正交試驗法優選麩炒山藥炮制工藝

胡 雨，張麗君，高 波，郭志俊

（1.華潤三九現代中藥制藥有限公司，廣東 惠州 516000；2.安徽華潤金蟾藥業有限公司，安徽 淮北 235000）

山藥為薯蕷科植物薯蕷（Dioscorea oppositaThunb.）的干燥根莖，是常見藥食兩用的補益類中藥。山藥的炮制方法主要有清炒、麩炒、土炒、米炒、蜜麩炒等［1，2］，其藥用成分主要有多糖、尿囊素、甘露聚糖、山藥堿、糖蛋白等［3-5］。其中，尿囊素作為山藥的有效成分，具有生肌作用，能修復上皮組織，促進皮膚潰瘍和傷口愈合，用于治療胃及十二指腸潰瘍［6］。因此，本研究以尿囊素含量［7，8］為主要指標，結合麩炒山藥外觀性狀評價，運用正交試驗設計優選麩炒山藥炮制工藝［9-11］，以期對麩炒山藥的規模化生產提供一定的技術參考。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器、藥品和材料

Thermo U3000 型高效液相色譜儀［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；KQ-800 DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XPE 26 型、MS204S 型電子天平（Mettler Toledo 公司）；中藥炒藥機（溫州頂歷醫療器械有限公司）。

尿囊素對照品（批號：111501-200202，純度100%）購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。山藥飲片（批號：2208001），購自河南省某公司，經鑒定是薯蕷科植物薯蕷的干燥根莖。

1.2 方法

1.2.1 尿囊素含量測定

1）色譜條件：色譜柱為ChromCore NH2（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水（90∶10，體積比）；柱溫為25 ℃；流速為1.0 mL/min；檢測波長為224 nm；進樣量為10 μL。

2）對照品溶液的制備。精密稱取尿囊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL 含尿囊素80 μg 的溶液，得到對照品溶液。

3）供試品溶液的制備。精密稱定山藥飲片粉末（過三號篩）1.0 g，置于具塞錐形瓶中，加入稀乙醇25 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足損失的重量，濾過，即得。

1.2.2 線性范圍考察 精密稱定尿囊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL 中含尿囊素1.279 4 mg 的對照品母液，精密吸取母液5 mL 加甲醇定容至10 mL，依次等比稀釋，得到7 份系列濃度的對照品溶液，進樣測定并記錄相應峰面積。

1.2.3 精密度試驗 對同一份供試品溶液連續進樣6 次，測定尿囊素峰面積，并計算尿囊素含量的RSD。1.2.4 重復性試驗 精密稱定同一批樣品6 份，按供試品制備方法處理并進樣測定，根據尿囊素峰面積，計算供試品質量分數和其RSD。

1.2.5 穩定性試驗 對同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h 進樣測定，記錄不同時間的尿囊素峰面積，并計算尿囊素含量的RSD。

1.2.6 加樣回收率試驗 對同一批已知含量的樣品6 份（未扣水分含量，尿囊素的含量為7.93 mg/g）精密稱定，每份0.5 g，另用甲醇配制成每1 mL 中含尿囊素0.387 5 mg 的對照品溶液，精密加入10 mL 該對照品溶液至每份供試品樣品中，再按“1.2.1”中供試品溶液的制備方法處理樣品，進行測定，計算回收率。

1.3 正交試驗

1.3.1 麩炒山藥炮制工藝正交試驗設計 在麩炒山藥前期預試驗及文獻［9，10］檢索的基礎上，擬選用L9（34）正交試驗（表1）安排試驗，考察麥麩用量（A）、炒制時間（B）、炒制溫度（C）等因素，以麩炒山藥炒制性狀及尿囊素含量作為雙評價指標，對麩炒山藥的炮制工藝進行優選。

表1 正交試驗因素和水平

1.3.2 麩炒山藥飲片性狀評分標準 《中華人民共和國藥典》（2020 年版）［1］中關于麩炒山藥的性狀描述為切面黃白色或微黃色，偶見焦斑，略有焦香氣；《全國中藥炮制規范》［12］（1988 年版）描述為表面淡黃色，偶有焦斑，略具焦香氣。本研究根據正交試驗加工制備的麩炒山藥炮制品，依照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）及《全國中藥炮制規范》（1988 年版）對其進行性狀評分。

2 結果與分析

2.1 供試溶液的色譜

對照品溶液和供試品溶液的色譜見圖1。由圖1 可知，供試品麩炒山藥的高效液相色譜中，尿囊素的出峰時間為10.963 min，與尿囊素對照品的出峰時間10.990 min 相當，表明麩炒山藥中含有尿囊素。

圖1 麩炒山藥對照品溶液和供試品溶液的色譜

2.2 線性范圍考察結果

將峰面積作為縱坐標（Y），將對照品進樣質量作為橫坐標（X），進行線性回歸分析，得到回歸方程為Y=3.258 5X+0.260 8，r=0.999 9；線性范圍為0.199 9～12.794 0 μg，表明線性關系良好。

2.3 供試品精密度試驗結果

供試品精密度試驗結果表明，尿囊素峰面積的RSD為0.21%，說明該方法儀器精密度良好。

2.4 重復性試驗結果

根據尿囊素峰面積計算樣品的質量分數為7.93 mg/g，RSD為0.67%，表明該方法重復性良好。

2.5 穩定性試驗結果

穩定性試驗結果表明，尿囊素含量的RSD為0.43%，表明供試品溶液在24 h 內（樣品盤25 ℃）穩定，可以滿足測定需要。

2.6 加樣回收率試驗結果

加樣回收率試驗結果表明，尿囊素的加樣回收率為96.78%（n=6），該方法回收率良好。

2.7 麩炒山藥正交試驗綜合評分標準

為客觀評價麩炒山藥炮制品的質量，本研究以有效成分尿囊素含量及麩炒山藥炮制品的外觀性狀為評價指標，采用綜合評分法進行評定。擬定尿囊素含量指標權重系數為0.7，而飲片外觀性狀作為中藥飲片的傳統質量評價標準，是評價炮制飲片質量優劣的關鍵因素，故將其作為評價指標，擬定權重系數為0.3。綜合評分=尿囊素含量評分+飲片外觀性狀評分［13］。正交試驗及直觀分析結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 麩炒山藥工藝正交試驗及直觀分析結果（n=3）

表3 綜合評分方差分析

由直觀分析結果可知，各因素對麩炒山藥炮制工藝的影響從大到小順序依次為C、B、A；方差分析結果表明，炒制溫度（C）對麩炒山藥炮制工藝具有顯著影響，麥麩用量（A）、炒制時間（B）對麩炒山藥炮制工藝則無顯著影響。故從直觀分析及方差分析結果可知，麩炒山藥的最佳炮制工藝為A3B1C1，即取山藥片量15.0%的麥麩撒入180 ℃的炒藥設備中，待麥麩冒煙時，向炒藥機內投入300 g 山藥片，炒制10 min，取出晾涼，篩去麩皮即可。

2.8 驗證性試驗

取山藥片樣品適量，按照上述優選的麩炒山藥最佳炮制工藝，平行制備3 份樣品（S1、S2、S3），觀察記錄麩炒山藥飲片的性狀，并對制備樣品中的尿囊素含量進行測定，結果見表4。

表4 麩炒山藥驗證試驗結果

由表4 結果可知，采用上述優選出的麩炒山藥炮制工藝，所制備的樣品性狀及尿囊素含量均較穩定，表明該麩炒山藥炮制工藝穩定可行。即確定麩炒山藥最佳炮制工藝為取山藥飲片量15.0%的麥麩撒入180 ℃的炒藥設備中，待麥麩冒煙時，向炒藥機內投入300 g 山藥飲片，炒制10 min，取出晾涼，篩去麩皮即可。

3 討論

本研究設計以麥麩用量、炒制時間和炒制溫度為正交試驗考察因素。中藥飲片的外觀性狀則是傳統評價指標，也是較為關鍵的飲片質量評價指標，其與山藥有效化學成分尿囊素含量指標相結合，共同評價麩炒山藥飲片質量，更具科學性和客觀性。故本研究以尿囊素含量和麩炒山藥飲片外觀性狀2 個指標作為正交試驗的評價標準，優選麩炒山藥炮制工藝，選擇指標與文獻［10，14］評價指標一致。

研究結果顯示，炒制溫度對麩炒山藥尿囊素含量及飲片外觀性狀影響較大，而麥麩用量、炒制時間2 個因素則對麩炒山藥飲片質量無顯著影響。繼而對正交試驗優選出的麩炒山藥炮制工藝進行驗證，所制備出的3 批飲片質量穩定，表明該工藝穩定可行，重現性良好，可為麩炒山藥的工業化生產提供一定的技術參考。