一種止血材料在肺出血模型中的止血效果和安全性評價*

何小華，鄭曉霞，黃艷妮，劉純，程艷玲

(山東省藥學科學院，濟南 250101)

1 引 言

外科手術止血不及時或不徹底導致失血過多時有發生[1-2]，常用結扎、縫合、電凝、可吸收多糖止血夾等方法止血[3]，效果明顯。胸外科手術出血，影響手術視野，嚴重時導致患者死亡。在止血過程中，常規止血方法不能進行大范圍止血，而電凝會導致傷口及周圍組織損傷[4]。目前，用于臨床的止血材料較多，如奧地利的Taehocomd 可吸收多糖創面止血封固劑，英國的Surgicel 氧化再生纖維素，均有止血效果[5-6]，但都具有一定的局限性，如 Taehocomd 的止血效果慢，而 Surgicel對神經組織有毒副作用[7-8]，增添了手術風險。因此，胸外科手術亟需一種安全、有效、物美價廉的止血材料。本研究旨在通過建立巴馬小型豬肺部創面出血模型，觀察可吸收多糖止血材料作用于肺出血創面達到完全止血的時間、出血量及材料用量，并對可吸收多糖止血材料的安全性進行評價。

2 材料和方法

2.1 動物、試劑與儀器

巴馬小型豬，由北京實創世紀小型豬養殖基地提供，10只，6月齡以上，雌雄各半，體重10～15 kg，動物合格證號為1103491911000014。

可吸收多糖止血材料，1.0 g/支，日照天一生物醫療科技有限公司；外科術中止血裝置，SM005，巴德醫療科技有限公司；速眠新，2 mL/支，敦化市圣達動物藥品有限公司；硫酸阿托品注射液，2 mL/支，芮城天通動保藥業有限公司；戊巴比妥鈉，25 g/瓶，德國默克公司；頭孢噻呋鈉，0.1 g/支，河南新正好生物工程有限公司。

電子天平，LE203E/02，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；電子計價秤，ACS-JJ-Tiger，梅特勒-托利多(常州)測量技術有限公司；全自動生化分析儀，日立7180，日本株式會社日立高新技術有限公司；全自動血凝分析儀，SYSMEX CA1500，日本SYSMEX公司；全自動血液分析儀，SYSMEX XT-2000iv，日本SYSMEX公司。

2.2 建立巴馬小型豬肺出血模型

用速眠新(0.1 mL/kg)進行小型豬基礎麻醉，待臥倒后，再用1%戊巴比妥鈉(20 mg/kg)維持麻醉。常規消毒，打開胸腔，在肺底部邊緣剪下長約1 cm肺組織，清除周圍血液，暴露出血點，立即將供試品直接噴在出血部位，直至止血完成并觀察止血情況。記錄止血時間，出血量及樣品使用量。上市對照組做同樣處理。紗布對照組使用已精確稱重的無菌紗布壓創口，持續按壓1 min，此后每隔30 s觀察一次，直至止血完畢，用少量生理鹽水浸透紗布，輕輕揭開，以免造成再次出血，如止血超過5 min，則記錄5 min，認為紗布止血無效。

術后處理：術后包扎固定傷口，返回籠中飼養7 d。術后連續3 d肌注頭孢噻肟鈉20 mg/kg/次/d，每天觀察動物活動情況。術前，剖檢前進行臨檢相關指標檢測。

2.3 巴馬小型豬各臟器解剖觀察

所有實驗組的小型豬于術后7 d進行解剖，取心、肝、脾、肺、腎、腦，觀察各臟器體重變化及樣品組織粘附性、降解情況、組織反應及有無血栓形成情況。

2.4 統計學處理

3 結果

3.1 止血試驗結果

紗布對照組、供試品組與上市對照組的止血試驗結果見表1。與紗布對照組比較，供試品組與上市對照組肺出血創面止血時間均顯著縮短(P<0.01)，供試品組肺創面出血量明顯減少(P<0.05)，上市對照組出血量減少，但與紗布對照組比較，無顯著差異(P>0.05)；供試品組肺出血創面樣品用量比上市對照組減少(P<0.05)，止血時間和出血量無顯著差異(P>0.05)。

紗布對照組、供試品組與上市對照組術中止血效果觀察評分見表1。與紗布對照組比較，供試品組與上市對照組肺出血創面的止血效果均為優良(P<0.01)，且供試品組的出血量少，手術視野比更好 ，見圖1。

術后7 d，各組小型豬肺部創面全部愈合，因此，供試品組和上市對照組對傷口愈合時間未見明顯影響。

組別止血時間(s)出血量(mL)止血材料用量(mg)止血評分紗布對照組250.17±80.231.35±0.850.00±0.000.67±1.03供試品組33.69±19.31??0.43±0.36?144.00±76.96△3.83±0.41??上市對照組40.95±20.22??0.80±0.78421.17±248.593.50±0.84??

注：n=3，*P<0.05，**P<0.01，與紗布對照組比較；△P<0.05，與上市對照組比較。

3.2 術后臨床及解剖觀察

各組小豬術后3 d，精神稍差，活動減少，飲食稍偏少，二便正常。術后7 d，查體傷口愈合良好，可見少許線結反應，未見明顯感染跡象，見圖1。

圖1各組巴馬小型豬傷口愈合情況

Fig.1Wound healing of Bama mini pig in each group

肺出血創面剖檢觀察：7 d后剖檢，各組小型豬胸壁切口與肺組織有黏連，肺切口處部分組織實變，未見明顯血栓形成病變，見圖2。因此，可吸收多糖止血材料對傷口愈合沒有明顯影響。

圖2各組巴馬小型豬胸壁與周圍肺組織黏連情況

Fig.2Adhesion of chest wall and peripheral lung tissue of Bama mini pig in each group

3.3 所有實驗組各臟器體重變化比較

各組解剖臟器體重占比見表2。術后7 d，供試品組與紗布對照組腦體重占比分別為3.01±0.33、3.29±0.53，統計學分析有顯著差異(P<0.05)。術后7 d，供試品組和上市對照組腦體重均減輕，供試品組減輕更明顯。

項目名稱紗布對照組供試品組上市對照組心5.19±0.485.44±0.375.21±0.29肝28.95±3.1823.37±1.7425.38±8.47脾2.54±0.172.32±0.242.22±0.32肺13.99±5.1219.89±10.7716.10±1.63腦3.29±0.533.01±0.33?3.13±0.39腎3.20±0.383.10±0.133.11±0.31

注：n=3，*P<0.05，與紗布對照組比較。

3.4 臨床檢測測定

3.4.1血液學指標檢查結果 血液學指標屬于正常范圍。紗布對照組、供試品組和上市對照組的小型豬肺部手術前后血液學指標自身對照及變化率比較，組間有差異，見表3、表4，但統計學分析無顯著差異(P>0.05)。

3.4.2血凝指標檢測結果 血凝指標屬于正常范圍。巴馬小豬肺部手術前后紗布對照組凝血酶原時間分別為(11.3±0.17) s，(11.93±0.12) s，統計結果顯示有顯著差異(P<0.05)；各組凝血酶原時間均增加，但紗布對照組增加更明顯，見表5；各組血凝指標變化率組間比較有差異，但無顯著差異(P>0.05)，見表6。

表3 巴馬小型豬肺部創傷d0與d7血液學指標檢查結果Table 3 The results of hematology indexes inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，d0與d7自身對照比較.

表4 巴馬小型豬肺部創傷d0與d7血液學指標變化率Table 4 Thechange rate of hematology indexes in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，與紗布對照組比較。

3.4.3血生化指標檢查結果 巴馬小型豬血生化指標屬于正常范圍，d0與d7自身對照及三組血生化指標變化率比較均無顯著差異。

表5 巴馬小型豬肺部創傷d0與d7血凝指標檢查結果Table 5 The results of coagulation index inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，*P<0.05，d0與d7比較.

表6 巴馬小型豬肺部創傷d0與d7血凝指標變化率比較Table 6 The change rate ofcoagulation index in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，與紗布對照組比較。

4 討論

臨床上理想的止血材料應具備安全、無毒、有效的同時還應不影響組織的愈合，減少或不產生組織黏連，不增加感染率等特征[9-10]。目前止血材料止血試驗的文獻很多，但大部分的止血研究以小動物或兔的腹腔臟器和體表出血模型為主，且對止血材料進行安全性評價的很少[11]。本研究旨在對可吸收多糖止血材料在大動物豬胸腔肺出血模型進行止血效果研究，并對其安全性進行評價。通過止血模型止血效果對比，可吸收多糖止血材料止血效果明顯，在止血時間、出血量和術中出血觀察效果略優于上市對照組。結合臨檢指標、術后大體觀察及剖檢進行生物安全性評價，結果顯示，可吸收多糖止血材料不影響組織愈合，不增加感染幾率，僅切口附近有少部分肺組織產生黏連，肺組織未見明顯血栓形成病變。

綜上所述，可吸收多糖止血材料對豬胸腔肺出血模型具有較好的止血作用，同時不影響組織愈合，無感染，傷口無血栓形成，不引起組織廣泛黏連，可作為臨床胸外科手術中一種理想的止血材料。