潰瘍性結腸炎患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p 表達水平的變化及意義

潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)均屬于炎癥性腸病，具有相似的臨床表現及特征[1]。近年來關于UC和CD的分子病理學研究表明，UC和CD在基因表達、免疫學特征方面存在差異[2-4]。UC和CD的臨床表現及特征較為相似，因此臨床鑒別兩者具有一定難度。微RNA(miRNA)是動植物體內長度為20～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA，可廣泛參與機體內的病理生理過程[5]。目前大量miRNA已成為疾病發生、發展的潛在生物標志物[6]。有研究顯示，miR-106a和miR-363-3p在UC和CD患者血漿中表達存在差異，有可能成為鑒別UC和CD的潛在生物標志物[7]。本研究選取78例UC患者、53例CD患者及46例健康體檢者作為研究對象，評估miR-106a和miR-363-3p鑒別CD和UC的效能，并分析miR-106a和miR-363-3p表達水平與UC患者病情及預后的關系，以期為UC的臨床診斷及治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年3月至2018年7月在重慶市開州區人民醫院消化內科救治的78例UC患者(UC組)、53例CD患者(CD組)及同期46例健康體檢者(NC組)作為研究對象。根據中華醫學會消化病學分會炎癥性腸病學組制定的《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[8]對UC和CD進行診斷和治療。UC組男性43例，女性35例，平均年齡(46.08±11.32)歲；CD組男性25例，女性28例，平均年齡(44.85±9.91)歲；NC組男性26例，女性20例，平均年齡(45.72±10.24)歲。排除標準：(1)合并糖尿??；(2)合并嚴重感染；(3)伴有嚴重心、肝、腎等臟器疾病；(4)伴有自身免疫性疾??；(5)妊娠期或哺乳期婦女。本研究所有受試者及家屬均對研究內容及目的了解，簽署了知情同意書，且本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 RT-PCR法檢測miR-106a和miR-363-3p相對表達量

抽取受試者空腹肘部靜脈血，3 500 r/min離心15 min，提取上層清液。采用總RNA提取試劑盒提取總RNA，試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司。采用定量聚合鏈反應合成cDNA。將合成的cDNA進行PCR擴增，反應條件為95 ℃預變性10 min，然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s，40個循環。采用2-△△Ct表示miR-106a 和 miR-363-3p的相對表達量[9]。

1.3 預后評估

根據《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[8]對UC患者進行標準化治療。治療2個月后，內鏡復查黏膜愈合情況，并根據黏膜愈合情況將接受治療的活動期UC患者分為預后良好組和預后不良組[10]。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 3組受試者的基線資料比較

3組受試者在性別、年齡方面的差異無統計學意義(P>0.05)。CD組和UC組患者在炎性狀態方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 3組受試者基線資料比較

注：“—”表示無數據

2.2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p的相對表達量比較

3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較，差異均有統計學意義(P均<0.001)。UC組患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量低于CD組，但高于NC組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。詳見表2。

表2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較()

注：與NC組比較，aP<0.05；與CD組比較，bP<0.05

2.3 血漿miR-106a 和 miR-363-3p鑒別CD和UC的效能

單指標鑒別CD和UC時，miR-106a的ROC曲線下面積(AUC)大于miR-363-3p，但差異無統計學意義(Z=1.402，P=0.161)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯合檢測鑒別CD和UC的Logistic回歸方程：F=12.880-6.157×miR-106a-3.987×miR-363-3p。聯合檢測鑒別CD和UC的AUC為0.943，大于miR-106a、miR-363-3p單獨檢測的AUC(Z=2.587，P=0.010；Z=2.926，P=0.003)。詳見圖1、表3。

圖1 miR-106a、miR-363-3p及聯合檢測鑒別CD 和UC的ROC曲線

表3 miR-106a、miR-363-3p及聯合檢測鑒別CD和UC的效能

注：“—”表示無數據

2.4 不同炎性狀態的UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較

活動期UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量均高于緩解期UC患者，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表4。

2.5 影響活動期UC患者預后的相關因素分析

單因素分析影響活動期UC患者預后的相關因素，結果顯示年齡、性別、內鏡下活動度分級、病理組織分級和病變位置與活動期UC患者預后無關(P>0.05)；miR-106a 和 miR-363-3p與活動期UC患者預后相關(P<0.05)。詳見表5。將活動期UC患者預后作為因變量，將miR-106a和miR-363-3p作為自變量，納入Logistic回歸分析，結果顯示miR-106a>1.14(OR：2.043，95%CI：1.245～2.674)和miR-363-3p>1.05(OR：1.287，95%CI：1.098～1.775)的活動期UC患者預后不良。

表4 活動期與緩解期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對表達量比較()

注：與活動期比較，aP<0.05

表5 影響活動期UC患者預后的單因素分析

2.6 血漿miR-106a 和 miR-363-3p在活動期UC患者預后評估中的價值

單指標診斷活動期UC患者預后時，miR-106a診斷活動期UC患者預后的AUC小于miR-363-3p，差異無統計學意義(Z=0.823，P=0.411)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯合檢測診斷活動期UC患者預后的Logistic回歸方程：F=-7.565+3.017×miR-106a+5.259×miR-363-3p。聯合檢測診斷活動期UC患者預后的AUC為0.860，與miR-106a、miR-363-3p單獨診斷活動期UC患者預后的AUC比較，差異均無統計學意義(Z=0.759，P=0.448；Z=0.875，P=0.382)。詳見圖2、表6。

圖2 miR-106a、miR-363-3p及聯合檢測診斷 UC患者預后的ROC曲線

表6 miR-106a、miR-363-3p及聯合檢測診斷UC患者預后的效能

注：“—”表示無數據

3 討論

UC是一種慢性非特異性腸道炎性疾病，病情較為兇險，且并發癥較多，嚴重時可危及患者生命[11-12]。近年來，中國UC患者逐年增加[13]。及時對UC患者進行診斷并加以治療，可有效控制UC病情發展，降低并發癥的發生率及患者病死率[14]。有研究表明，大量miRNA在炎癥性腸病的發生、發展中發揮作用，參與組織穩態、腸細胞增殖、分化及維持腸道屏障功能等[15-17]。目前中國較少有關于miR-106a、miR-363-3p與UC關系的研究報道。國外雖有研究報道了miR-106a、miR-363-3p在UC患者中特異性表達，但并未驗證兩者診斷UC的效能，且未深入研究miR-106a、miR-363-3p與UC患者病情及預后的關系。本研究擬探究miR-106a、miR-363-3p與UC患者臨床病理、病情進展及預后的關系，為UC患者病情嚴重程度及治療效果評估提供更多參考。

本研究結果顯示，UC組患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對表達量低于CD組，但高于NC組，與Omidbakhsh等[7]的研究結果一致。提示miR-106a和miR-363-3p在UC患者血漿中特異性表達，有可能成為鑒別UC的潛在生物標志物。本研究進一步發現，miR-106a、miR-363-3p及兩者聯合檢測的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p在鑒別CD和UC方面具有較高價值，可作為鑒別CD和UC的生物標志物。

本研究比較了不同炎性狀態的UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對表達量，發現活動期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對表達量顯著高于緩解期患者，表明miR-106a和miR-363-3p表達水平與UC患者的炎性狀態相關，可反映UC患者的病情。本研究結果顯示，miR-106a和miR-363-3p與活動期UC患者的預后密切相關。miR-106a>1.14、miR-363-3p>1.05提示活動期UC患者預后不良，相關機制還需進行基礎研究進一步闡明。本研究采用ROC評價miR-106a和miR-363-3p診斷活動期UC患者預后的效能，發現miR-106a、miR-363-3p及兩者聯合檢測的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p對于活動期UC患者預后評估具有較高價值，可作為評估活動期UC患者預后的重要參考指標。

綜上所述，miR-106a和miR-363-3p不僅在鑒別CD和UC方面具有較高價值，而且還可反映UC患者的病情及預后情況。由于條件有限，本研究未能納入更多樣本，因此結果可能存在一定偶然性和隨機性，今后還需進行大樣本、多中心研究進一步驗證。