參蘇丸中4種成分HPLC法測定

安艷蘇 許慶 張麗琴

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定參蘇丸中葛根素（A）、柚皮苷（B）、橙皮苷（C）和新橙皮苷（D）的含量測定方法。方法：采用Hypersil ODS2色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：35℃;流動相：甲醇-水，線性梯度洗脫，流速：1mL/min;檢測波長：225nm。結果：4種成分均能達到基線分離，且在相應濃度范圍內線性關系良好，平均回收率均在98%以上。結論：本法準確、簡便、快捷、結果穩定，可用于參蘇丸中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量測定。

【關鍵詞】 參蘇丸;高效液相色譜法;含量測定

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2019）16-0053-03

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of four components of Shensu pill：Puerarin（A），Method for the detemination of pomeloside（B）、orange peel glycoside（C）、 and new orange peel glycoside（D）. Methods Use hypersil ODS2 column （250 mm×4.6 mm，5 microns）;Column temperature 35 ℃;Flow phase： methanol-water;linear gradient elution，Flow rate：1 mL/min;detection wavelength 225 nm.Results All four componentsachieve baseline separation and linear relationship within the corresponding concentration range Goog，The average recovery is above 98%.Conclusion Thismethod accurate、simple、fast，the results were stable and could be used to determine the content of puerarin， naringin，orangetin and new orangeside in shensu pill.

Keywords：Shensu Pill;HPLC;Assaying

參蘇丸是中國藥典收載的品種，由黨參、紫蘇葉、葛根、前胡、茯苓、半夏（制）、陳皮、枳殼（炒）、桔梗、甘草、木香等組成，具有益氣解表、疏風散寒、祛痰止咳等作用，用于身體虛弱、感受風寒所致感冒，癥見惡寒發熱、頭痛鼻塞、咳嗽痰多、胸悶呃逆、乏力氣短等[1]。葛根、陳皮和枳殼為其主藥，現代藥理研究表明，葛根中葛根素、大豆苷元和大豆苷等異黃酮類化合物為有效成分，對心血管系統、免疫系統的疾病有較好的治療作用，其制劑用于治療頭暈頭痛、高血壓病、心絞痛和突發性耳聾等疾患療效顯著，臨床應用廣泛[2]。陳皮中有較高含量的陳皮苷 Hesperidin （亦稱橙皮苷、橘皮苷），具有維持血管正常滲透壓、降低血管脆性、縮短流血時間等作用。陳皮和枳殼來源于同蕓香科不同種的不同藥用部位，均含有豐富的黃酮類化合物，陳皮主要含有橙皮苷、新橙皮苷，枳殼主要含柚皮苷、新橙皮苷及少量的橙皮苷，且上述黃酮類化合物結構非常相似。為更好地控制藥品質量，本研究參照文獻[3-4]建立了高效液相色譜法測定其中4種成分-葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量測定方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1260型高效液相色譜儀（包括G1311C型四元泵、G1329B型自動進樣器、G1316A型柱溫箱、G1314F型紫外檢測器，美國Agilent 公司）;MS205DU電子分析天平（上海梅特勒儀器有限公司）;KQ-300UDB型雙頻數控超聲清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）。Hypersil ODS2 C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2 材料 葛根素（批號：110752-201514，含量：95.5%）、柚皮苷（批號：110722-201613含量：94.3%）、橙皮苷（批號：110721-201617，含量：96.1%）、新橙皮苷（批號：111857-201703，含量：99.2%）均購于中國食品藥品檢定研究院。參蘇丸（規格：6g/袋，批號：20160101、20160103、20170503，云南XX藥廠）。甲醇為色譜純;水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS2色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇（A）-水（B）線性梯度洗脫（程序見表1）;柱溫：35℃;流速：1mL/min;檢測波長：225nm;進樣量：5μL。按上述色譜條件，依次取陰性樣品溶液、混合對照品溶液和供試品溶液各5μL進樣，記錄色譜圖。葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的保留時間依次為：15.2min、27.2min、28.8min、30.3min;理論板數依次為：13181、39115、43199、49916;4個成分均分離完全，陰性樣品溶液在與混合對照品溶液相應峰處未見色譜峰出現，說明參蘇丸中的其他藥物及輔料對測定無干擾，如圖1所示。

2.2 混合對照品溶液制備 分別精密稱取四種對照品（A：16.30mg;B：15.22mg;C：15.20mg;D：14.96mg）于4個10mL的量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，搖勻，分別精密量取上述四種對照品溶液2mL于同一25mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻。作為混合對照品儲備液（A：124.53μg/mL;B：114.82μg/mL;C：116.86μg/mL;D：118.72μg/mL）;再精密吸取2.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備 取樣品適量，研細，精密稱取約1.0g，置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率240W，頻率45KHz）40min，放至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 取不含葛根的參蘇丸處方與不含枳殼和陳皮的參蘇丸處方，按參蘇丸[1]制法制備不含葛根與枳殼和陳皮的陰性樣品，按“2.3”項下的制備方法制備陰性樣品溶液，即得。2.5 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、1、2.5、5、10mL于10mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得。按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以進樣濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸，計算回歸方程，結果見表2。2.6 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液，連續進樣5次，A、B、C、D峰面積的RSD（n=5）分別為0.59%、0.51%、0.64%、0.54%。結果表明進樣精密度良好。

2.7 重復性試驗 取批號20160103的樣品，研細，精密稱取約1.0g，共5份。按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別按“2.1”項下的方法測定，記錄色譜圖，結果A、B、C、D含量的RSD（n=5）分別為1.1%，0.82%，1.0%，0.79%，表明方法重復性良好。

2.8? 穩定性試驗 按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，分別于配制后0、4、8、12、16、24h進樣測定，記錄峰面積、結果A、B、C、D的峰面積的RSD依次為：0.86%、0.79%、0.92%、0.77%。結果表明供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.9? 加樣回收率試驗 取準確測定含量批號為“20160103”的樣品，研細，精密稱取約0.5g，共6份，分別加入對照品溶液（A：1556.6μg/mL，B：1435.2μg/mL，C：1460.7μg/mL，D：1484.0μg/mL）各1mL，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣，計算A、B、C、D的平均回收率（n=6）和RSD，結果見表3，結果表明回收率良好。

2.10 樣品含量測定 取3批次樣品，各3份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣，記錄峰面積，以外標法計算各成分含量，結果見表4。

3 討論

3.1 流動相的選擇 試驗中曾采用0.1%磷酸溶液，甲醇，乙腈，水作為流動相[3-4]，但在試驗過程中甲醇—水為流動相峰型好，且分離效果良好，故選擇甲醇—水為流動相。

3.2 實驗中樣品提取 曾采用水，稀乙醇、乙醇、甲醇等溶劑，結果顯示甲醇提取效果較好。同時考察了超聲提取，加熱回流提取方式，結果兩者差異不大，但超聲提取簡便、快捷，故選擇超聲提取;試驗過程中比較了超聲提取（功率240W，頻率45KHz）20、30、45、60、90min的提取效果，結果顯示超聲提取（功率240W，頻率45KHz）45、60、90min的結果一致，故選擇超聲提取（功率240W，頻率45KHz）45min為提取時間。

參蘇丸是中國藥典收載的品種，葛根、陳皮和枳殼均為其主藥，且葛根素、油皮苷、橙皮苷、新橙皮苷又是其主藥成分。通過該方法可以有效控制參蘇丸中葛根、陳皮、枳殼的質與量。在測定過程中、樣品的分離度較好、陰性樣品無干擾、方法簡便，快捷，準確、一法可控制該處方中多味藥材的質與量。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[2]王曉青，傅靜.葛根的藥理作用研究進展[J].北京中醫藥大學學報，1994（3）：39-41.

[3]張順平，張順吉.消化膠囊中7個成分的測定[J].中國醫藥工業雜質，2017，10（48）：1489-1492.

[4]楊佳靜，薛佳，周華芳，等.HPLC法同時測定胃蘇顆粒中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中國藥房，2014（4）：372-374.

（收稿日期：2019-06-13 編輯：程鵬飛）