膽維他片對(duì)肝纖維化大鼠肝中抗氧化體系的影響

董樸 蔡福景 張東

摘要：目的 ?探討膽維他片對(duì)肝纖維化大鼠肝中抗氧化體系的影響。方法 ?選取30只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為肝纖維化模型組、膽維他片組和正常對(duì)照組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組均要求制備大鼠肝纖維化模型。正常對(duì)照組和肝纖維化模型組不給藥，膽維他片組于造模開始給予灌胃給藥，其余組給予蒸餾水灌胃，于第12周測(cè)定肝中丙二醛（MDA）、抗氧化體系的過(guò)氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH），同時(shí)采用Masson's染色肝組織膠原行纖維半定量評(píng)估纖維化的程度。結(jié)果 ?纖維化模型組和膽維他片組CAT、SOD、GSH低于正常對(duì)照組，MDA高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;膽維他片組CAT、SOD、GSH均高于纖維化模型組，MDA低于纖維化模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。纖維化模型組和膽維他片組肝纖維化分期高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;膽維他片組肝纖維化分期低于纖維化模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?膽維他片能有效降低肝纖維化肝內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化，促進(jìn)肝內(nèi)氧化及抗氧化體系的恢復(fù)，具有減輕肝纖維化的作用。

關(guān)鍵詞：膽維他片;肝纖維化;氧化及抗氧化體系

中圖分類號(hào)：R575 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.18.046

文章編號(hào)：1006-1959（2019）18-0138-02

Abstract：Objective ?To investigate the effect of Danweita Tablet on the antioxidant system in the liver of rats with hepatic fibrosis.Methods ?30 rats were randomly divided into the liver fibrosis model group， the biliary tablet group and the normal control group， with 10 rats in each group. Except the normal control group， the other groups were required to prepare a rat liver fibrosis model. The normal control group and the liver fibrosis model group were not administered. The bilisitis tablets group was administered with intragastric administration at the beginning of modeling， and the other groups were given distilled water for intragastric administration. The liver malondialdehyde （MDA） and anti-drug were measured at the 12th week. The oxidation system of catalase （CAT）， superoxide dismutase （SOD）， glutathione （GSH）， and Masson's stained liver tissue collagen fibers were used to semi-quantitatively assess the degree of fibrosis.Results ?The CAT， SOD and GSH in the fibrosis model group and the bilisitis tablet group were lower than those in the normal control group， and the MDA was higher than the normal control group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The CAT， SOD and GSH in the biliary tablet group were all significant. Compared with the fibrosis model group， the MDA was lower than the fibrosis model group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The fibrosis model group and the gallbladder tablet group had higher liver fibrosis stage than the normal control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The gallbladder tablet group had lower liver fibrosis stage than the fibrosis model group，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?Gallivir tablets can effectively reduce lipid peroxidation in liver fibrosis， promote liver oxidation and recovery of antioxidant system， and reduce liver fibrosis.

Key words：Gallbladder tablets;Liver fibrosis;Oxidation and antioxidant system

肝纖維化（liver fibrosis）是各種慢性肝病發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)過(guò)程，肝星狀細(xì)胞激活是肝纖維化發(fā)展的中心環(huán)節(jié)，不同肝病的發(fā)病機(jī)理有所不同，但肝內(nèi)氧化及抗氧化體系的平衡在肝纖維化發(fā)生中發(fā)揮重要作用，其主要原因是氧自由基刺激肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，激活巨噬細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)導(dǎo)致肝纖維化形成[1]。膽維他片在維持細(xì)胞各種功能方面起重要作用，其分子中的巰基可以減輕或終止組織細(xì)胞的損傷，從而保護(hù)肝細(xì)胞作用[2]。本文主要探討膽維他片對(duì)肝纖維化大鼠肝中抗氧化體系的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料 ?實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2018年7月～2019年7月;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性Wistar大鼠30只，體重283.52～213.24 g，平均體重（240.22±10.13）g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)于溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。本研究經(jīng)動(dòng)物倫理會(huì)審批通過(guò)。

1.2藥品和試劑 ?膽維他片購(gòu)于成都國(guó)嘉制藥有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：H20180232，25 mg/片）。臨用前用雙蒸餾水配制所需藥物濃度：丙二醛（MDA）、抗氧化體系的過(guò)氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）測(cè)定試劑盒，均購(gòu)于南京建成生物公司。

1.3方法

1.3.1模型方法和分組給藥 ?實(shí)驗(yàn)Wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為三組：正常對(duì)照組、肝纖維化模型組、膽維他片組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組均要求制備大鼠肝纖維化模型。將花生油與四氯化碳（CCl4）按1∶9比例油劑，按0.6 ml/100 g腹腔內(nèi)注射10% CCl4混溶液，2次/周，一共12周，進(jìn)行大鼠損傷性肝纖維化造模。正常對(duì)照組和肝纖維化模型組不給藥，膽維他片組于造模開始第1天給予灌胃給藥，膽維他片組每只大鼠給予25 mg膽維他片溶于250 ml的蒸餾水中，灌胃給藥3 ml藥水，同時(shí)正常對(duì)照組和肝纖維化模型組每只大鼠給予3 ml蒸餾水灌胃，持續(xù)12周，各組均給普通飼料和自來(lái)水。第12周后處死動(dòng)物放血，肝臟組織留取檢測(cè)指標(biāo)。

1.3.2肝臟勻漿液制備 ?取1 g肝組織加10 ml生理鹽水放入勻漿器中進(jìn)行勻漿，10000 r/min離心5 min分離上清液，置于-20℃冰箱保存待檢。

1.3.3生化指標(biāo)測(cè)定 ?取三組大鼠肝勻漿液，按照試劑說(shuō)明書測(cè)定CAT、GSH、MDA和SOD指標(biāo)。

1.3.4肝臟病理學(xué)檢查 ?取出部分左葉肝組織用10%中性甲醛固定1 d，用石蠟包埋后組織切片，采用Masson's染色膠原，并進(jìn)行半定量分析[3]：-：正常;+：匯管區(qū)和中央小葉靜脈周邊膠原增多;++：匯管區(qū)和中央小葉靜脈膠原開始穿插、分隔成肝小葉;+++：膠原纖維已經(jīng)分隔肝小葉;++++：膠原纖維隔繼續(xù)增寬、增多。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以（n）表示，采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組肝內(nèi)氧化及抗氧化比較 ?纖維化模型組和膽維他片組CAT、SOD、GSH低于正常對(duì)照組，MDA高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;膽維他片組CAT、SOD、GSH均高于纖維化模型組，MDA低于纖維化模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2三組肝纖維化比較 ?纖維化模型組和膽維他片組肝纖維化分期高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;膽維他片組肝纖維化分期低于纖維化模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

3討論

肝纖維化的發(fā)生發(fā)展與肝內(nèi)氧自由基的增加密切相關(guān)，它不僅直接導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷，同時(shí)刺激炎癥因子的釋放，因此，自由基、肝內(nèi)氧化和抗氧化體系在肝纖維化形成和發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用[4]。肝星狀細(xì)胞是產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)的主要來(lái)源細(xì)胞，肝內(nèi)的自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化不僅可促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的增殖，同時(shí)使肝星狀細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化[5]。在肝內(nèi)正常條件下，肝內(nèi)的氧化和抗氧化體系非常復(fù)雜，還原型GSH主要在肝臟合成，廣泛分布于機(jī)體各器官內(nèi)，在維持細(xì)胞生物功能方面起重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)[1]，GSH是肝細(xì)胞內(nèi)的供氧體與解毒劑，同時(shí)還是氧自由基的清除劑，能保護(hù)蛋白的氧化損傷，為肝內(nèi)主要的抗氧化物質(zhì)、可與SOD一起作用，消除肝內(nèi)的超氧陰離子保護(hù)肝細(xì)胞內(nèi)的膜穩(wěn)定。MDA目前公認(rèn)為肝內(nèi)自由基產(chǎn)生的一個(gè)間接指標(biāo)[5]。膽維他片的藥理作用表明，膽維他能明顯增加肝內(nèi)GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶、GSH硫轉(zhuǎn)移酶活性和GSH還原酶的活性，從而增強(qiáng)肝細(xì)胞的抗氧化能力。

本研究結(jié)果顯示，纖維化模型組和膽維他片組CAT、SOD、GSH低于正常對(duì)照組，MDA高于正常對(duì)照組（P<0.05）;膽維他片組CAT、SOD、GSH均高于纖維化模型組，MDA低于纖維化模型組（P<0.05）。說(shuō)明肝纖維化形成后，肝內(nèi)MDA明顯增加，而肝內(nèi)抗氧化物CAT、SOD和GSH明顯下降，膽維他片能顯著升高肝臟抗氧化物，同時(shí)降低了氧自由基，提高了肝內(nèi)抗氧化能力。纖維化模型組和膽維他片組肝纖維化分期高于正常對(duì)照組;膽維他片組肝纖維化分期低于纖維化模型組（P<0.05）。說(shuō)明膽維他片具有抗肝纖維化的作用。

綜上所述，膽維他片具有改善肝纖維化的作用，機(jī)理可能是通過(guò)膽維他片的抗氧化發(fā)揮抗肝纖維化的作用，為今后膽維他的應(yīng)用肝纖維化治療提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Sánchez-Valle V，Chávez-Tapia NC，Uribe M，et al.Role of oxidative stress and molecular changes in liver fibrosis：a review[J].Curr Med Chem，2012，19（28）：4850-4860.

[2]許有信.復(fù)方阿嗪米特腸溶片與膽維他片治療慢性膽囊炎合并腹脹的療效比較[J].中國(guó)處方藥，2015，13（5）：83-84.

[3]陶小紅，邱皓，呂曉云.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白在腎纖維化大鼠腎組織中的表達(dá)[J].甘肅科技，2019，35（6）：99-101.

[4]夏婷，張瑾，姚佳慧.氧化應(yīng)激在酒精性肝病中作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2017，33（10）：1353-1356.

[5]Luangmonkong T，Suriguga S，Mutsaers HAM，et al.Targeting Oxidative Stress for the Treatment of Liver Fibrosis[J].Rev Physiol Biochem Pharmacol，2018（175）：71-102.

收稿日期：2019-8-2;修回日期：2019-8-12

編輯/杜帆