商洛桔梗莖葉中桔梗皂苷D動態(tài)研究

趙志新 王通 潘苗

摘要：采用高效液相色譜法（HPLC）分析商洛種植的兩年生桔梗（Platycodon grandiflorum）莖和葉在不同月份（5—10月）中桔梗皂苷D的含量變化，以探究主要次生代謝產(chǎn)物在桔梗莖葉中積累量的變化。結(jié)果表明，5—10月桔梗皂苷D的含量在莖中比較穩(wěn)定，9月份達到最大值;而葉中桔梗皂苷D含量在7—8月份含量較高，10月份含量急劇下降;葉中桔梗皂苷D平均含量（0.614%）大于莖中（0.257%），表明商洛地區(qū)所種植桔梗幼嫩莖葉也可入藥，其采收期應在8月份。通過對不同月份及莖葉中桔梗皂苷D含量的研究，可為確定商洛桔梗入藥部位及采收期提供參考，同時也可為桔梗質(zhì)量控制及規(guī)范化種植提供借鑒。

關(guān)鍵詞：桔梗（Platycodon grandiflorum）;HPLC;桔梗皂苷D;不同月份;莖葉

中圖分類號：S567.23+9? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）17-0116-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.031? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： High performance liquid chromatography （HPLC） was utilized to analyze the variations of Platycodin D content in stems and leaves in Platycodon grandiflorum （Jacq.） A. DC.， which were collected from May to October from Shangluo area， and the study was aimed to explore the variations of main secondary metabolites in stems and leaves. The results showed that the contents of Platycodin D were stably in the stems from May to October， and the peak was reached in September; the contents of Platycodin D were highly in July and August， yet the content decreased dramatically in October. Furthormore， the average content of Platycodin D in leaves （0.614%） was higher than in stems （0.257%）. Therefore， the young stems and leaves also could be used as medicines， and their harvest time should be August in Shangluo. By investigating the variations of Platycodin D content in stems and leaves in different months， the study can provide references for medicinal parts and harvest time and standardization production in P. grandiflorum in Shangluo.

Key words： Platycodon grandiflorum; HPLC; platycodin D; different months; stems and leaves

桔梗（Platycodon grandiflorum）為桔梗科桔梗屬多年生雙子葉植物，為2015年版《中國藥典》收載品種，主要以其根部入藥，亦可食用[1]。桔梗為常用的且市場需求量大的中藥材，中國大部分地區(qū)均有分布，常見于河南、安徽、吉林、山東、四川、陜西等地，在商洛廣泛種植，被譽為“五大商藥”之一[2]。桔梗具有開宣肺氣、祛痰排膿之功效，其主要成分為三萜皂苷類化合物，目前發(fā)現(xiàn)有70余種皂苷類成分，已經(jīng)分離得到18種三萜皂苷，以及桔梗皂酸A甲酯，遠志皂苷D、D2等，桔梗具有顯著的鎮(zhèn)咳祛痰、抗腫瘤、抗氧化及免疫增強作用，此外還有抗炎、防治心腦血管疾病等作用[3，4]。

商洛種植的桔梗種源大多為當?shù)仄贩N，桔梗的生長受生境條件（氣候、土壤條件等）影響較大[5，6]，桔梗除了主要以根部入藥以外，莖葉藥理研究也有所開展[7]，對于商洛種植桔梗，特別是莖葉中桔梗皂苷積累缺乏相關(guān)的研究。因此本試驗采集5—10月商洛學院藥園基地種植的桔梗，通過高效液相色譜法（HPLC）測定桔梗莖和葉中桔梗皂苷D的含量，以期對不同生長月份及不同部位桔梗藥材品質(zhì)進行評價，為確定商洛桔梗藥材利用及采收期提供借鑒，同時也為桔梗質(zhì)量控制及規(guī)范化種植提供借鑒。

1? 材料與方法

1.1? 材料

桔梗種植于商洛學院GAP中心藥材基地，2018年5—10月每月采集兩年生的桔梗樣品，將收集的桔梗材料按采集時間及部位進行分組（表1）。

1.2? 儀器與試劑

島津LC-20A型液相色譜儀，二元泵、UV檢測器、自動進樣器;KQ-250型超聲波清洗器;FA1104型電子天平;粉碎機。

桔梗皂苷D對照品購自中國食品藥品檢定研究院;乙腈為德國Merck公司的色譜級產(chǎn)品;磷酸、甲醇購于天津福晨化學試劑有限公司，均為分析純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

1.3? 方法

1.3.1? 色譜條件? 檢測波長210 nm;色譜柱為大連依利特Hypersil C18ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）;柱溫30 ℃;流速1.0 mL/min;流動相A為0.05%磷酸水溶液;B為純色譜乙腈。梯度洗脫程序：0～20 min， 96%～85% A;20～35 min，85%～77% A;35～40 min，77%～72% A;40～55 min，72% A;55～65 min，72%～60% A;65～80 min，60%～10% A;80 min以后，10% A，記錄時間90 min。

1.3.2? 對照品溶液的制備? 精密稱取桔梗皂苷D對照品，以甲醇為溶劑制成1 mg/mL的標準品溶液，以微孔濾膜（0.45 μm）過濾，備用。

1.3.3? 供試品溶液的制備? 取桔梗藥材樣品粉末2.0 g，過60目篩，然后加入50 mL體積分數(shù)為50%的甲醇，溶解，稱定其重量，超聲提取30 min;提取結(jié)束后放至室溫，稱重，再以甲醇補足損失的重量，搖勻，過濾，取濾液，用微孔濾膜（直徑0.45 μm）過濾，備用。

分別精密吸取對照品及供試品溶液20 μL，記錄90 min的色譜圖。對照品溶液顯示在54 min出現(xiàn)桔梗皂苷D峰（圖1）。圖2為供試品103B溶液色譜圖，顯示在54 min出現(xiàn)桔梗皂苷D峰。

1.3.4? 標準曲線? 取對照品溶液分別稀釋至10、100、200、500、800和1 000 μg/mL，取20 μL進行測定，按上述條件測定峰面積。以進樣量X（μg）對峰面積Y進行回歸，得回歸方程為Y=45 697X-29 257，R2=0.983 7，表明進樣量在10～800 μg/mL有良好的線性關(guān)系。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同月份桔梗莖中桔梗皂苷D含量

圖3為5—10月桔梗莖中桔梗皂苷D的含量。由圖3可以看出，5—10月莖中桔梗皂苷D的含量整體比較穩(wěn)定，在0.223%～0.298%變動，平均含量為0.257%，9月達到最大值，0.298%。

2.2? 不同月份桔梗葉中桔梗皂苷D含量

圖4為5—10月桔梗葉中桔梗皂苷D的含量，由圖4可以看出，7—8月份含量較高，分別為0.915%、0.857%，兩側(cè)的月份含量遞減，特別是10月達到極小值0.109%，此時桔梗葉片已逐漸枯萎，表明桔梗皂苷D含量隨著葉片枯萎而快速降低。桔梗葉中桔梗皂苷D含量整體較高，5—9月份均值為0.715%。

3? 小結(jié)

試驗使用HPLC法測定商洛地區(qū)種植的不同月份（5—10月）的兩年生桔梗莖和葉中桔梗皂苷D的含量。結(jié)果顯示，桔梗皂苷D的含量在莖中比較穩(wěn)定，9月份達到最大值;而葉中桔梗皂苷D含量在7—8月份含量極高，10月份隨著葉片枯萎含量急劇下降。同時可以看出葉中桔梗皂苷D平均含量（0.614%）大于莖中（0.257%）。申茹等[8]測定山東不同區(qū)域桔梗根中桔梗皂苷D的含量范圍為0.38%～0.16%，與商洛桔梗莖中結(jié)果基本一致，卻低于商洛桔梗葉中的含量，顯示桔梗藥材品質(zhì)受所種植區(qū)域環(huán)境影響很大，要加大桔梗的道地性研究，同時也與入藥部位有很大的關(guān)系。

據(jù)此，建議商洛地區(qū)所種植桔梗幼嫩莖葉也可入藥，其采收期應在8月，此時莖葉有效成分含量都很高。通過對不同生長期及莖、葉中桔梗皂苷D含量的研究，為確定商洛桔梗入藥部位及采收期提供參考，同時也為桔梗質(zhì)量控制及規(guī)范化種植提供借鑒。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2] 張曉虎.秦嶺“五大商藥”施肥技術(shù)研究綜述[J].陜西農(nóng)業(yè)科學，2010，56（4）：94-97.

[3] 劉? 群，李? 偉，鄭毅男，等.桔梗中三萜皂苷類成分及藥理活性研究進展[J].吉林農(nóng)業(yè)大學學報，2013，35（2）：221-228.

[4] 左? 軍，尹柏坤，胡曉陽.桔梗化學成分及現(xiàn)代藥理研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2019，21（1）：113-116.

[5] 王新軍，陳明彬，鄧寒霜.基于生境條件的商洛桔梗道地性解析[J].商洛學院學報，2014，28（4）：8-11，53.

[6] 王新軍，陳明彬，吳? 珍.商洛桔梗基于GIS的適宜氣候區(qū)劃及分區(qū)評價[J].陜西農(nóng)業(yè)科學，2014，60（8）：55-58.

[7] 田雨弘，高? 鴿，劉? 穎，等.桔梗莖葉皂苷對H22荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及機制研究[J].毒理學雜志，2016，30（1）：46-48.

[8] 申? 茹，徐英輝，莫穎華，等.山東省不同區(qū)域桔梗藥材中桔梗皂苷D的測定[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐，2018，32（4）：11-13.