SPME-GC-MS法測定生、炒飲片三子養親湯揮發性成分

隋利強 黃婷婷 曹冬英 吳冬梅 李丹

【摘 要】 目的：通過固相微萃取氣質聯用分析（SPME-GC-MS）探討三子養親湯方中分別以生、炒飲片組方后揮發性成分的差異。方法：通過頂空固相微萃取提取生、炒飲片組方的三子養親湯揮發性成分和方中單味藥生、炒飲片的揮發性成分，運用GC-MS技術，對揮發性成分進行分析，比較其差異。結果：從三子養親湯生、炒飲片組方揮發性成分中分別鑒定出化合物29、46種。芥子、炒芥子、萊菔子、炒萊菔子、蘇子、炒蘇子揮發性成分中分別鑒定出化合物39、54、36、52、48、45種。三子養親湯分別以生、制飲片組方的揮發性成分差異較大，尤其是異硫氰酸酯類成分變化明顯，三子養親湯分別以生、炒飲片組方的異硫氰酸烯丙酯含量為80.1% 和10.6%，生、炒芥子異硫氰酸烯丙酯含量分別為88.9% 和36.9%。萊菔子、紫蘇子炮制前后的異硫氰酸酯類物質也存在同樣的變化趨勢。炒制飲片組方中的β-律草烯、2-丁基-2-辛烯醛、2，5-二甲基-3-乙基吡嗪、反-2-辛烯醛、2-庚烯醛等成分在單味藥炒制品中未檢測到，而炒芥子中的薄荷酮等成分在炒品飲片組方的三子養親湯中也未檢測到，推測三藥合煎與分煎的揮發性成分存在差異。結論：三子養親湯方中分別以生、炒飲片組方后揮發性成分的差異，在臨床使用時，應以炒制飲片組方后合煎使用。

【關鍵詞】 三子養親湯;揮發性成分; SPME-GC-MS

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2019）16-0040-07

Abstract：Objective Analyse the volatile components of Sanziyangqintang formulas of raw and processde herbal by SPME-GC-MS. Methods Extract the volatile components of Sanziyangqintang made up of raw and processed herbal， both he volatile components of the herbal， analyze the volatile constituents by GC-MS.Results Itidentified 29 and 46 compoundsfrom Sanziyangqintang made up of raw and processed herbal，39 and 54 compoundsfromraw and processed Sinapis Semen，36 and 52 compoundsfromraw and processed Raphani Semen， 48 and 45 compoundsfromraw and processed Perillae Fructus. The volatile components of Sanziyangqintang made up of raw and processed herbalis different， the content of allyl isothiocyanate is 80.1% and 10.6%.The content of allyl isothiocyanate in raw and processed Sinapis Semen is 88.9% and 36.9%.Raw and processed Sinapis Semenhad， raw processed Perillae Fructus had the same rule.β-cyclohexene in Sanziyangqintang made up of processed herbal is not detected in Sanziyangqintang made up of raw herbal.Menthone inprocessed Sinapis Semen is not detected in Sanziyangqintang made up of processed herbal.Itspeculatethat chemical components are different between single frying and combined decoction of the herbal in Sanziyangqintang. Conclusion The volatile components of Sanziyangqintang made up of raw and processed herbalis different，the herbal should be processed and combined decocted.

Keywords：Sanziyangqintang;Volatile Components;SPME-GC-MS

“三子養親湯”出自明代《韓氏醫通》，是臨床常用方劑，該方由紫蘇子、芥子、萊菔子組成，用于咳嗽喘逆、痰多胸痞、食少難消，舌苔白膩，脈細滑等癥，常用于治療老年慢性支氣管炎、咳嗽、肺炎等[1-5]。三子養親湯原方用法為方中三藥微炒、搗碎后入湯劑煎服，但實際使用過程中有用生飲片組方使用的情況。方中的白芥子生用辛散力強，善于通絡止痛，炒后能緩和辛散走竄之性，避免耗氣傷陰，長于順氣豁痰。紫蘇子生品多用于腸燥便秘，炒后辛散之性緩和，更宜于風寒喘咳。萊菔子生升熟降，生用能升能散，長于涌吐風痰，炒后緩和了涌吐痰涎的副作用，突出了消食除脹、降氣化痰的作用。前期實驗中觀察到三子養親湯分別以生、炒飲片組方后氣味差異明顯，推測該變化可能與揮發性成分的變化有關，而三子養親湯揮發性成分分析未見文獻報道。研究通過比較三子養親湯分別以生、炒飲片組方后煎煮過程的揮發性成分差異，探討三子養親湯以炒制后的飲片入藥的合理性。

揮發油的提取常用水蒸氣蒸餾法、微波輔助萃取法以及超臨界流體萃取法等，但上述方法提取時間長，藥材用量也大。固相微萃取法適合于微量化合物的提取，且簡便、快捷，既可以保證樣品的重現性，又減少了樣品的用量[6-9]。本實驗嘗試運用頂空固相微萃取樣品揮發性成分，通過GC-MS分析，比較生、炒飲片組方的三子養親湯和方中單味藥炮制前后揮發性成分差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器 HZ-HS-502N型電子天平（福州衡之展電子有限公司）、DFY-C-500型萬能高速分碎機（溫嶺市林大機械有限公司）、6890N型氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、5973型質譜儀（安捷倫科技有限公司）、SPME手動進樣柄、萃取纖維頭（65 μm PDMS/DVB）。

1.2 材料 萊菔子、芥子和紫蘇子經福建中醫藥大學車蘇容副教授鑒定，分別為十字花科植物蘿卜Raphanus sativus L.的成熟種子、為十字花科植物白芥Sinapis alba L.的干燥成熟種子、紫蘇子為唇形科植物紫蘇Perilla frutescens（L.）Britt.的干燥成熟種子。

2 方法與結果

2.1 炮制品的制備[10] 炒萊菔子：取凈萊菔子，置炒制容器內，文火炒至鼓起，質酥脆，斷面淺黃色，有香氣逸出。炒芥子：取凈芥子，置炒制容器內，文火炒至深黃色，有爆鳴聲，斷面淺黃色，有香辣氣。炒紫蘇子：取凈紫蘇子，置炒制容器內，文火炒至顏色加深，有爆鳴聲，斷面淺黃色，有氣。

2.2 揮發性成分提取 分別精密稱取生、制飲片組方的三子養親湯藥粉2.0g于100mL的頂空瓶中，加水20mL迅速密封，浸泡20min，將其放置在恒溫水浴的裝置中，將老化過的65μmPDMS/DVB的固相微萃取插入到密封的頂空瓶中，推出萃取頭，90℃下頂空萃取40min。將固相微萃取的裝置立即插入GC-MS的進樣口，于250℃下脫附5min進行分析。萃取樣品前，萃取頭均應在250℃下老化10min[11]。另外分別精密稱取生、炒萊菔子，生、炒芥子，生、炒紫蘇子粉末各2.0g于100mL的頂空瓶中，萃取方法同上。

2.3 GC-MS分析

2.3.1 GC-MS條件 DB-5MS石英彈性毛細管柱（30m×0.25mm×0.25μm），載氣為He，進樣口溫度250℃，不采用分流進樣，程序升溫：50℃的溫度保持1min，再以2.5℃/min的速率升溫至210℃，保持5min;柱流量1mL/min，解析5min。電離方式EI;電子能量70Ev;離子源230℃;接口230℃;溶劑延遲時間為3.0min;質量掃描范圍m/z30～550。

2.3.2 GC-MS分析 按2.2.1項下方法分析收集的樣品的揮發性成分，通過GC-MS分析，各樣品揮發性成分總離子流圖（如圖1所示）。結合NIST Version1.7質譜數據庫檢索進行定性分析，將相似度在85%以上的化合物用峰面積的歸一法計算得其相對百分含量（見表1）。

通過GC-MS分析，三子養親湯及單味藥中揮發性成分主要為烷烴類、酯類、酮類等，其中異硫氰酸酯類成分為主要的揮發性成分在生芥子和生飲片組方中分別占到揮發性成分的88.9和80.1%。三子養親湯分別以生、炒飲片組方后，共檢測到揮發性成分60種，生飲片組方獨有的成分13種，炒制飲片組方獨有成分30種，兩者共有成分16種。生、炒萊菔子共檢測到揮發性成分73種，生萊菔子獨有的成分20種，炒萊菔子獨有成分35種，兩者共有成分19種。生、炒芥子共檢測到揮發性成分69種，生芥子獨有的成分13種，炒芥子獨有成分29種，兩者共有成分23種。生、炒紫蘇子共檢測到揮發性成分67種，生紫蘇子獨有的成分22種，炒紫蘇子獨有成分21種，兩者共有成分24種。

三子養親湯以生、炒飲片組方后揮發性成分差異明顯，尤其是異硫氰酸環丙酯、異硫氰酸烯丙酯等異硫氰酸酯類成分相對含量明顯降低。如三子養親湯生、炒飲片組方的異硫氰酸烯丙酯含量分別為80.1% 和10.6%，生、炒芥子異硫氰酸烯丙酯含量分別為88.9% 和36.9%。萊菔子、紫蘇子炮制前后的異硫氰酸酯類物質也存在同樣的變化趨勢。異硫氰酸酯類物質系由硫代葡萄糖苷酶解產生的次生產物，具有抗癌、抑制微生物生長等藥理活性，但過量對胃產生刺激或致嘔作用，炒制可殺酶保苷，抑制硫代葡萄糖苷類成分酶解，部分地消除了對胃腸道刺激和致嘔的副作用 [12]。

3 討論

α-側柏酮為炒制飲片組方的三子養親湯特有成分，相對含量為24.6%，生飲片組方未檢測到該成分。側柏酮能增強脾細胞和胸腺細胞增殖、增強細胞因子（如白介素-2、干擾素-γ） 的作用，具有一定的抗腫瘤能力[13]。故推測三子養親湯以炒制飲片組方在一定程度上增強患者免疫能力，起到扶正祛邪的作用。

三子養親湯生、炒飲片組方所檢測到的揮發性成分與方中單味藥生、炒飲片的揮發性成分大部分相同，但也有部分化合物存在差異。如炒制飲片組方合煎過程檢測到的β-律草烯、2-丁基-2-辛烯醛、2，5-二甲基-3-乙基吡嗪、反-2-辛烯醛、2-庚烯醛等成分在三藥單煎過程中未檢測到，生飲片組方合煎過程檢測到的異硫氰酸苯乙酯、二十四烷、4-仲丁基-2，6-二叔丁基苯酚等成分在三藥單煎過程中未檢測到。炒萊菔子中的4-仲丁基苯酚、4-甲基十三烷、反式-2-癸烯醛、正戊基2-呋喃酮、二十八烷等成分、炒芥子中的薄荷酮等成分，在炒品飲片組方的三子養親湯中也未檢測到，推測三子養親湯單煎與合煎的化學成分存在差異。

對三子養親湯分別用生、炒飲片組方后的揮發性成分進行了比較分析，結果顯示，生、炒飲片組方的三子養親湯揮發性成分差異明顯，方中藥物單煎與合煎后揮發性成分也存在差異，但單煎與合煎的差異成分與藥效相關性有待于進一步研究。由于本次實驗所用毛細管內部涂層和萃取纖維頭的選擇性，所測化合物數量和種類只能檢測大部分三子養親湯及單味藥的揮發性成分，少數化合物在該萃取條件和檢測條件下無法測得。該結果可為三子養親湯的進一步研究，尤其是單煎與合煎的差異分析提供參考。后期實驗可結合LC-MS等方法對生、炒飲片組方的三子養親湯中的成分變化做進一步相對全面的分析，另外，可結合藥效學實驗和藥效成分分析結果對三子養親湯單煎與合煎差異性進行更深入的探討。

目前，臨床中藥配方顆粒應用較為廣泛，配方顆粒有其自身優勢，如攜帶、服用方便等，但是對于某些單煎與合煎存在差異的方劑如三子養親湯則應該按傳統用法合煎服用或制備復方的配方顆粒。

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（收稿日期：2019-05-21 編輯：程鵬飛）