外源生殖激素對繁殖后期母藍狐影響研究

趙 耀 吳汝梓 劉志平* 魏 來 韓歡勝

(1.東北林業大學野生動物與自然保護地學院，哈爾濱，150040；2.哈爾濱華隆藍狐育種有限公司，哈爾濱，150000；3.黑龍江省農墾科學院，哈爾濱，150038)

在藍狐(Alopexlagopus)養殖生產實踐中，母狐不發情的現象普遍存在。生殖激素分泌不足是導致母狐不發情最主要原因。為了提高母狐繁殖率，人們試圖通過使用外源激素來改善這一狀況。目前國內外學者使用外源激素對犬誘導發情的方法有了一定深入研究，也有過相關報道[1-4]，但因為生殖激素之間有著復雜的相互作用關系，目前均未獲得滿意的效果[5-6]。外源激素對動物的生殖機能有重要的影響，其中垂體促卵泡素(pituitarii follitropinum pro injectione，FSH)、孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)、人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)已被廣泛應用在動物生產中，FSH在超數排卵和誘導泌乳繁殖后期乏情的母畜發情方面能獲得良好的效果[7-8]。在狐方面也曾有使用HCG、PMSG和LRH-3的報道，但未見使用FSH報道。相關研究認為，使用外源性激素可以促使母獸發情但不產仔的原因，可能是與孕酮(P)缺乏有關[9]，據此本試驗在使用PMSG、LRH-3基礎上增加了FSH和P+FSH的組合，對繁殖后期乏情母藍狐進行催情處理。

1 材料

1.1 試驗動物

本試驗動物由哈爾濱華隆藍狐育種有限公司提供，在2018年繁殖末期選取3年齡內、體況良好、繁殖后期母藍狐30只，哈爾濱華隆藍狐育種中心隸屬于哈爾濱華隆集團，現有藍狐種群存欄8 400余只，建設占地30萬m2，年存欄約5.5—6萬只。

1.2 試驗藥品

獸用注射促黃體素釋放激素A3(LRH-3)、孕馬血清(PMSG)由赤峰博恩藥業有限公司生產；垂體促卵泡素(FSH)由寧波第二激素廠生產；孕酮(P)由寧波第二激素廠生產。其中LRH-3、FSH、PMSG均采用醫用生理鹽水稀釋，現用現配。

1.3 主要儀器

一次性注射器；載玻片；蓋玻片；棉簽；顯微鏡(型號為：BM-57XCS)；數碼相機；電子測情儀，由德國伍爾特公司生產；人工授精器械(保定設施、輸精針、輸精套管等)。

2 試驗方法

2.1 外源激素的注射

將選取的30只母狐(♀)，隨機分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，每組10只，Ⅰ組狐編號A1—10，Ⅱ組編號B1—10，Ⅲ組編號C1—10。分別注射所需的外源性激素，注射部位為藍狐后腿肌肉[3]。

Ⅰ組注射孕酮(P)0.85 mL、垂體促卵泡素(FSH)21.0 IU、孕酮(P)+垂體促卵泡素(FSH)0.1 mL+5.0 IU及垂體促卵泡素(FSH)+孕馬血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射11次。

Ⅱ組注射垂體促卵泡素(FSH)26.0 IU、垂體促卵泡素(FSH)+孕馬血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射6次。

Ⅲ組為空白對照組，不做任何處理。

對試驗的兩組母藍狐從2018后5月3日開始注射外源生殖激素，注射日期及劑量詳見表1、表2。

5月13日開始對實驗狐進行發情鑒定，對發情母狐實施輸精并于當天注射促黃體素釋放激素A3(LRH-3)2.5 μg/只，至實驗結束。

2.2 發情鑒定

母狐的發情鑒定采用外陰觀測、陰道角化細胞檢測、陰道電阻檢測綜合判定法[10]，即：外陰腫脹開始消退；陰道涂片可見大量角化細胞；陰道電阻值升高后回落。

2.3 輸精

選取優質種公狐，按摩法采精，后進行精子質量檢測，精子活力達到0.8以上，精子密度≧1 000×106個/mL，采用子宮內輸精(1次/d×3 d)，輸精量 0.6—0.8 mL。輸精3次后再次測量陰道電阻值，當陰道電阻值低于300 Ω，陰道角化細胞圓形細胞數增多則結束輸精，否則繼續輸精。

表1 Ⅰ組實驗母藍狐激素注射時間、名稱和劑量

Tab.1 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅰ experimental female blue foxes

表2 Ⅱ組實驗母藍狐激素注射時間、名稱和劑量

Tab.2 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅱ experimental female blue foxes

3 結果與分析

發情、假孕及產仔情況見表3。

通過對Ⅰ組和Ⅱ組藍狐進行發情檢測可知，Ⅰ組藍狐共有3只發情，其中A6、A9出現假妊娠現象；Ⅱ組藍狐共2只發情，其中B9出現假妊娠現象。

4 結論

4.1 在藍狐發情末期，聯合使用外源性P、FSH、PMSG和LRH-3可以促使部分繁殖障礙母藍狐發情，并出現假妊娠，但不能產仔。

表3 實驗組藍狐發情、假孕及產仔情況

Tab.3 Estrus，pseudo pregnancy and farrowing status of blue fox in experimental group

續表3

4.2 發情的母藍狐符合目前狐發情鑒定標準。

4.3 Ⅰ組使用激素后輸精3只，占比30%，假妊娠2只，占比66%，產仔0只，占比0。Ⅱ組使用激素后輸精2只，占比20%，假妊娠1只，占比50%，產仔0只，占比0。

4.4 從藍狐發情表現和發情數量上看，使用P組比沒使用P組效果好。

5 討論

藍狐是季節性單次發情，自發排卵動物，在非繁殖期卵巢出現休眠狀態，休情期可以達到9—10個月，若錯過了一個發情期則會增加一整年的飼養成本[11]。養殖狐生產中總是有相當一部分母狐在繁殖期不發情，使用外源性激素若能促使這些不發情的母狐正常繁殖，將會明顯提高養殖者的效益。

本研究中的外源激素對在繁殖后期乏情母藍狐使用。外源性激素注射部位為藍狐后腿外側[3]，結果證明使用外源激素可以促進藍狐發情，如果能使繁殖季節處于乏情狀態的母藍狐發情，提高配種率和藍狐的使用效率并產生較多后代，對于藍狐養殖業有重要的意義。本次實驗為發情后期對乏情母狐催情方法提供一個新的研究方向，有利于進一步發掘更多藍狐的生殖潛能。

促黃體素(LH)和促卵泡素(FSH)都有促卵泡發育的作用，單獨使用二者均可誘導發情。PMSG具有類似FSH和LH的雙重活性，但以FSH的作用為主，因此有著明顯的促卵泡發育的作用，同時有一定的促排卵和黃體形成的功能[11]。促黃體素釋放激素A3(LRH-3)能促使動物垂體前葉釋放促黃體素(LH)和促卵泡素(FSH)。兼具有促黃體素和促卵泡素作用。

葛東寧等[12]對正常發情母狐使用PMSG+HCG不同劑量組合和FSH+LH組合，獲得了較好的產仔效果。說明使用外源性激素對于正常發情的母藍狐可以提高藍狐繁殖率；譚建華等[13]給休情期性成熟母犬肌注PGF2α、eCG、hCG成功誘導其發情并使胚胎著床。說明使用外源性激素對于休情期母犬有促使其發情并排卵的作用

崔青山等[14]研究發現，對繁殖后期乏情母狐注射PMSG+HCG，可促使其出現發情表現，并接受交配，但是否產仔未做說明；劉志平等[15]使用PMSG+HCG組合促使不發情青年母狐發情并實施人工授精，結果也無一產仔。

以上研究表明，使用不同種外源激素可以促進藍狐發情，但都不能使其產仔。影響母狐受孕的因素有多種，對于使用外源性激素促使發情的母狐不受孕的原因分析是由于子宮和卵巢發育不同步造成的，也可能是由于P水平低下或催乳素不足[16]。因此本實驗設計在常規激素基礎上增加P組合，雖然未能獲得產仔，但有3只出現假孕生理反應，因此可以認為此3只母狐具備受孕的條件。

由于激素水平分泌不均導致的可能是隱性發情(非典型發情)，卵泡可發育成熟和排卵[11]。實驗組發情的5只母狐，從外陰觀測及電阻值(表3)上看，有3只屬典型發情(A6、A9、B9)，另2只屬非典型發情，后者不懷孕分析可能與卵子著床有關，而卵子著床與相應的環境、激素水平、子宮發育狀態密切相關，需要有解剖及組織學檢測證實，有待于進一步研究。