高效液相色譜法同時測定維爾康膠囊中3種成分含量

趙 猛，李 玲

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 連云港 222000）

維爾康膠囊是由人參、靈芝、黃芪、甲基橙皮苷和維生素A，E，C，B1等制成的復方制劑，有健脾固體、益氣扶正功效，可用于治療年老體虛、健忘，亦可作脅痛、虛勞、久喘氣短諸癥的輔助治療[1]。現行質量標準中，維爾康膠囊的含量檢測僅以維生素E和維生素C為指標成分，不能全面地反映藥品的內在質量。為更好地控制其質量，筆者參考文獻[2-7]，采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定維爾康膠囊中維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷3種水溶性成分的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

e2695型高效液相色譜儀，包括2998型二極管陣列檢測器、Empower色譜工作站（美國Waters公司）；BP211D型電子分析天平（德國Sartorius公司）；KH-700DE型數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；調速多用振蕩器（常州國華電器有限公司）。

1.2 試藥

維爾康膠囊（廣州粵華制藥有限公司，批號分別為160301，161101，180101，規格為每粒 50 mg）；維生素 B1對照品（批號為100390-201505，含量97.5%），維生素C對照品（批號為 100425-201504，含量 99.9%），甲基橙皮苷對照品（批號為 111580-200503，含量 99.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1% 磷酸溶液（A）- 甲醇（B），梯度洗脫（0～6 min時 95%A，6～9 min時 95%A→60%A，9～30 min時 60%A）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：270 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：取維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷對照品各適量，精密稱定，置同一容量瓶中，加20%甲醇制成質量濃度分別為 200.3，2 000.1，400.3 μg ／mL的混合對照品貯備溶液；精密移取10 mL，置20 mL容量瓶中，加20%甲醇定容，搖勻，即得。

供試品溶液：取樣品20粒，取內容物，混勻，研細，取約0.32 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加20%甲醇 35 mL，置振蕩器上振搖 45 min（240 r／min），加 20%甲醇定容，搖勻，即得。

陰性對照品溶液：按處方和工藝制備缺維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密量取2.2項下3種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結果陰性對照在與3種對照品相同保留時間處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關系考察：分別精密量取2.2項下混合對照品貯備溶液 2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL，分別置20 mL容量瓶中，加20%甲醇定容，搖勻，制成混合對照品系列溶液，量取10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以待測成分進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷的回歸方程分別為Y1=1.105 0×104X1+9.445 1 ×103，Y2=6.741 7 ×103X2+8.659 3 ×103，Y3=7.251 9 × 103X3+7.136 3 ×103（r＞ 0.999 0）。結果表明，維生素B1、維生素 C和甲基橙皮苷進樣量在0.250 ～ 1.502 μg、2.500 ～ 15.001 μg、0.500 ～ 3.002 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：取2.2項下混合對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷峰面積的RSD分別為0.34%，0.67%，0.38%（n=6），表明儀器精密度良好。

表1 加樣回收試驗結果（n=6）

穩定性試驗：取 2.2項下供試品溶液（批號為1801017），分別于室溫下放置 0，1，2，3，4，5 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷峰面積的RSD分別為0.50%，1.69% ，0.22% （n=6），表明供試品溶液室溫放置 5 h內基本穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為180101）6份，精密稱定，按2.2項下方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果維生素B1、維生素C和甲基橙皮苷峰面積的RSD分別為 0.90%，1.03%，0.76%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為180101）6份，精密稱定，分別加入一定量的對照品溶液，按2.2項下方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品各適量，精密稱定，按2.2項下方法，制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，平行測定3次，記錄峰面積，并計算樣品含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（mg／粒，n=3）

3 討論

預試驗中對提取溶劑（水、10%甲醇、20%甲醇、50%甲醇）、提取方法（超聲、振搖）和提取時間（30，45，60 min）進行了考察，結果表明，20%甲醇與50%甲醇的提取效率較高且無明顯差異，但20%甲醇提取的雜質峰較少，故選擇20%甲醇作提取溶劑；超聲提取維生素C的效率比振搖提取略低，可能是由于超聲使溶液溫度上升，不利于維生素C穩定地存在，故選擇振搖提取的方法；45 min和60 min的提取效率無明顯差異。故最終選擇20%甲醇振搖提取45min（速率240r／min）作為提取條件。

預試驗中分別考察了乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.05%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液4個流動相系統[8-11]，結果表明，采用甲醇-水體系，各峰分離度較好，且基線平穩，出峰時間適宜，但峰形存在拖尾現象，故在水相中加入磷酸以改善峰形，效果較好，同時考慮到色譜柱的耐用性等因素，最終選擇甲醇-0.1%磷酸溶液作流動相。分別考察了檢測波長為242，260，270，283 nm時對結果的影響，結果表明，以270 nm作檢測波長時，各峰吸收強度適宜，分離度好。

綜上所述，本研究中建立的方法操作簡便、準確，精密度、穩定性、重復性均較好，可用于同時測定維爾康膠囊中3種成分的含量。