淋巴細胞功能測定對常見肺部疾病的臨床意義

陳向紅 白敏 張造章 王祥豐

海南醫學院第二附屬醫院全科醫學科（?？?70311）

目前越來越多的研究表明，淋巴細胞功能在各種臨床疾病如自身免疫性疾病、變態反應性疾病、病毒感染等都有異常改變，在各種疾病的發生、發展過程中淋巴細胞功能的異常產生著極其重要的影響，血液中淋巴細胞功能的檢測是觀察機體細胞免疫水平的重要方法。臨床上常見的肺部疾病多存在有免疫功能的異常，而社區獲得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）、慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary diseases，COPD）及肺結核（tuberculosis，TB）等是臨床上最常見的三種呼吸系統疾病，目前仍存在較多病例治療效果欠佳、鑒別診斷困難等情況，因此筆者對211 例確診為CAP、COPD、TB 患者及78 例健康對照者進行了T 淋巴細胞亞群、B 淋巴細胞及NK 細胞活性等功能的檢測及對比分析，以了解其免疫功能的變化及特點，試圖通過對其免疫系統功能進行檢測及對比研究探討其臨床意義，為其臨床診斷、預防、治療及鑒別診斷提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2016年1月至2018年12月期間海南醫學院第二附屬醫院根據臨床癥狀、體征、實驗室和其他檢查確診為CAP 的患者72 例，其中男40 例、女32 例，均符合中華醫學會呼吸病學分會制定的《中國成人社區獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）》標準［1］。排除有先天性疾病、免疫功能異常、哮喘、支氣管擴張、COPD、惡性腫瘤、妊娠期女性或哺乳期婦女；COPD 患者68例，其中男37 例、女31 例，均符合《內科學》第8 版慢性阻塞性肺疾病診斷標準［2］，同時排除了合并患有心、肝、腎等嚴重疾病和肺結核；TB 患者71例，其中男38 例、女33 例，均診斷符合《內科學》第8 版肺結核診斷的標準［3］，排除艾滋病、糖尿病、肺外結核、腫瘤、既往明確寄生蟲感染以及合并其他肺部疾病者；211 例患者年齡29～73 歲、平均48.33歲；健康對照組共78 例，其中男45 例、女33 例，年齡21～65歲、平均45歲，均來自海南醫學院第二附屬醫院體檢中心的健康體檢者，均無心肺病史。各組間年齡、性別差異均無統計學意義（表1）。

表1 肺部疾病組與對照組基本情況Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

表1 肺部疾病組與對照組基本情況Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

組別CAP 組COPD 組TB 組對照組例數72 68 71 78性別（例）女32 31 33 31男40 37 38 37年齡（歲）37±13.2 39±14.5 38±12.3 35±11.3

1.2 方法

1.2.1 檢測方法受試對象均于次日空腹采集EDTA 抗凝外周全血2 mL 于普通離心管中充分混勻，室溫（20 ～25℃）存放待用，8 h 內作染色裂解處理，根據T、B、NK 細胞表面標志，適當的熒光素標記特異性單克隆抗體與淋巴細胞反應，通過美國BD 公司FACSCalibur 流式細胞儀嚴格按照試劑盒及儀器操作說明對樣本進行測定，即可了解相應細胞的陽性百分比和熒光強度。

1.2.2 儀器與試劑儀器FACSCalibur 流式細胞儀為美國BD 公司生產，試劑包括MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4、MultiTEST CD3/CD16/CD56/CD45/CD19、FACS Lysing Solution（紅細胞裂解液）等均由美國BD 公司生產。

1.2.3 操作步驟取兩支上樣管，分別標定樣本編號及管1、2，在管1 中加入20 μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗 體，管2 中 加 入20 μL CD3/CD16/CD56/CD45/CD19 抗體，充分混勻血液樣本，在每管中分別加入50 μL 全血樣本，充分混勻，避光室溫放置15 min，每管中加入450 μL 稀釋過的紅細胞裂解液（紅細胞裂解液用去離子水10 倍稀釋），充分混勻，避光室溫放置15 min，使用FACSCalibur 流式細胞儀測定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD8+/T、CD19+/CD3-細胞數目及NK 細胞。

1.3 統計學方法采用SPSS 25.0 統計軟件，計量資料用表示。按照分組進行方差齊性分析，方差齊性行獨立樣本t檢驗，方差不齊行Mann-Whitney秩和檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

3 組患者各項免疫細胞功能指標變化：社區獲得性肺炎患者T 淋巴細胞亞群中CD3+與健康對照組相比降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；雙陽性T 淋巴細胞（CD4+CD8+/T）及NK 細胞與對照組相比均升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；但B 淋巴細胞（CD19+/CD3-）功能未見明顯異常。慢性阻塞性肺疾病組T 淋巴細胞亞群中CD3+與健康對照組相比降低，差異有統計學意義（P＜0.001）；雙陽性T 淋巴細胞（CD4+CD8+/T）及NK 細胞與對照組相比均升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；B 淋巴細胞（CD19+/CD3-）功能也未見明顯異常。肺結核病組T 淋巴細胞亞群中CD3+與健康對照組相比降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；雙陽性T 淋巴細胞（CD4+CD8+/T）與對照組相比無明顯差異；NK細胞與健康對照組相比顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.001）；B 淋巴細胞（CD19+/CD3-）功能與健康對照組相比明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.001）。見表2。

表2 3 組患者各項免疫細胞功能指標變化結果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

表2 3 組患者各項免疫細胞功能指標變化結果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

注：與對照組相比：*P ＜0.05，**P ＜0.01

組別對照組COPD 組CAP 組TB 組F 值P 值總T 淋巴細胞CD3+68.38±7.36 60.55±16.23**65.51±12.46*61.33±16.62*7.690＜0.001雙陽性T 淋巴細胞CD4+CD8+/T 0.63±0.69 1.95±6.05*1.01±1.31*0.80±0.96 3.559 0.014 NK 細胞16.14±6.33 23.02±15.78**18.93±10.27*29.57±15.39**16.751＜0.001 B 淋巴細胞CD19+/CD3-12.54±4.78 13.35±12.01 12.87±10.05 5.90±5.25**7.587＜0.001

3 討論

淋巴細胞在調節機體免疫機能中發揮著重要作用，分為主要參與細胞免疫的T 淋巴細胞（CD3+）和主要參與體液免疫的B 淋巴細胞（CD19+）和NK 細胞（CD16+/CD56+）等。T 淋巴細胞（CD3+）表達降低多提示細胞免疫功能低下，機體易反復發生感染。T 淋巴細胞又分為輔助性T 淋巴細胞（CD3+CD4+）和抑制性/細胞毒性T 淋巴細胞（CD3+CD8+），后兩者之間相互誘導和制約形成了T 細胞網絡，對于調節細胞免疫反應和維持免疫平衡具有重要作用［4］。CD19+為B 淋巴細胞亞群中最具標志性的分子，參與B 細胞的活化、增殖及信號轉導，調節人體的免疫應答［5］。CD4+CD8+雙陽性（double positive，DP）T 細胞是一種指同時表達CD4和CD8 抗原的未成熟的T 細胞，廣泛存在于多種動物和人的外周血及免疫器官，具有獨特的免疫活性，能受到有絲分裂原、病原體及毒性物質等的刺激而增殖［6-7］。唐甜等［8］研究發現，急性呼吸系統感染性疾病DP 細胞明顯增高，提示免疫系統異常參與了CAP 疾病的發生、發展過程，檢測DP 細胞對于急性呼吸系統感染性疾病的診斷具有重要意義；NK 細胞是機體重要的免疫細胞，自身具有抗腫瘤、抗感染及免疫調節等功能，還能有效的調節T 淋巴細胞活性［9-11］。T 淋巴細胞、B 淋巴細胞及NK 細胞的異常可以解釋許多疾病發病機理，對患者的免疫功能和預后做出判斷以及臨床指導治療。

有研究［12］表明，老年肺炎患者CD4+CD+25 T 細胞減少；調節性細胞因子升高，后者可能有助于肺炎組織修復，防止致病性炎癥的發生。反復發作的氣道炎癥和破壞性肺氣腫是COPD 的主要病理特征［13］。COPD 氣道炎癥主要由肺部浸潤的免疫細胞炎性介質過量分泌導致［14］，其中CD8+T 細胞是關鍵的致炎淋巴細胞亞群［15］。有研究表明，COPD 患者外周血CD8+T 細胞顯著增加，并且患者的肺功能下降與存在于肺內的CD8+數量和CD4+/CD8+比率的下降有關［16-21］。機體感染結核時，結核病變部位CD4+可發生凋亡，由此使結核分枝桿菌喪失了原有生存環境，清除炎癥部位的感染細胞，抑制結核分枝桿菌生長和復制，從而控制結核分枝桿菌感染［22］。有研究發現，呼吸系統患者受感染后其免疫功能出現紊亂現象可能與以下因素有關：（1）病原體誘導了CD8+的細胞增多而抑制了CD4+細胞的合成；（2）機體的感染引起了促腎上腺皮質激素合成與類固醇糖皮質激素分泌增加［23］，通過抑制了T 淋巴細胞增殖的活化和增加CD4+細胞的調亡等機制而使CD4+細胞的合成減少［24］。

呼吸道是一個開放的氣道，因此是病原體感染的主要靶器官，一方面機體免疫力低下容易導致呼吸道病原體感染，另一方面病原體感染又可降低呼吸道防御功能，同時機體對不同病原體的免疫反應亦不相同，因此研究常見呼吸道感染性疾病機體免疫功能狀況對其診斷、治療及預后均有重要意義，本研究通過觀察機體免疫系統對不同疾病的反應試圖尋找有利于疾病鑒別診斷的依據，為國內首次報道。本研究結果顯示：CAP、COPD 及TB 患者均存在CD3+功能明顯降低，與筆者以往的研究結論一致，說明呼吸道疾病患者T淋巴細胞（CD3+）表達降低多提示細胞免疫功能低下，機體易反復發生感染。同時三者NK 細胞功能明顯升高，說明NK 細胞發揮了其抗感染及免疫調節等功能；但雙陽性T 淋巴細胞（CD4+CD8+/T）功能升高僅存在CAP 及COPD 患者中，而B 淋巴細胞（CD19+/CD3-）功能明顯降低僅存在TB 患者，說明結核啟動了與前兩者不同的免疫途徑。由此可見，通過以上不同肺部疾病的淋巴細胞亞群檢測結果的區別，可對肺部感染、肺結核及慢性阻塞性肺疾病的診斷、治療及預后判斷，尤其是對重癥及診斷、治療困難患者提供新的認識。那么，通過觀察不同疾病不同的免疫反應，是否能夠成為鑒別診斷的標志物值得探索，進一步的觀察研究有可能為鑒別診斷提供新的思路。