動(dòng)物狂犬病診斷與防控

劉亮

摘要：狂犬病是嚴(yán)重危害我國公共衛(wèi)生的重要人獸共患病，也是我國目前患病率與死亡率高的烈性傳染病之一。人類感染狂犬病的主要來源于患狂犬病或攜帶狂犬病病原的動(dòng)物，因此有效防控動(dòng)物狂犬病是消滅人感染狂犬病的重要途徑。該文主要分析對動(dòng)物狂犬病進(jìn)行檢測及防控的措施，以期進(jìn)一步加強(qiáng)我國獸醫(yī)公共衛(wèi)生體系建設(shè)。

關(guān)鍵詞：狂犬病;人獸共患病;診斷;防控

中圖分類號：S854.4

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

doi：1 0.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.022

0 引言

隨著中國寵物行業(yè)的興起，犬貓的飼養(yǎng)在中國越來越流行，人類與犬貓的親密程度也在加深，因此一旦犬貓感染狂犬病病毒，其通過咬、舔的傷口就很容易使人感染狂犬病。而狂犬病作為一種烈性的人獸共患病，其感染后一旦出現(xiàn)臨床癥狀[1]，死亡率為100%，并且無任何藥物能治愈。因此，對疑似感染的動(dòng)物進(jìn)行檢測很有必要，可以避免造成人們的恐慌，此外還應(yīng)做好狂犬病的防治與監(jiān)控，降低人類感染動(dòng)物的可能。

1 診斷與檢測技術(shù)

1.1 動(dòng)物狂犬病腦組織樣品的直接免疫熒光檢測（DFA）

DFA是實(shí)驗(yàn)室確診狂犬病的唯一手段，其也是被世界衛(wèi)生組織和動(dòng)物衛(wèi)生組織所認(rèn)證的狂犬病實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。對疑似患病動(dòng)物進(jìn)行腦干、小腦或者海馬角的觸片與抹片制備，并進(jìn)行干燥和同定，抗體感染作用，漂洗及裝片，最終進(jìn)行結(jié)果判定。在實(shí)驗(yàn)室還未完成試驗(yàn)或者試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室沒有證實(shí)前均不能報(bào)告檢測的結(jié)果，如果對結(jié)果存有疑問時(shí)，應(yīng)進(jìn)行對樣品的重復(fù)檢測。

1.2狂犬病熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（FAVN）

FAVN主要是定量測定，應(yīng)用于動(dòng)物與人免疫接種后狂犬病中和抗體的水平的檢測和評價(jià)暴露前或者暴露后免疫的效果。先將疑似/易感動(dòng)物的血清稀釋并與稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒株（cvs-ll）中和，待中和后，加入稀釋好的BHK-21細(xì)胞，此時(shí)未被中止的病毒將會在BHK-21細(xì)胞上復(fù)制，細(xì)胞培養(yǎng)3d后，用80%的冷丙酮于- 20℃同定1h以上，用熒光抗體孵育、檢測并計(jì)算血清對病毒的半數(shù)中和稀釋度。在試驗(yàn)操作中應(yīng)設(shè)置OIE對照、WHO對照和陰性對照。只有在對照和病毒滴度結(jié)果均成立的情況下，此次檢測結(jié)果才有效。操作人員應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的暴露前免疫，并且血清抗體效價(jià)大于1.0IU/mL時(shí)才能批準(zhǔn)操作該試驗(yàn)[2]。

1.3狂犬病中和抗體的競爭ELISA檢測

狂犬病ELISA中和抗體檢測試劑盒是對動(dòng)物體內(nèi)的血清中和抗體效價(jià)進(jìn)行測定，用于免疫檢測，具有安全、準(zhǔn)確及快速的優(yōu)點(diǎn)。1977年，Atanasiu等人利用初步純化的狂犬病病毒的組織首次建立了間接ELISA方法，用于人血清抗體的定性檢測。1988年時(shí)，Barton等人建立了適用于野生動(dòng)物的狂犬病抗體ELISA定性檢測。2000年，CLiquet等用純化好的病毒糖蛋白為抗原，研發(fā)出狂犬病間接ELISA中和抗體定量檢測試劑盒，并且得到了世界動(dòng)物衛(wèi)生組織的認(rèn)可和推薦。但要注意需要在檢測前將濃縮的洗滌液用ddH_{2O稀釋并定容至200mL并混勻，可以用于稀釋酶標(biāo)抗體和洗滌酶聯(lián)板。}

1.4狂犬病病毒反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測法

RT-PCR的優(yōu)點(diǎn)在于其具有高通量、高靈敏度和高特異性的特點(diǎn)，可以應(yīng)用于大規(guī)模樣品的初步篩選，并且其對結(jié)果可直接用于核酸序列的分析;檢測結(jié)果直觀，易于判定;該方法也可從不適宜組織學(xué)檢測或病毒分離的腐敗樣品中檢測病毒核酸。但其結(jié)果不能直接作為確診的依據(jù)，僅可作為參考。

1.5狂犬病病毒熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）快速檢測法

FQ-PCR快速檢測法是在RT-PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其優(yōu)點(diǎn)是快速檢測、準(zhǔn)確定量、高特異性、高靈敏度、交叉污染率低，可以采用一步熒光定量RT-P CRTaqman法和兩步熒光定量RT-PCR法檢測狂犬病病毒基因[3]。在操作中要注意RT-PCR檢測法中的注意事項(xiàng)，還應(yīng)注意將各種試劑在冰上融化后分裝，避免試劑被反復(fù)凍融;在配制FQ-PCR體系時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光直射，現(xiàn)配現(xiàn)用;移液器和熒光定量PCR儀應(yīng)定期校驗(yàn)。在進(jìn)行結(jié)果判定時(shí)，陽性結(jié)果的ct值應(yīng)小于32，并且一定要出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，表明其中存在狂犬病病毒;陰性對照應(yīng)ct值且無經(jīng)典曲線，表明其中存在狂犬病病毒，還有一個(gè)有效原則就是當(dāng)ct值大于32并且出現(xiàn)經(jīng)典的擴(kuò)增線曲，建議將試驗(yàn)重新做一次，如果結(jié)果出現(xiàn)ct值和典型的擴(kuò)增曲線則為陽性，否則為陰性。

1.6金標(biāo)試紙條在狂犬病抗原抗體中的檢測應(yīng)用

世界衛(wèi)生組織報(bào)告中指出，血清抗體濃度要達(dá)到0.5IU/mL以上疫曲接種才能達(dá)到有效保護(hù)。該方法由于不直接接觸狂犬病病毒，因此在一般的實(shí)驗(yàn)室均可以用其對血清抗體進(jìn)行檢測，其特點(diǎn)是快速、便捷。但要注意該試紙條只適合用于犬貓等動(dòng)物的狂犬病病毒血清抗體檢測。

1.7乳鼠南內(nèi)接種試驗(yàn)（MIT）

MIT檢測是一種簡單易于操作的診斷方法，該方法由Koprowski等建立，后期由世界衛(wèi)生組織專家委員會認(rèn)可，并列為狂犬病的診斷方法之一。其主要應(yīng)用于狂犬病病毒的分離、毒力強(qiáng)弱的測定、抗體水平的檢測、疫苗效果的評價(jià)。但其缺點(diǎn)是試驗(yàn)周期較長，且僅依靠動(dòng)物發(fā)病的癥狀并不能確定其為狂犬病病毒感染，要輔助電鏡和免疫熒光法作特異性鑒定。

2 人類狂犬病的防控

（1）必須從根本上杜絕狂犬病從動(dòng)物傳至人，應(yīng)積極響應(yīng)國家制定的對犬貓進(jìn)行強(qiáng)制性免疫接種的法規(guī)，從根本上消滅傳染源，這樣人就沒有必要再進(jìn)行疫苗接種與檢測。

（2）犬貓主人要明確一點(diǎn)，動(dòng)物的狂犬病疫苗比人類要便宜，因此給犬貓進(jìn)行免疫是防止人發(fā)生傳染病的最簡單、有效方法。犬貓主人應(yīng)主動(dòng)對犬進(jìn)行定期的疫苗注射，每年1-2次，并且鄰里之間應(yīng)互相監(jiān)督提醒，讓每只犬都能進(jìn)行接種。

（3）犬貓主人應(yīng)對家養(yǎng)動(dòng)物進(jìn)行栓養(yǎng)，尤其是去公共場所，既防止家養(yǎng)犬貓傷人，也避免其他流浪犬貓帶來感染。對家養(yǎng)犬貓進(jìn)行及時(shí)絕育，減少流浪貓狗的出生數(shù)量，也能為犬貓避免子宮蓄膿、卵巢囊腫等疾病。

（4）對于檢測出患狂犬病或者帶毒的犬貓，應(yīng)按照動(dòng)物重大疫病防控方法，進(jìn)行及時(shí)捕殺處理，對于抗體不達(dá)標(biāo)或者尚未進(jìn)行疫苗注射的動(dòng)物，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充注射疫苗，以降低犬貓對狂犬病病毒的易感一性，從根本上預(yù)防和控制狂犬病的發(fā)生和流行。

（5）暴露后應(yīng)及時(shí)進(jìn)行預(yù)防性治療。因抗體在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生需要一定的時(shí)間，因此，當(dāng)機(jī)體暴露后應(yīng)及時(shí)接種狂犬病疫苗和狂犬病免疫抗血清，這也是抑制組織病毒感染最有利的時(shí)機(jī)。

3 結(jié)束語

從根本上消除狂犬病，還得從改變?nèi)藗兊乃枷胗^念開始，提高人們自身的道德修養(yǎng);強(qiáng)化法律法規(guī)的監(jiān)督作用;加快狂犬病診斷的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張菲，張守峰，唐青，等我同狂犬病現(xiàn)狀與防控意見[J]中同人獸共患病學(xué)報(bào)，2010，26（ 4）：381-388.

[2]蹇慧，劉力.狂犬病診斷與防制研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2006，25（ 2）：19-21

[3]李靜.狂犬病的實(shí)驗(yàn)室診斷在臨床狂犬病診斷中應(yīng)用的研究[D].瀘州：瀘州醫(yī)學(xué)院，2009