新疆羅布紅麻花、種子及葉中金絲桃苷含量比較

張孟麗 張衛明 束成杰

摘要：為了比較羅布紅麻（Apocynum venetum L.）花、種子、葉中的金絲桃苷含量差異，采用回流提取法提取羅布紅麻花、種子及葉中的金絲桃苷，利用高效液相層析法（HPLC）測定3器官中金絲桃苷的含量。結果表明，金絲桃苷濃度在0.01～0.10 mg/mL與峰面積呈良好的線性關系，相關系數為0.998 1;花、種子、葉中金絲桃苷的得率分別為0.085%、0.012%、0.052%。

關鍵詞：羅布紅麻（Apocynum venetum L.）;金絲桃苷;高效液相層析法;含量;比較

中圖分類號：R282.71? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）17-0066-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.017? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： To compare the hyperoside in flowers， seeds and leaves of Apocynum venetum， the hyperoside extracted by reflux extractions， and content was determined by HPLC assay. The results showed that within the range of 0.01to 0.10 mg/mL， hyperoside showed a good linear correlation with peak area， and the coefficient was 0.998 1. The hyperoside yield in the flowers， leaves and seeds were 0.085%， 0.012%， 0.052%.

Key words： Apocynum venetum L.; hyperoside; HPLC; content; comparion

羅布紅麻（Apocynum venetum L.）為羅布麻屬夾竹桃科多年生宿根草本植物，含乳汁[1]，具有很強的抗逆性[2]。羅布麻在3月下旬至4月中旬萌芽，5月下旬至6月中旬進入花初期，8月下旬至9月中旬進入花末期，花期通常持續90 d左右，之后種子進入成熟期，年生長大約180 d[3]。

研究表明，綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮素、紫云英苷、槲皮素、山萘酚是羅布麻中主要的化學成分[4，5]。其中，金絲桃苷具有抗急性肝損傷、抗抑郁、抗炎癥、抗血栓、抗癌、抗菌、抗氧化應激和抗細胞凋亡等藥理作用[6-9]。但對羅布紅麻的研究開發大多集中于葉片。本試驗利用液相色譜法測定新疆羅布紅麻花、種子、葉片金絲桃苷的含量，旨在為羅布紅麻的綜合開發利用提供科學依據。

1? 材料與方法

1.1? 材料與儀器

材料：羅布紅麻（產地新疆阿勒泰），南京野生植物綜合利用研究院提供。

儀器：NH-4數顯恒溫水浴鍋，金壇市三壇儀器廠;SHZ-DⅢ循環水式真空泵，鞏義市予華儀器責任有限公司;RE-52AA旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠;KF-1209電子天平，凱豐集團有限公司;液相色譜儀1200 系列，美國Agilent公司;微孔濾膜，上海嘉鵬科技有限公司。

試劑：金絲桃苷標準品，上海源葉生物科技有限公司;甲醇、乙腈（色譜純），美國Fisher Scientific公司;磷酸（優級純）、乙腈（優級純）、乙醇（分析純）、甲醇（分析純），均購自南京化學試劑有限公司。

1.2? 方法

1.2.1? 金絲桃苷提取? 用乙醇作為提取劑，采用回流提取法提取金絲桃苷。將羅布紅麻花、種子、葉除雜干燥，粉碎，各稱取粉末50 g，分別加入8倍體積的80%乙醇在80 ℃下回流提取3次，1 h/次，合并提取液，離心后過濾，放至室溫，減壓回收溶劑，收集濾液，微膜過濾，得3份樣品液[10，11]。

1.2.2? 色譜條件? 流動相為乙腈-0.25%磷酸，流速1.0 mL/min，檢測波長為360 nm[12-14]。

1.2.3? 標準曲線? 準確稱取金絲桃苷標準品10.0 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得金絲桃苷標準品溶液，稀釋成濃度為0.01，0.02，0.03，0.04，0.05，0.06，0.07，0.08，0.09、0.10 mg/mL的溶液，分別精密吸取20 μL進樣，得線性關系良好的回歸方程。

1.2.4? 樣品測定? 3份樣品溶液，分別吸取20 μL進樣，通過標準曲線計算花、種子及葉中金絲桃苷含量，3次重復。

1.3? 數據處理

所有數據均為平均值±標準差。數據分析使用SPSS 12.0軟件。

2? 結果與分析

2.1? 標準曲線繪制

從圖1可以看出，金絲桃苷標準品在12～14 min出現單一的顯著峰。將上述金絲桃苷標準品的梯度濃度分別進樣，得峰面積，繪制標準曲線，結果如圖2所示。計算得知，金絲桃苷的峰面積（y）與質量濃度（x）呈線性關系，回歸方程為y=29.051x-86.807，R2=0.998 1，說明金絲桃苷進樣濃度在0.01～0.10 mg/mL與峰面積線性關系良好。將新疆羅布紅麻花、種子、葉樣品分別進行高效液相色譜分析，得各樣品的峰面積，色譜結果如圖3所示，與金絲桃苷標準品對比，確認花、種子、葉中的金絲桃苷的出峰時間及峰面積。

2.2? 儀器的精密度

為評價儀器的精密度，需測定花、種子、葉樣品液中金絲桃苷的峰面積，計算金絲桃苷含量的相對標準偏差（RSD）。分別取花、種子、葉樣品液，精密吸取20 μL，按“1.2.2”色譜條件分別連續進樣6次，測定花、種子、葉樣品液中金絲桃苷的峰面積，計算金絲桃苷含量的RSD。結果顯示，花、種子、葉中金絲桃苷含量的RSD分別為2.9%、2.5%、1.9%（n=6），表明儀器精密度良好[15-17]。

2.3? 供試溶液的穩定性

為評價供試品溶液的穩定性，按“1.2.2”色譜條件，分別取花、種子、葉樣品液20 μL，在0、2、4、6、8、10 h進樣，測定各樣品溶液中金絲桃苷的峰面積，計算金絲桃苷含量的RSD。結果顯示，花、種子、葉中金絲桃苷含量的RSD分別為1.6%、1.1%、1.4%（n=6），表明花、種子、葉樣品液在配制24 h內穩定[18]。

2.4? 方法重復性

取花、種子、葉樣品液各3份進行HPLC測定，記錄峰面積，計算金絲桃苷含量的RSD，以評價方法的重復性。結果顯示，花、種子、葉中金絲桃苷含量的RSD分別為1.86%、0.20%、0.61%（n=3），表明該方法的重復性滿足要求[19，20]。

2.5? 回收率

分別取羅布紅麻花、種子、葉樣品液各1 mL，加入對照品，制備供試品溶液，并在相同色譜條件下進樣20 μL，測定峰面積，計算平均加樣回收率及RSD，結果如表1所示。由表1可知，花、種子、葉中金絲桃苷平均加樣回收率分別為102.00%、98.40%、94.00%（n=6），RSD分別為3.28%、1.60%、1.10%（n=6），表明羅布紅麻花、種子、葉樣品液中金絲桃苷含量穩定[21]。

2.6? 新疆羅布紅麻花、種子、葉各部位金絲桃苷含量比較

根據金絲桃苷標準曲線，由峰面積計算得出羅布紅麻花、種子、葉濃度，再結合提取液體積，計算得出各自含量，結果如表2所示。由表2可知，花、種子、葉中金絲桃苷的平均得率分別為0.085%、0.012%、0.052%，3個部位中金絲桃苷的含量分布為花>葉>種子。

3? 討論

目前，羅布紅麻產品多集中于對葉的開發利用，本試驗對羅布紅麻花、種子、葉3個器官的金絲桃苷含量進行比較分析，采用回流提取法提取羅布紅麻花、種子及葉中的金絲桃苷，利用高效液相層析法測定3器官中金絲桃苷的含量。結果顯示，新疆羅布紅麻花、種子、葉中金絲桃苷的得率分別為0.085%、0.012%、0.052%，其中葉中金絲桃苷與蘆丁含量與石秋梅等[20]研究發現的新疆產羅布紅麻中蘆丁和金絲桃苷含量結果基本一致。新疆羅布紅麻不同器官中金絲桃苷的含量為花>葉>種子，該結果可為羅布紅麻的開發及綜合利用提供科學依據。

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