UPLC-MS/MS測定復方甘草片中甘草酸含量

湯麗昌

摘 要：目的：建立超高效液相色譜-串聯質譜聯用技術測定復方甘草片中甘草酸。方法：采用Agilent EclipsePlus-C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V）為流動相進行洗脫，流速為0.2 mL·min-1，柱溫30 ℃，在三重四級桿檢測器中采用正離子多反應監測模式（MRM）進行檢測。結果：甘草酸在0.313 2～6.264 0 μg·mL-1（r=0.999 9）呈良好線性關系，甘草酸加樣回收率為98.6%，RSD=1.07%。結論：該方法靈敏度高、抗干擾性強且準確性好，可適用于復方甘草片中甘草酸的含量測定。

關鍵詞：復方甘草片;UPLC-MS/MS;甘草酸

Abstract：Objective： To establish a method for quantitative determination of glycyrrhizic acid in liquorice tablets by UPLC-MS/MS. Method： The Agilent EclipsePlus-C18 chromatographic column （2.1 mm×50 mm， 1.8 μm） was used. The 0.1% formic acid acetonitrile solution-0.1% formic acid （70∶30， V/V） was used. The flow rate was 0.2 mL·min-1. Column temperature was kept at 30 ℃. The detection was performed on a triple quadruple mass spectrometry detector using multiple reaction monitoring （MRM） model for positive ions. Results： The linear range of glycyrrhizic acid oride was 0.313 2～6.264 0 μg·mL-1?（r=0.999 9）， the average recovery was 98.6 % and relative standard deviation was 1.07 %（n=6）. Conclusion： The method is sensitive， specific and accureate and can be used for the determination of glycyrrhizic acid in compound licorice tablets.

Key words：Compound liquorice tablets; UPLC-MS/MS; Glycyrrhizic acid

中圖分類號：R927.2

復方甘草片為常用復方制劑，其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油和苯甲酸鈉等，是鎮咳祛痰類非處方藥品[1]。復方甘草片的主要成分為甘草酸，目前主要采用HPLC-UV測定復方甘草片中甘草酸的含量，而復方制劑成分復雜，其有效成分的測定容易受到干擾，甘草酸峰與其他成分峰難以分離，重復性差，達不到分析要求[2-5]。UPLC-MS/MS具有很好的選擇性和靈敏度，特別適用于復雜樣品的分析，因此本文建立了UPLC-MS/MS法測定復方甘草片中甘草酸的含量，該方法快速、簡單、抗干擾性強，能有效地用于復方甘草片中甘草酸的質量控制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

（1）儀器。高效液相色譜儀（型號：1290，美國安捷倫公司）;三重串聯四級桿質譜儀（型號：G6460，美國安捷倫公司）;S1-T256渦旋混合器;超聲波清洗機（型號：CPX5800H-C，美國必能信上海科導儀器有限公司）;萬分之一電子天平（型號：XA205DU，上海梅特勒-托利多儀器有限公司）。

（2）試劑。甘草酸對照品（批號：G-004-170414，供實驗室藥品檢驗用，成都瑞芬思生物科技有限公司）;3批復方甘草片（批號分別為181219、190202、190303）均為市售品;甲醇、甲酸（色譜純，Thermo）;超純水由Milipore制備。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

Agilent EclipsePlus-C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;流動相：0.1甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V），流速為0.2 mL·min-1;柱溫：30 ℃;進樣量：5 μL。

1.2.2 質譜條件

采用電噴霧負電離源模式（Electronic spray ion，ESI）;掃描方式為多反應監測（Multiple reaction monitoring，MRM）;霧化氣壓力：30 psi;干燥氣溫度：300 ℃;干燥氣流速：8 L·min-1;毛細管電壓：4 000 V;碎裂電壓：165 V;定量離子碰撞能：45 eV，定性離子碰撞能：50 eV。

1.2.3 溶液的配制

（1）對照品溶液的制備。精密稱取甘草酸對照品15.67 mg于50 mL容量瓶，加甲醇，搖勻，作為對照品儲備溶液，精密吸取10 mL儲備液，置于100 mL容量瓶中，加甲醇，搖勻，即得每1 mL含有甘草酸31.32 μg的標準溶液，備用。

（2）樣品溶液的制備。取批次為190202的復方甘草片20片，稱重，研細，稱取相當于1片的量置于100 mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）適量，超聲提取處理（300 W，250 kHz）30 min，取出，冷卻，用甲醇-水（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取濾液1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇-水（1∶1）稀釋至刻度，搖勻后用0.22μm微孔濾膜過濾，濾液即為供試品溶液，備用。