豬鏈球菌致病性研究及其公共衛生意義探討

康梓博

摘 要 豬鏈球菌病是養殖業發展過程中的一種常見多發疾病，由于其人畜共患的特點受到廣泛關注。本文對豬鏈球菌在小鼠、斑馬魚、微型豬三種動物中的致病性進行了詳細研究，并闡述了豬鏈球菌病的公共衛生意義。

關鍵詞 豬鏈球菌；致病性；公共衛生

1 豬鏈球菌致病性研究

1.1 豬鏈球菌對小鼠的致病性研究

在進行豬鏈球菌對小鼠的致病性研究之前首先進行菌液制備。用接種環取適量的豬鏈球菌分離株菌種，使用劃線法將豬鏈球菌接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，在37℃溫度條件下培養18h-24h，對菌落的形態進行觀察，包括其形狀、顏色、體積、表面光滑度等。選用具有典型性的單體菌落，接種在THB營養肉湯中，肉湯應保證含有2%牛血清，在37℃溫度條件下培養24h。之后以6000r/min的轉速對肉湯進行10min的離心處理，收集沉淀物，使用10mL容量的THB培養基重懸。稀釋菌液的倍率比使其達到108cfu/ml，并取用200μL的菌液兌入THB培養基使其達到2mL制成菌懸液，使用平板表面涂布法記錄菌落的數量并稀釋備用。

致病力試驗應使用20g左右健康小鼠460只，分兩次進行試驗，每次230只，按照每組5只分成46組。使用菌液制備過程中制成的豬鏈球菌液各1mL，分別使用腹腔注射方法對前44組小鼠進行致病力試驗，第45組設為稀釋液對照組，對小鼠注射1ml的THB培養液，第46組設為空白對照組，對小鼠注射1mL的生理鹽水，并對小鼠持續觀察7d并記錄其發病情況。對于死亡的小鼠應及時進行解剖處理，對于生存下來的小鼠分別在感染豬鏈球菌后的3d、5d、7d內殺死，對腦、心肌和多種主要臟器進行豬鏈球菌的分離，使用PCR確定小鼠體內的菌株與試驗使用菌株是否一致。通過判斷小鼠臨床癥狀和解剖分析臟器內菌株，得出豬鏈球菌分離株對于小鼠的致病性[1]。

1.2 豬鏈球菌對斑馬魚的致病性研究

豬鏈球菌對斑馬魚的毒力試驗進行前，可將斑馬魚分為7組，每組使用100條斑馬魚。取用5株不同的豬鏈球菌分離株以及1株無毒參考菌株，分別對其進行菌液培養，將濃度稀釋到10-6，對前5組斑馬魚進行腹腔接種豬鏈球菌分離株菌液，第6組注射無毒菌株菌液，第7組注射等量生理鹽水作為空白對照組。將斑馬魚分為每缸20條，在容量為12L的魚缸中進行30℃恒溫養殖7d，對斑馬魚的養殖過程進行觀察記錄，出現斑馬魚死亡時應及時對斑馬魚進行解剖。通過解剖了解到，前5組的LD50數據分別為9.62×103、8.77×103、8.20×103、1.15×104和2.89×104，無毒株的LD50為5.67×107，通過半數致死量的數據差異體現出豬鏈球菌的致病性。

斑馬魚的免疫實驗中，選取AB系斑馬魚每組60條，在27℃溫度條件下進行飼養。選擇經滅活處理的HA7345和ZY05812兩種豬鏈球菌分離株、MRP重組蛋白、豬抗HA7345高免血清、豬陰性血清和生理鹽水對各組斑馬魚進行注射，14d后進行二次免疫。28d后使用50LD50劑量的HA7345進行注射攻擊。經測量，滅活HA7345和ZY05812分離株以及MRP充足蛋白、高免及陰性血清的RSP數值分別為79%、71%、62%、73%、7%。保持試驗條件不變，分別用滅活HA7345和ZY05812用同樣方法分別對斑馬魚進行免疫處理，二次免疫后使用50LD50劑量的ZY05812對斑馬魚進行注射攻擊，兩組的RSP數值都達到了85%。試驗證明HA7345與ZY05812兩種滅活豬鏈球菌分離株之間可以起到良好的交叉免疫保護，可以作為抗體使用。同時，MRP重組蛋白和豬鏈球菌高免血清也可以起到一定的免疫效果。

1.3 豬鏈球菌對微型豬的致病性研究

在微型豬的致病性試驗過程中，使用109cfu的豬鏈球菌分離株培養物對3頭體重5kg左右的3月齡微型豬進行肌肉注射。3頭豬在注射后24h內均出現體溫升高、食欲下降等臨床現象，2頭豬在7d后死亡，另一頭3d后自行康復。在病死豬腦、心臟以及臟器內采集細菌，通過PCR檢測與注射的豬鏈球菌分離株相同。實驗中應設置2頭體重與月齡相同的微型豬作為對照組，分別注射等量無毒菌株與生理鹽水，觀察20d后微型豬無臨床癥狀出現。

對微型豬進行免疫保護試驗前，應選用微型豬10頭，其中1頭設為空白對照組。首先對微型豬進行豬鏈球菌抗體ELISA法檢測全部為陰性，之后采用滅活HA7345疫苗進行二次免疫。兩周后將豬分為兩組，第一組5頭豬注射ZY05812菌液，第二組4頭豬注射HA7345菌液，每頭注射量為109cfu。觀察后發現第一組有2頭豬在注射兩天后發病，其中一頭在四天后死亡，另一頭在三天后康復，其余免疫豬保持健康存活，并檢測出存在高滴度的抗體[2]。

2 淺析豬鏈球菌公共衛生的意義

豬鏈球菌的致病原理與其感染能力、黏附能力和溶血能力有極大的關系。豬鏈球菌常見型有1型、2型、4型、9型等，通過呼吸道、消化道和傷口等途徑在豬群中進行快速傳播，且發病極為迅速，往往給養殖業帶來嚴重的經濟損失。豬鏈球菌對于人類也有致病危險，主要通過傷口感染，可能引起腦膜炎、敗血癥、心內膜炎等一系列病癥，經常與豬群接觸的養殖人員是其感染的高危人群。例如，2005年我國四川省爆發大規模豬鏈球菌病疫情，造成大量豬死亡的同時感染人數達到百人以上，死亡數十人。

3 結語

綜上所述，豬鏈球菌是一種威脅性極高的致病菌，在豬群中可以快速進行傳播，在短時間內威脅到大量豬的生命健康，造成養殖業的嚴重經濟損失。同時，豬鏈球菌也對人類存在一定的威脅。有關部門應加強對豬鏈球菌致病性的研究，做好豬鏈球菌病的防控工作，充分保證食品安全和養殖行業工作人員的安全。

參考文獻：

[1]董志民，李秀麗，田向學，等.天津地區豬鏈球菌9型分離株致病性的研究[J/OL].中國獸醫科學：1-10

[2]鄭成坤，賈夢蝶，王彥紅.血清4型豬鏈球菌的分離鑒定及其致病性和藥物敏感性分析[J/OL].中國獸醫科學：1-7