.48±0.25 -6.827 0.006 t值 1.010 -6.827 P值 0.291 0.006 NF-κB對照組 1.24±0.21 2.31±0.45 -4.287 0.038觀察組 1.30±0.24 2.67±0.52 -5.901 0.028 t值 1.001 -5.901 P值 0.389 0.028 R1P2對照組 1.54±0.32 2.21±0.40 -2.981 0.041觀察組 1.49±0.30 2.89±0.47 -4.019 0.037 t值 0.089 -4.019 P值 0.823 0.037 Caspase-3對照組 2.10±0.48 2.69±0.51 -3.972 0.039觀察組 2.08±0.50 3.34±0.52 -5.292 0.030 t值 1.052 -5.292 P值 0.483 0.030

表5 兩組患者化療前后NOD1、NF-κB、R1P2和Caspase-3 mRNA 表達水平的比較（n =40，±s）

表5 兩組患者化療前后NOD1、NF-κB、R1P2和Caspase-3 mRNA 表達水平的比較（n =40，±s）

組別 化療前 化療后 t值 P值NOD1對照組 0.96±0.10 1.48±0.23 4.481 0.011觀察組 0.99±0.11 2.19±0.24 6.210 0.008 t值 1.002 -6.210 P值 0.278 0.008

續表5

3 討論

培美曲塞作為一種常用的抗葉酸制劑，主要通過破壞細胞內葉酸的正常代謝過程，從而來抑制腫瘤細胞的增殖、分化和生長[5]。研究表明，培美曲塞通過運載葉酸的載體和細胞膜上的葉酸結合蛋白運輸系統進入細胞內，培美曲塞能夠抑制細胞內葉酸所必需的酶的活性，如胸苷酸合成酶、二氫葉酸還原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰轉移酶，并促進葉酰多谷氨酸合成酶轉化為多谷氨酸，進而呈現時間-濃度依賴性的抑制細胞內胸腺嘧啶核苷酸和嘌吟核苷酸的分泌合成過程[6-7]。多谷氨酸化代謝物在腫瘤細胞內的半衰期延長，從而也就延長了培美曲塞在腫瘤細胞內的作用時間，起到抗腫瘤作用[8-9]。奧沙利鉑屬于第3代鉑類抗癌藥，是細胞周期非特異性藥物，其抗癌譜和主要作用機制與其他鉑類藥作用機制類似，主要是以腫瘤細胞內DNA為靶作用部位，形成鏈間和鏈內交聯阻斷拮抗DNA合成，從而產生細胞毒和抗腫瘤活性[10-11]。研究表明，奧沙利鉑對人多種腫瘤細胞均有抑制作用和抗瘤活性，與培美曲塞聯合應用具有協同作用，毒副反應較輕[12]。

腫瘤的發生和發展是極其復雜的過程，腫瘤主要是惡性細胞增生過度，凋亡抑制的結果。凋亡是消除突變和損傷細胞的主要途徑，凋亡抑制使本該消除的細胞存活，基因突變發生積累，基因的不穩定性增加。腫瘤治療策略即以快速分裂的腫瘤細胞為靶細胞，使用細胞周期抑制劑治療腫瘤，原因是其能誘導腫瘤細胞發生凋亡。NOD1作為高度保守的NOD蛋白質家族成員，可通過識別細胞外壁的肽聚糖和脂多糖并依靠其相互作用，激活下游MAPK及NF-κB信號通路，在炎癥、氧化應激、細胞增殖等生理病理過程中發揮作用[13-14]。NOD1具有結合腫瘤壞死因子的作用，參與細胞間的信號轉導，影響細胞凋亡，可通過磷酸化作用激活NF-κB誘導激酶，繼而活化κB激酶復合物抑制蛋白，與凋亡信號調節激酶、轉化生長因子-β活化激酶、促分裂原激活的相關蛋白激酶等分子相互作用并最終活化Caspase抑制劑，抑制活化的Caspase，釋放螯合的細胞質中的NF-κB顆粒，依靠蛋白激酶之間的相互作用，使外源性病原微生物細胞內的DNA破裂降解而逐漸清除，最終引發參與腫瘤細胞凋亡。其中，NF-κB作為一種多向轉錄調節作用的核蛋白因子，激活后NF-κB信號通路可密切參與凋亡基因的轉錄調控及細胞凋亡的過程，活化效應性凋亡蛋白Caspase-3，使細胞內的DNA鏈斷裂和破裂，進而逐漸降解胞細胞結構，使細胞發生死亡[15-16]。本研究結果表明，肺腺癌患者應用培美曲塞聯合奧沙利鉑療效高于對照組，不良反應較少，說明培美曲塞聯合奧沙利鉑治療肺腺癌的臨床安全性更高。與對照組比較，觀察組患者應用曲塞聯合奧沙利鉑化療后，血清NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3蛋白含量升高，癌組織NOD1、NF-κB、R1P2及 Caspase-3 mRNA 表達 水平升高，說明應用聯合藥物化療后，患者體內NOD1/NF-κB/R1P2信號通路被激活，參與調節肺腺癌細胞的增殖和分化過程，在腫瘤的發生、發展、治療及轉歸中發揮著重要作用。

綜上所述，曲塞聯合奧沙利鉑可有效控制肺腺癌的發生、發展，具有較好的臨床效果和臨床安全性。NOD1/NF-κB/R1P2信號通路與肺腺癌的發生、發展和治療效果密切相關，可以作為肺腺癌的治療新靶點。