解淀粉芽孢桿菌ZJ01及其復(fù)配制劑對棗黑斑病的防治效果

張獻輝 李紅敏 李全勝

摘要：為了研發(fā)控制黑斑病的生物防治方法，以平板對峙法測定解淀粉芽孢桿菌ZJ01和枯草芽孢桿菌對棗黑斑病菌的抑制效果，并采用田間噴霧法分析這2種菌在不同濃度、不同時期以及與殺菌劑混施時對棗黑斑病防治效果。結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌ZJ01和枯草芽孢桿菌對棗黑斑病菌均有較強的抑制作用，抑制率分別為77.53%、81.38%。2種生防菌能明顯降低黑斑病發(fā)生，其中以解淀粉芽孢桿菌ZJ01菌懸液100倍液和多抗霉素200倍液混施的防治效果最好，發(fā)病率控制在2.12%，防效高達85.87%。

關(guān)鍵詞：棗;病害;生物防治;解淀粉芽孢桿菌;黑斑病

中圖分類號： S436.65 ?文獻標(biāo)志碼： A ?文章編號：1002-1302（2019）13-0137-03

棗（Ziziphus jujuba Mill.）是原產(chǎn)中國并且獨具特色的重要果樹，已有七千多年的栽培歷史;棗果的藥用價值和營養(yǎng)價值都很高，是典型藥食兼用的果品之一[1]。日照長、溫差大、土壤通透性好等新疆獨特的自然條件特別適合棗樹生長，使新疆成為棗樹的主要優(yōu)生區(qū)之一。隨著新疆棗樹產(chǎn)業(yè)的大力發(fā)展，截至2016年年底，種植面積已達50.45萬hm2，居全國首位[2]。紅棗產(chǎn)業(yè)是新疆發(fā)展最快、效益最突出、惠民成效最顯著的一項產(chǎn)業(yè)[3]。然而自2010年以來，棗黑斑病在南疆墾區(qū)發(fā)生普遍，病果率可達30%以上。棗黑斑病危害棗果、棗葉和棗花，甚至已嚴(yán)重影響新疆紅棗產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[4]。

生物農(nóng)藥符合環(huán)境保護、食品安全和人類健康的需要，是目前條件下化學(xué)殺菌劑的理想替代品，獲得高效生防菌是生物防治的基礎(chǔ)。解淀粉芽孢桿菌ZJ01（生防菌ZJ01）是由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國棗研究中心篩選的對棗樹鏈格孢、毀滅莖點霉等病原菌具有較強抑制作用的一種生防細(xì)菌，新疆農(nóng)墾科學(xué)院林園研究所自2011年引入。芽孢桿菌屬菌株通過分泌抗菌物質(zhì)、營養(yǎng)競爭和誘導(dǎo)植株產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方式在防治植物病害中發(fā)揮著重要作用[5-8]。本研究以生防菌ZJ01和枯草芽胞桿菌為試材，通過平板試驗、大田試驗，明確生防菌ZJ01對棗黑斑病的抑制作用及其防治效果，為今后大面積推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株為河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國棗研究中心提供的解淀粉芽孢桿菌ZJ01（生防菌ZJ01）。60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、25%醚菌酯懸浮劑、3%多抗霉素可濕性粉劑，市售;10億活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（保定市綠豐生化科技有限公司）。

試驗地點位于新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團44團10連15號駿棗園，試驗時間2017年5—11月，供試品種為9年生駿棗，試驗面積0.15 hm2，棗樹株行距為2 m×3 m，長勢良好，耕作條件一致。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備 以PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)棗黑斑病菌和生防菌;以NB培養(yǎng)液進行生防菌的液體培養(yǎng)。具體方法參照方中達的植病研究方法[9]。

1.2.2 生防菌ZJ01的發(fā)酵 生防菌ZJ01的發(fā)酵委托河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護研究所進行，發(fā)酵后配制為5.0×109 CFU/L 懸浮液，備用。

1.2.3 棗黑斑病的平皿對峙 采用平皿對峙法[10]，進行10億/g枯草芽孢桿菌及生防菌ZJ01對棗黑斑病的抑制分析。在超凈工作臺上將PDA培養(yǎng)基倒平板凝固之后備用，分別挑取新鮮培養(yǎng)的病原菌菌餅（直徑6 mm）放在PDA培養(yǎng)基平板一側(cè)的中間，同時在相對一側(cè)的中間放置同樣大小的芽孢桿菌菌餅，二者相距2 cm，以未置芽孢桿菌的病原菌平板為對照。以上每處理重復(fù)3次，25 ℃恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)7 d后觀察并測量抑菌圈直徑大小，計算抑制率。

抑制率=對照菌落直徑-處理菌落直徑對照菌落直徑×100%。

1.2.4 棗黑斑病的田間防治 設(shè)置3個濃度梯度，以清水為對照。每個處理為1個小區(qū)，每個小區(qū)重復(fù)2次，共30個小區(qū)，隨機排列。試驗在無陰雨條件下進行。5月15日進行第1次噴施，間隔期15～20 d，共4次。在7月下旬田間發(fā)病前標(biāo)定調(diào)查樣株，每株分中部方位中西南北4個方向標(biāo)定4枝，枝齡2年以上，每枝定果5個棗吊共計20個棗吊，于10月中下旬棗果黑斑病發(fā)病盛期調(diào)查發(fā)病情況（表1）。

發(fā)病率=調(diào)查發(fā)病果數(shù)/調(diào)查棗果總數(shù)×100%;

病情指數(shù)=∑（各級發(fā)病數(shù)×各級代表值）/（調(diào)查總果數(shù)×最高級代表值）×100;相對防效=（對照發(fā)病率-處理發(fā)病率）/對照發(fā)病率×100%。

1.2.5 不同噴施時期對黑斑病田間防治效果 藥劑為稀釋100倍的生防菌ZJ01懸浮液，設(shè)5個噴施時期：（1）花期;（2）幼果期;（3）果實膨大期;（4）果實白熟期;（5）果實半紅期。每個處理為1個小區(qū)，每個小區(qū)重復(fù)2次，共10個小區(qū)，隨機排列。調(diào)查方法同“1.2.4”節(jié)。

1.2.6 生防菌ZJ01與低濃度化學(xué)藥劑混施試驗 試驗處理：解淀粉芽孢桿菌ZJ01懸浮液及60%唑醚·代森聯(lián)、25%醚菌酯、3%多抗霉素2個較佳濃度混合即ZJ01懸浮液100倍液+60%唑醚·代森聯(lián)1 500倍液、ZJ01懸浮液100倍 液+60%唑醚·代森聯(lián)2 000倍液、ZJ01懸浮液100倍液+25%醚菌酯2 000倍液、ZJ01懸浮液100倍液+25%醚菌酯2 500倍液、ZJ01懸浮液100倍液+3%多抗霉素100倍液、ZJ01懸浮液100倍液+3%多抗霉素200倍液6個處理，每個處理為1個小區(qū)，每個小區(qū)重復(fù)2次，共12個小區(qū)，隨機排列。試驗于5月15日第1次施藥，之后每15～20 d施藥1次，共施藥4次。調(diào)查方法同“1.2.4”節(jié)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用DPS 7.05軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌劑對病原菌的抑制作用

通過平板對峙法測定了生防菌ZJ01和枯草芽孢桿菌對棗黑斑病病原（鏈格孢菌）的抑制作用（圖1）。結(jié)果表明，生防菌ZJ01和枯草芽孢桿菌均有較強的抑制作用，抑制率分別為 77.53%、81.38%。

2.2 生防菌ZJ01不同劑量對棗黑斑病的田間防效

生防菌ZJ01菌懸液100倍液、不同濃度的化學(xué)藥劑的防效均超過70%，表明生防菌ZJ01對黑斑病有較強的防治效果。生防菌ZJ01相比枯草芽孢桿菌對棗黑斑病的整體防治效果較好，3%多抗霉素200倍液對棗黑斑病的防治效果最好，發(fā)病率控制在2.92%，病情指數(shù)為1.67，防效高達 80.53%，效果稍好于3%多抗霉素100倍液的效果，與其余各處理差異顯著（表2）。

2.3 生防菌ZJ01不同噴施時期對黑斑病的防治效果

通過田間噴施試驗發(fā)現(xiàn)，不同噴施時期對黑斑病防治效果差異顯著，在果實膨大期噴施菌劑對黑斑病防效最好，為58.33%，發(fā)病率和病情指數(shù)也比較低，分別為6.25%、3.44，在果樹花期和幼果期噴施菌劑對黑斑病均有一些效果，好于果實白熟期以后噴施（表3）。

2.4 生防菌ZJ01與低濃度藥劑混施對黑斑病的田間防治效果

田間試驗表明，生防菌ZJ01與低濃度化學(xué)藥劑混施可提高化學(xué)藥劑防治效果（表4）。生防菌ZJ01菌懸液與3%多抗霉素對黑斑病防治效果均優(yōu)于各個藥劑單施，其中生防菌ZJ01 100倍液與3%多抗霉素200倍液混施防效最好，為85.87%;生防菌ZJ01與60%唑醚·代森聯(lián)混施對黑斑病防治效果均優(yōu)于各個藥劑單施，其中生防菌ZJ01 100倍液與60%唑醚·代森聯(lián)1 500倍液混施防效較好;生防菌ZJ01菌懸液與25%醚菌酯混施效果優(yōu)于25%醚菌酯單施，低于生防菌ZJ01菌懸液100倍液單施。

3 結(jié)論與討論

目前，生產(chǎn)上用于防治棗黑斑病的藥劑主要包括唑醚·代森聯(lián)、多抗霉素、醚菌酯、多菌靈、代森錳鋅等殺菌劑。隨著人們對于食品安全的關(guān)注，病害抗藥性的產(chǎn)生，化學(xué)藥劑對環(huán)境的污染日益嚴(yán)重，棗樹果實病害防治新方法成為研究熱點，其中以采用拮抗菌、中草藥、以及藥劑與拮抗菌結(jié)合的方式為主[11-13]。與用中草藥防治果樹病害相比，生防菌株制作過程簡單，且價格低廉，易獲得而更受青睞。齊愛勇等14、申紅妙等[15]以芽孢桿菌為試材測試了標(biāo)記菌株的穩(wěn)定性及其對葡萄霜霉病菌的抑制作用，本研究發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌對鏈格孢菌有較強的抑制作用說明了芽孢桿菌抑菌具有廣譜性。王軍等用枯草芽孢桿菌菌株XL12發(fā)酵液對冬棗黑斑病進行了田間小區(qū)防治試驗，結(jié)果表明防治效果達到80%以上，明顯高于化學(xué)藥劑的防治效果[16]，本研究中相對防效低于該研究中的防效可能與新疆南疆地區(qū)特殊干燥的氣候條件有關(guān)，有待進一步研究。薛夢林等研究得出成團泛菌B501和梅奇酵母新種（M. zizyphicola XY201）的生防效力通過改良劑氯化鈣得以提高，而且與低濃度化學(xué)殺菌劑撲海因或施?？说慕M合使用也是一種有效的方法[17]。本研究以生防菌ZJ01懸浮液與低濃度化學(xué)藥劑多抗霉素混施對棗黑斑病進行了田間防治，發(fā)現(xiàn)在棗花期到果實膨大期適當(dāng)選用低濃度高效的化學(xué)殺菌劑，同時配合ZJ01生防制劑可以起到非常好的防治黑斑病的效果。

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