去整合素金屬蛋白酶8在食管鱗癌的表達及與病理特征的關系

王獻，張燦斌，鄭帥玉

（河南科技大學第一附屬醫院 胸外科，河南 洛陽 471000）

食管鱗癌是消化道第4 常見腫瘤，嚴重威脅人類健康。近年來以手術為主的綜合治療雖然取得很好療效，但食管鱗癌患者5年生存率仍較低，其主要原因是食管鱗癌對周圍組織極強的侵襲性及容易發生淋巴結轉移[1-2]。因此，如何有效早期預測食管鱗癌預后，對于疾病診療具有極大意義。

去整合素金屬蛋白酶家族成員去整合素金屬蛋白酶8（A disintegrin and metalloproteinase 8, ADAM8）已被證實在乳腺癌、前列腺癌等多種癌癥組織中高表達，且在腫瘤發生、發展中發揮關鍵作用，與病理分級、預后密切相關。在食管鱗癌ADAM表達譜研究中證實，ADAM8 在食管鱗癌中亦高表達[3-4]。但是，ADAM8 與食管鱗癌病理、預后的關系尚不明確，尤其是預測作用仍缺乏研究。因此，本研究擬探討ADAM8 與食管鱗癌病理分級之間的關系及對預后的預測作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年5月—2016年5月河南科技大學第一附屬醫院因食管鱗癌行手術治療的患者47 例。其中，男性37 例，女性10 例；年齡（63.1±12.4）歲；腫瘤直徑0.8～7.8 cm，平均（4.3±1.9）cm；食管鱗癌組織學分級：Ⅰ級11 例，Ⅱ級24 例，Ⅲ級12 例；TNM 分期：Ⅰ期8 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期16 例，Ⅳ期11 例；發生淋巴結轉移24 例。選擇同期住院的正常食管黏膜47 例作為對照。患者及家屬對研究內容知情，自愿參與并簽署知情同意書，研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①結合患者術前資料，并經細胞學或病理組織學診斷為食管鱗癌[5]；②有可供檢測腫瘤組織標本且不存在壞死。排除標準：①有接受放療、化療及生物細胞免疫治療病史的患者；②合并嚴重心、肝、腎等其他器官功能障礙患者；③合并血液性、感染性、免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病的患者。統計分析患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤類別、TNM 分期、淋巴結轉移等信息，并隨訪至2018年7月28日，無死亡及失訪病例。細胞分化程度根據病理組織學，由2 位病理科醫生判定。腫瘤分期符合2002年國際抗癌聯盟第6 版TNM 分期標準[5]。

1.3 方法

所有病理標本均于術中取材，標本獲得后立即置于4%中性甲醛溶液中固定，經石蠟包埋切片后，篩選腫瘤細胞成分＞80%的切片進行檢測。

1.4 試劑與儀器

免疫組織化學環保脫蠟液（中國博士德生物科技有限公司）脫蠟，高溫修復抗原，3%過氧化氫H2O210 min，10%山羊血清室溫封閉1 h；Ki-67 抗體（美國Proteintech 公司）、ADAM8 多克隆兔抗（美國Proteintech 公司）4℃孵育過夜。用抗鼠/兔通用型免疫組織化學檢測試劑盒（美國Proteintech 公司）檢測Ki-67、ADAM8 抗體結合情況并顯色。蘇木精復染 2 min 后進行脫水處理，中性樹脂封片。

1.5 結果判定

Ki-67 染色結果由2 位病理科醫生根據食管癌細胞陽性率進行分級：＜50%評判為Ki-67 指數低；≥ 50%評判為Ki-67 指數高。ADAM8 染色結果由2 位病理科醫生根據食管癌細胞陽性率進行分級：≤1%為（-），＞1%～25%為（+），＞25%～50%為（++），＞50%～75%為（+++），＞75%～100%為（++++）。

1.6 統計學方法

數據分析采用SPSS 17.0 統計軟件，計數資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗，Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，比較采用Long-rank χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中ADAM8 表達比較

47 例患者癌組織ADAM8 免疫組織化學染色分級為（-）7 例（14.89%），（+）9 例（19.15%），（++）8 例（17.02%），（+++）12 例（25.53%），（++++）11 例（23.40%）。將分級（-）和（+）的免疫組織化學結果歸為ADAM8低表達，（++）～（++++）歸為ADAM8 高表達（見圖1）。食管鱗癌組織中ADAM8 高表達31 例（65.96%），低表達16 例（34.04%）；正常黏膜組織中，ADAM8 高表 達10 例（21.28%），低表達37 例（78.72%）。兩者比較，差異有統計學意義（χ2=19.077，P=0.000），食管鱗癌組織中ADAM8 高表達比例＞正常組織黏膜。

2.2 ADAM8 表達與病理特征的關系

高分級腫瘤患者ADAM8 表達高于低分級腫瘤患者，Ⅲ、Ⅳ期患者ADAM8 表達高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴結轉移患者ADAM8 表達高于無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

圖1 癌組織中ADAM8 表達 （免疫組織化學染色×200）

2.3 ADAM8 表達與預后的關系

癌組織中ADAM8 高表達患者與ADAM8 低表達患者，術后2年生存率的比較，經Long-rank 生存分析，差異具有統計學意義（χ2=3.462，P=0.025），ADAM8低表達患者生存率高于ADAM8 高表達患者。見圖2。

表1 ADAM8 表達水平與臨床病理特征的關系 例（%）

圖2 不同ADAM8 表達患者術后2年生存分析

3 討論

食管鱗癌細胞高侵襲轉移能力是其預后差、病死率高的重要原因之一。近年來，與食管癌侵襲、淋巴結轉移相關的蛋白逐漸被發現，研究表明這類蛋白對預測患者預后，輔助病理分級診斷具有重要意義，因此，探討與食管鱗癌病理分級并預測其預后的相關蛋白是近年研究熱點[1-2]。ADAM8 是去整合素金屬蛋白酶家族的一員，有膜型（ADAM8m）和分泌型（ADAM8s）2 種亞型，在腫瘤中的作用逐漸受到學者重視。研究表明，ADAM8 可作為惡性黑素瘤診斷標志物[6]。亦有學者在Ⅳ期神經母細胞瘤中觀察到ADAM8 表達上調[7]。ADAM8 在多種惡性腫瘤中的作用已得到廣泛研究，并已經證明可通過多種機制調控腫瘤侵襲轉移[8-9]。但是關于ADAM8 在食管癌中的作用及機制研究卻相對匱乏。本研究表明，ADAM8 表達越高，食管鱗癌分級程度越高、TNM 分期越高、發生淋巴結轉移可能性越大、Ki-67指數越高，預后越差。與乳腺癌、前列腺癌、肝癌等研究結果一致。

ADAM8 與食管鱗癌病理特征相關的機制可能是，ADAM8 通過激活分解多種膜結合配體，如表皮生長因子、胰島素樣生長因子結合蛋白、Notch 配體δ樣1 和胎盤亮氨酸氨肽酶等，降解細胞外基質，增加腫瘤細胞侵襲性[10-11]。本研究表明，在高分級，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者，ADAM8 高表達比例更大，提示ADAM8 可能與食管鱗癌惡性程度及相關生物學行為存在關系。在發生淋巴結轉移的患者中進一步證實，ADAM8 高表達患者，更可能發生淋巴結轉移。由此推測，ADAM8 可能是參與食管鱗癌惡性轉化和侵襲過程的重要分子。另外，在高Ki-67 指數患者中，ADAM8高表達比例更大，提示ADAM8 可能還影響食管鱗癌細胞增殖。但是，在不同腫瘤大小比較中，ADAM8 表達無差異，可能的解釋是腫瘤大小受多因素影響，不僅僅與腫瘤的增殖能力相關，食管鱗癌部位、類型等亦可能影響就診時腫瘤大小[12]。因此，ADAM8 影響食管鱗癌細胞增殖的作用仍有待進一步探討。由此可推測，ADAM8 水平可能對判斷食管癌分化程度、TNM分期、淋巴結轉移等具有一定參考價值。既往在膠質瘤、肝癌等研究中證實，ADAM8 可通過調控細胞骨架蛋白，調控癌細胞EMT，進而影響癌細胞侵襲、遷移、增殖[13]。但ADAM8 參與影響食管鱗癌病理特征的具體機制尚不明確，ADAM8 是否通過相同機制調控食管癌仍有待進一步探討。

另外，本研究發現，ADAM8 表達與患者預后密切相關，生存期較短患者中，ADAM8 高表達比例更大，其可能的機制是ADAM8 參與調控食管癌細胞病理特征。提示術后ADAM8 檢查結果可作為臨床預測食管鱗癌患者預后與生存期重要指標，在臨床中加以應用。

綜上所述，食管鱗癌組織中ADAM8 表達上調，其表達水平與腫瘤分化程度、TNM 分期、淋巴結轉移及 Ki-67 指數有關，并影響預后。通過檢測ADAM8 表達對判斷食管鱗癌患者病理特征與預后具有一定參考價值。