QuEchERS-超高效液相色譜-串聯質譜法測定飼料中甲磺草胺

范艷，程媛媛，韓超，王莉，王菲迪，吳聲敢

(浙江省植物有害生物防控重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地 農業農村部農藥殘留檢測重點實驗室浙江省農業科學院農產品質量標準研究所，浙江 杭州 310021)

甲磺草胺(Sulfentrazone)，又名甲基磺酰甲胺，是一種三唑啉酮類除草劑，原卟啉原氧化酶抑制劑。通過抑制葉綠素生物合成過程中原卟啉原氧化酶而破壞細胞膜，使葉片迅速干枯、死亡。適用于大豆、玉米、花生、向日葵等作物田內一年生闊葉雜草、禾本科雜草和莎草，如牽牛、反枝莧、鐵莧菜、曼陀羅、狗尾草、蒼耳、牛筋草、香附子等。甲磺草胺是一種使用范圍較廣，低毒且難降解的除草劑，對目前較難除的牽牛花、香附子、蒼耳有較好的效果[1-2]，是玉米、大豆和花生等作物的新型高效低毒播后苗前除草劑。這也使得甲磺草胺在農作物中有一定量的農藥殘留。

飼料是用于農業或牧業飼養的動物食物，包括大豆、豆粕、玉米、魚粉、氨基酸、雜粕、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、飼料添加劑等十余個品種的飼料原料，對飼料中甲磺草胺殘留量的研究至關重要。美國和日本已經制定了甲磺草胺在部分商品(包括水果、蔬菜、飼料等)中的殘留限量(0.05～1.5 mg·kg-1不等)[3]，我國目前還沒有對甲磺草胺做限量規定，也沒有相關的檢測標準。目前，對甲磺草胺的檢測方法包括氣質聯用[4-6]，液相色譜法[7-10]和液質聯用[11]。甲磺草胺的不合理使用，不僅會對動物產生影響，還會對人體健康產生重大威脅。因此，有必要建立一種簡便、快速的方法檢測飼料中的殘留。本文采用了有機溶劑提取、QuEchERS凈化，結合超高效液相色譜-串聯質譜法，建立了飼料中甲磺草胺的農藥殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料

試劑：色譜純甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)，色譜純乙腈(Merck公司)，飲用純凈水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)，分析純氯化鈉(蘭溪市屹達化工試劑有限公司)。

儀器和設備：ABSciex液相色譜串聯三重四級桿質譜聯用儀(Exion LCAD-Triple QuadTM5500，美國ABSciex公司)，ACQUITY UPLCTMBEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美國Waters公司)，BSA224S 電子天平(感量0.000 1 g，德國賽多利斯集團)，OHAUS SPS202F型電子天平(感量0.01 g，奧克斯儀器常州有限公司)，TYZD-IIA振蕩器(姜堰市天儀電子儀器有限公司)，Eppendorf Centrifuge 5430R高速冷凍離心機(德國艾本德股份公司)，MX-S可調式混勻儀(北京大龍興創實驗儀器有限公司)，Cleanert MAS-QuEchERS凈化管，移液槍，不銹鋼單頭長柄藥勺(長約20 cm)，50 mL PPTE離心管，刻度管，容量瓶等。

1.2 標準溶液的配制

電子天平稱取甲磺草胺標準品0.016 4 g(純度為98.5%)，用色譜純乙腈定容至10.00 mL，得到濃度為1.62×103mg·L-1的標準儲備液。用乙腈稀釋甲磺草胺標準儲備液，得到濃度為10.0 mg·L-1的標準工作液。用乙腈逐級稀釋10.0 mg·L-1的標準工作液，得到濃度為0.500、0.100、0.050、0.010、0.005、0.002 mg·L-1的標準工作液。

1.3 質譜條件

毛細管電壓-4.5 kV，氣簾氣35 psi，噴撞氣7 psi，噴霧氣50 psi，輔助加熱氣50 psi，離子源溫度550 ℃，射入電壓-10 V，碰撞室射出電壓-16 V。定性、定量模式均為MRM多反應監測模式，電離方式為ESI-。甲磺草胺的其余質譜檢測參數見表1。

表1 甲磺草胺質譜檢測參數

1.4 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美國Waters公司)；色譜柱溫度：40 ℃；進樣量：5.00 μL；流速：0.25 mL·min-1；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：色譜純乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5 min，60% A，0.5～4.0 min，60%A～10%A，4.0～4.5 min，10% A，4.5～4.6 min，10%～60%A，4.6～6.5 min，60% A。

1.5 試驗基質

鵪鶉飼料701主要成分為大豆粉、玉米粉、魚粉等。

1.6 樣品前處理

稱取飼料2.00 g (添加標樣靜置30 min后進行前處理)，置于50 mL PPTE離心管中，加入飲用純凈水5 mL，渦旋30 s后，加入20 mL乙腈，振蕩30 min，加入3 g氯化鈉，渦旋30 s，1 574g離心10 min，取上清液置于Cleanert MAS-QuEChERS凈化管中，渦旋30 s，靜置5 min后取上清液過0.22 μm濾膜或用乙腈稀釋后過0.22 μm濾膜，待檢測。

2 結果與分析

2.1 提取溶劑的優化

選擇了4種有機溶劑作為提取溶劑，分別為乙腈、乙酸乙酯、甲醇、正己烷。添加濃度為10 mg·L-1，3個重復。試驗結果表明，乙腈提取的回收率為95.0%，乙酸乙酯提取的回收率為87.0%，甲醇提取的回收率為80.4%，正己烷提取的回收率為0。根據試驗結果，選擇乙腈作為最終提取溶劑。

2.2 凈化條件的選擇

比較了3種Cleanert MAS-QuEChERS凈化管，分別為PSA 50 mg+MgSO415 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 10 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 50 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg。添加濃度為10 mg·L-1，5個重復。3種凈化管的回收率分別為96.0%、95.5%、95.1%，表明這3種凈化管都可以滿足回收率的要求。因為用有機溶劑提取后的溶液含色素，所以，本試驗選用含50 mg PC的Cleanert MAS-QuEChERS凈化管。

2.3 線性關系、回收率和精密度

將濃度為0.002、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500 mg·L-1的甲磺草胺標準工作液進樣分析，以濃度-峰面積繪制標準曲線。結果如圖1所示，得到回歸方程為y=4 226 608x+10 267(R2=0.999 8)。

圖1 甲磺草胺標準曲線

在飼料中添加3檔濃度(0.10、10.00、162.00 mg·kg-1)的甲磺草胺標準溶液，每檔濃度設5個平行樣品。回收率和相對標準偏差見表2，儀器對甲磺草胺的最小檢出量(LOD)為4.00×10-3ng，甲磺草胺在飼料中的最低檢測濃度(LOQ)為0.1 mg·kg-1。

表2 不同添加水平下飼料中甲磺草胺的回收率和相對標準偏差

3 小結

本文采用QuEchERS結合高效液相色譜-串聯質譜法建立了飼料中甲磺草胺的檢測方法。飼料用乙腈提取，用Cleanert MAS-QuEChERS凈化，采用0.1%甲酸和乙腈作為流動相梯度洗脫，然后進高效液相色譜-串聯質譜檢測。在0.10、10.00和162.00 mg·kg-1添加水平下，甲磺草胺的回收率為91.5%～103.0%，相對標準偏差(n=5)為1.39%～5.41%，儀器對甲磺草胺的最小檢出量為4.00×10-3ng，甲磺草胺在飼料中的最低檢測濃度為0.1 mg·kg-1。本研究為飼料中甲磺草胺的檢測提供了一個簡便、快速、準確的方法。