COX-2和PCNA在膀胱白斑中表達(dá)的研究

陳樂(lè)仲， 田小園， 徐傳彬， 張 宇， 何思挺

(廣東省深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科， 廣東 深圳 518102)

COX-2和PCNA在膀胱白斑中表達(dá)的研究

陳樂(lè)仲， 田小園， 徐傳彬， 張 宇， 何思挺

(廣東省深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科， 廣東 深圳 518102)

目的：探討COX-2和PCNA在膀胱白斑中的表達(dá)以及臨床意義。方法：采用免疫祖化S-P法，檢測(cè)26例膀胱白斑患者以及26例正常尿路上皮以及膀胱癌組織中COX-2和PCNA的表達(dá)情況。結(jié)果：兩種蛋白在正常尿路上皮中偶見(jiàn)表達(dá)，在膀胱白斑中COX-2的陽(yáng)性表達(dá)為46.15%，膀胱白斑中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)為53.84%。在膀胱癌中COX-2的陽(yáng)性表達(dá)為76.92%，PCNA的陽(yáng)性表達(dá)為69.23%。結(jié)論：COX-2和PCNA的表達(dá)與膀胱白斑的發(fā)生相關(guān)，膀胱白斑的發(fā)生以及進(jìn)展可以與膀胱癌的發(fā)生有一定的相關(guān)性。

膀胱白斑； 免疫組織化學(xué)； 環(huán)氧合酶-2； 增殖細(xì)胞核抗原

研究表明腫瘤的的發(fā)生可能與多個(gè)原癌激活與抑癌基因失活等多階段的過(guò)程。COX-2(環(huán)氧合酶2)是催化花生四烯酸氧化合成為前列腺素類(lèi)過(guò)程重要的限速酶,COX-2在正常的組織中較少表達(dá)，而在各種腫瘤組織以及炎性反應(yīng)等情況中表達(dá)升高。PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)是反應(yīng)細(xì)胞增生的指標(biāo)，在多種腫瘤組織中均有表達(dá)增高的情況。本研究通過(guò)免疫組化方法，檢測(cè)COX-2以及PCNA在膀胱白斑中的表達(dá)，以探討COX-2以及PCNA在膀胱白斑發(fā)生以及發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2013年1月至2016年8月在我院經(jīng)過(guò)膀胱鏡檢查并且經(jīng)活檢病理證實(shí)為膀胱白斑患者26例，患者均為女性，年齡39～55歲，平均年齡42.25±9.86歲。單發(fā)的16例，多發(fā)的10例患者，全部活檢組織再次經(jīng)過(guò)10%的福爾馬林固定以及石蠟包埋固定。選擇同時(shí)期在我院行膀胱鏡檢查活檢正常的尿路上皮組織以及膀胱癌患者各26例作為對(duì)照組。

1.2 免疫組化方法：將包埋的蠟塊標(biāo)本行4μm的連續(xù)切片，切片脫蠟后予以過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性酶進(jìn)行抗原修復(fù)。嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行免疫組化染色試驗(yàn)操作流程，使用血清封閉液封閉，室溫下20min后移除多余血清，緩沖液清洗后加入一抗后，4℃過(guò)夜，緩沖液清洗后再加入2抗，緩沖液清洗后加入顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染后后中性樹(shù)脂封片。

1.3 觀察指標(biāo)：根據(jù)染色的強(qiáng)度以及顯色細(xì)胞的比例將染色分為4級(jí)：按照染色深淺評(píng)分,COX-2細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為0(-)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%的為(+)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25～50%的為(++)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%的為(+++)。PCNA定位于細(xì)胞核中，分級(jí)如下：細(xì)胞無(wú)著色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-)；細(xì)胞輕度著色至當(dāng)黃色，陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目在11%～25%的為弱陽(yáng)性(+)；細(xì)胞著色為黃色，陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目26%～50%的為陽(yáng)性(++)；細(xì)胞明顯著色，呈棕黃色，陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目>50%的為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。在顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)高倍視野，按照以上標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。以已知的胃癌做陽(yáng)性對(duì)照，以正常的尿路上皮組織做陰性對(duì)照。

2 結(jié) 果

2.1 三組患者的一般資料比較：由表1可知，三組患者在性別、年齡方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

表1 三組患者的一般資料對(duì)比

2.2 COX-2與PCNA在正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌組織中的表達(dá)：COX-2是以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃-棕色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)，正常的尿路上皮中少見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，而膀胱白斑中的COX-2表達(dá)明顯增多，在膀胱癌的大部分病例中均見(jiàn)COX-2的表達(dá)。PCNA定位于細(xì)胞核中，正常的尿路上皮中偶見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，而膀胱白斑中的PCNA表達(dá)明顯增多，在膀胱癌的大部分病例中均見(jiàn)PCNA的表達(dá)(見(jiàn)圖1)。

圖1 A～E為正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表達(dá)情況(其中圖A、圖B為正常尿路上皮；圖C、圖D為膀胱白斑；圖E、圖F為膀胱癌)。圖G～M為PACA E為正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表達(dá)情況(其中圖G、圖H為正常尿路上皮；圖I、圖D為膀胱白斑；圖K、圖M為膀胱癌)。

2.3 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌組織的表達(dá)情況：正常尿路上皮中，有1例呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，1例呈現(xiàn)中等強(qiáng)度陽(yáng)性反應(yīng)；而在膀胱白斑中COX-2有46.15%(12/26)呈陽(yáng)性表達(dá)，其中8例呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，4例呈現(xiàn)中等強(qiáng)度陽(yáng)性反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；在膀胱癌的76.92%(20/26)病例中均見(jiàn)COX-2的陽(yáng)性表達(dá)，但三組組間比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表達(dá)

2.4 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌組織的表達(dá)情況：正常尿路上皮中，僅有1例呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，而在膀胱白斑中的PCNA有53.84%(14/26)的病例呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，其中弱陽(yáng)性10例，中等強(qiáng)度陽(yáng)性3例，1例強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。膀胱癌中有69.23%(18/26)的病例陽(yáng)性表達(dá)，其中弱陽(yáng)性3例，中等強(qiáng)度陽(yáng)性14例，1例強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。但三組組間比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表達(dá)

3 討 論

膀胱白斑的形成目前主要認(rèn)為是由于膀胱移行上皮化生為鱗狀上皮，胞核較幼稚，且胞漿內(nèi)可見(jiàn)較豐富的張力原纖維，在連接部位可見(jiàn)豐富的橋粒結(jié)構(gòu)，表層細(xì)胞有明顯的角質(zhì)化，形成角質(zhì)蛋白[1]，隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步以及認(rèn)識(shí)的擴(kuò)展，近年來(lái)的報(bào)道逐漸增多，因其與慢性膀胱炎在臨床癥狀與體征上無(wú)顯著的差異，且尿常規(guī)以及尿培養(yǎng)也常表現(xiàn)為陰性，因此，常易漏診以及誤診。膀胱白斑發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，認(rèn)為可能與長(zhǎng)期的膀胱慢性刺激，下尿路感染，梗阻以及增生性病變有關(guān)，其診斷主要依靠膀胱鏡檢、在膀胱鏡下主要表現(xiàn)為多見(jiàn)于膀胱三角區(qū)的膀胱粘膜白色斑塊狀隆起，在病理檢查上可分為增生型，疣狀型以及萎縮型[2,3]。

環(huán)氧化酶是催化花生四烯酸氧化合成為前列腺素類(lèi)過(guò)程重要的限速酶,目前發(fā)現(xiàn)有兩種亞型，COX-1(環(huán)氧合酶1)與COX-2(環(huán)氧合酶2)，COX-2在人體正常的組織中較少表達(dá)或者無(wú)表達(dá)，而在各種腫瘤組織以及炎性反應(yīng)等情況中表達(dá)升高，如胃癌[4-6]、食管癌[7,8]、前列腺癌、肺腺癌以及乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等均發(fā)現(xiàn)高表達(dá)情況，可能與該基因能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，激活癌基因，抑制抑癌基因、腫瘤細(xì)胞凋亡以及機(jī)體抗腫瘤免疫相關(guān)；研究表明COX-2尚能參與實(shí)體腫瘤的血管新生，在膀胱癌中，研究發(fā)現(xiàn)COX-2呈現(xiàn)高表達(dá)的情況，且與腫瘤的分級(jí)以及分期呈正相關(guān)。PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)是DNA聚酶的輔酶，能直接參與細(xì)胞內(nèi)DNA的合成，反應(yīng)細(xì)胞增生的情況，且在增殖的細(xì)胞中表達(dá)，而腫瘤細(xì)胞中均有顯著增殖的情況發(fā)生，因此PCNA在多種腫瘤組織中均有表達(dá)增高的情況。研究表明，在泌尿系統(tǒng)膀胱癌中PCNA的增殖隨著分級(jí)的逐漸增高而增加，且浸潤(rùn)性的高于淺表性腫瘤，復(fù)發(fā)性腫瘤高于未復(fù)發(fā)性腫瘤。

本研究通過(guò)免疫組化SP法，以檢測(cè)COX-2和PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)COX-2是以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃-棕色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)，正常的尿路上皮中少見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，而膀胱白斑中的COX-2表達(dá)明顯增多，其陽(yáng)性表達(dá)可達(dá)46.15%，但低于膀胱癌中76.92%的陽(yáng)性表達(dá)。而PCNA定位于細(xì)胞核中，正常的尿路上皮中偶見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，而膀胱白斑中的PCNA表達(dá)明顯增多，為53.84%，而在膀胱癌的PCNA的陽(yáng)性表達(dá)為69.23%，但兩種蛋白的表達(dá)差異情況在三組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明膀胱白斑不是慢性炎性反應(yīng)而造成的，而是一種病理性改變，是可能向著膀胱癌發(fā)展的癌前病變，在臨床發(fā)現(xiàn)診斷后均應(yīng)該積極的及時(shí)的治療。

[1] 唐秀英,葉章群,官陽(yáng),等.膀胱白斑的超微病理學(xué)研究[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2005,22(10):1227～1228.

[2] 唐秀英,葉章群,唐敏,等.膀胱白斑的臨床診斷[J].臨床泌尿外科雜志,2006,21(5):353～354.

[3] 王曉東,杜恒,李浩,等.膀胱白斑的臨床診斷與治療分析[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志,2015,(11):846～848.

[4] 孫海兵,魏永長(zhǎng),涂宏蕾,等.COX-2、PKC-α和miR-101在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,(4):559～562.

[5] 羅玉琴,孫安華,張學(xué)庸.淺表性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌組織中COX-1、COX-2、iNOS表達(dá)的意義[J].中華消化雜志,2000,(4):3～6.

[6] 吳志麗,孫國(guó)平,吳強(qiáng),等.Cox-2和Her-2/neu在胃癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].安徽醫(yī)藥,2010,(10):1171～1173.

[7] 劉俊茹,王原,左連富,等.COX-2、p-Stat3及p-Stat5在食管癌組織中的表達(dá)及其意義[J].癌癥,2007,(5):458～462.

[8] 冷玉玲,孫國(guó)平,馬泰,等.COX-2和HER-2在食管鱗癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].安徽醫(yī)藥,2011,(7):874～876.

Expression of Cyclooxygenase-2 and Proliferating Cell Nuclear Antigen in Bladder Leukoplakia

CHENLezhong,TIANXiaoyuan,etal

(TheCentralHospitalinBaoanDistrictofShenzhen,GuangdongShenzhen518102,China)

Objective:To explore the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia.Methods: The expressions of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in 26 cases of bladder leukoplakia and 26 cases of normal urothelium and 26 cases of bladder carcinoma were detected by immunohistochemistry S-P method. Results: Two kinds of protein expression in normal urothelial were occasional, the expression of cyclooxygenase-2 in bladder leukoplakia was 46.15% and bladder cancer was 76.92%, the expression of proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia was 53.84% and bladder cancer was 69.23%. Conclusion: The expression of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen is correlated with the occurrence of bladder leukoplakia, and the occurrence and progression of bladder leukoplakia may be related to the occurrence of bladder cancer.

Bladder leukoplakia; Immunohistochemistry; Cyclooxygenase-2; Proliferating cell nuclear antigen

1006-6233(2017)04-0659-04

廣東省深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：JCYJ20150403150555637)

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.04.037