藥物分析中應(yīng)用超高效液相色譜法的研究

程士榮 王穎

連云港潤眾制藥有限公司 江蘇連云港 222000

1 超高效液相色譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

液相色譜是現(xiàn)代色譜技術(shù)中應(yīng)用最廣泛、最活躍的分析方法之一，廣泛用于環(huán)境、生化、食品、農(nóng)業(yè)、藥物等多個(gè)領(lǐng)域的分析。伴隨工業(yè)進(jìn)展與科技進(jìn)步，各個(gè)領(lǐng)域?qū)σ合嗌V的要求不斷提高，大批量樣品分析要求在短時(shí)間內(nèi)完成，一些生化樣品、天然產(chǎn)物的分析對液相色譜技術(shù)的分離能力提出了更高的要求，與其他技術(shù)聯(lián)用對檢測器提出了更高的要求。在這種情況下，基于小顆粒填料的液相色譜技術(shù)——超高液相色譜應(yīng)運(yùn)而生。超高效液相色譜法是一種新型的高效液相色譜技術(shù)，伴隨這一技術(shù)的研發(fā)成功與廣泛應(yīng)用，液相色譜技術(shù)的分離能力得到了快速提高，色譜分析技術(shù)也隨之進(jìn)入了一個(gè)新領(lǐng)域。因超高效液相色譜法具有樣品組分易吸收、樣品處理簡便、檢測自動化、檢測靈敏度高、藥物分離效率高等優(yōu)勢，常用于藥物質(zhì)量檢驗(yàn)、微量藥物檢驗(yàn)、藥劑樣品檢驗(yàn)、藥品成分識別等[1]。

2 超高效液相色譜法在藥物成分分析中的應(yīng)用

2.1 化學(xué)藥物

在化學(xué)成分剖析中，因?yàn)楹康汀⒎蛛x困難，分離時(shí)刻相對較長。而超高效液相色譜法能有用地進(jìn)步分離速度，縮短檢測時(shí)刻。同時(shí)，該技能靈敏度高，可為制劑成分剖析供給參閱。有學(xué)者將此技能用于氨氯地平苯那普利膠囊的成分檢測。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苯磺酸氨氯地平與鹽酸苯那普利的分離作用較好。在一定濃度的溶液中，二者線性關(guān)系良好，回收率大于99%。有學(xué)者選用超高效液相色譜法對水楊酸軟膏中水楊酸的含量進(jìn)行了調(diào)查。并且，經(jīng)過進(jìn)一步查驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該辦法重復(fù)性和精密度高，能得到抱負(fù)的理論板號，為藥品質(zhì)量查驗(yàn)供給參閱。

2.2 中藥制劑

中藥制劑成分含量較高，目標(biāo)檢測物質(zhì)含量較低，同類物質(zhì)較多，難以定量剖析。超高效液相色譜法能有用打破這一問題的局限性，在中藥制劑的辨別中具有良好的使用作用。一些學(xué)者選用超高效液相色譜法對藿香正氣丸中的成分進(jìn)行判定，結(jié)果表明，甘草酸、歐前胡素和丹參酮含量最高，回收率均在三以上。超高效液相色譜法在復(fù)方中藥制劑中具有良好的使用作用，可為藥物質(zhì)量操控供給有效的檢測辦法。

2.3 超高效液相色譜在藥物動力學(xué)研究中的使用

藥代動力學(xué)研究一般涉及藥物在患者體內(nèi)的吸收、分布、代謝和分泌，包含藥物及其代謝產(chǎn)物在復(fù)雜基質(zhì)中的分離，以及痕量剖析的結(jié)構(gòu)判定。生物體體液系統(tǒng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，成分復(fù)雜，難以區(qū)分相對分子質(zhì)量和保留時(shí)刻。此外，在醫(yī)治過程中，醫(yī)生給的劑量越來越少。現(xiàn)有的分離技能和微量成分檢測技能不能滿足藥物剖析的準(zhǔn)確性要求，阻礙了藥物代謝的剖析[2]。

2.4 在藥物代謝產(chǎn)物分析中的應(yīng)用

在進(jìn)行藥物代謝產(chǎn)物研究時(shí)，研究人員通常會采用HPLC 或HPLC-MS 技術(shù)。近些年來SFC 技術(shù)不斷完善，其應(yīng)用于代謝產(chǎn)物成分分析也逐漸被報(bào)道。在探究大鼠小腸各腸段對異甜菊醇鈉的吸收情況時(shí)引入了UPC2 方法，試驗(yàn)采用ACQUITYUPC2TMBEH（100mm×3．0mm，1．7μm）色譜柱，流動相A 為二氧化碳，流動相B 為1．5%甲酸甲醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為7min，大大縮短了檢測周期，并且可以同時(shí)獲得較高的專屬性和靈敏度。首次建立了基于超臨界流體萃取與超臨界流體色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（SFE-SFC-QQQ/MS）的在線檢測方法，用于全血中類胡蘿卜素的檢測。利用現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合離子掃描和多反應(yīng)檢測進(jìn)行定性，并采用改進(jìn)的方法對β-隱黃質(zhì)、玉米黃素、β-胡蘿卜素和辣椒紅素進(jìn)行定量分析。用UHPSFC-MS/MS 建立了血清中R/S-西酞普蘭對映體分離和定量的方法。試驗(yàn)采用UPC2TrefoilCEL2 色譜柱，流動相為二氧化碳-10mM 醋酸銨的甲醇溶液（70：30），進(jìn)樣量為1μl，運(yùn)行時(shí)間為4min，線性范圍為5-500nM，RSD為3．4%-4．5%，回收率為81%-91%。建立一種簡單、快速、環(huán)保的超臨界流體色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，可同時(shí)測定生物樣品中5 個(gè)AA 代 謝 物（PGD2、PGE2、PGF2α、6KetoPGF1α 和LTB4）。線 性 范 圍 為0．5-100ng/ml（R2 ≥0．995），PGD2、PGE2、PGF2α 和LTB4 的定量限均為0．5ng/ml，6KetoPGF1α的定量限為2．5ng/ml。方法的日內(nèi)和日間精密度均小于15%，準(zhǔn)確度在83%-109%。建立一種簡單、靈敏、高效的超臨界流體色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定比格犬血漿中尼莫地平的方法。用丙酮沉淀蛋白質(zhì)，從血漿中提取分析物，以尼群地平為內(nèi)標(biāo)物。采用AcquityUPC2TMBEH2-EP 色譜柱，以1．5ml/min 的流速梯度洗脫。應(yīng)用多重反應(yīng)監(jiān)測尼莫地平的m/z419．3 →301．3 和尼群地平的m/z361．4 →315．2 的轉(zhuǎn)變進(jìn)行定量[3-4]。

3 結(jié)語

綜上所述，高效液相色譜法是藥品生產(chǎn)企業(yè)控制藥品質(zhì)量的關(guān)鍵技術(shù)，是保證藥品質(zhì)量的關(guān)鍵一環(huán)。超高效液相色譜法是一種應(yīng)用較為廣泛的藥物檢測分析方法。與傳統(tǒng)的藥物檢測分析方法相比，超高效液相色譜法在靈敏度、速度等方面具有明顯的優(yōu)勢，能夠適應(yīng)更好、更復(fù)雜的環(huán)境。在高壓高速環(huán)境下，還可以進(jìn)行有效的藥物檢測和分析。超高效液相色譜法能更好地滿足藥物分析的高效性要求，適合于現(xiàn)代藥物分析。