鴨感染腺病毒的研究進(jìn)展與防控*

徐小林，陳申培，程小果，張厚勝，陳申秒**

（1.安徽宣城宣州區(qū)楊柳鎮(zhèn)人民政府農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)站 安徽宣城 242064；2.安徽華晨畜牧水產(chǎn)科技公司 合肥 230071；3.山東省動(dòng)物病原微生物工程實(shí)驗(yàn)室 山東濱州 256606）

2013 年以來(lái)，禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)AdV）感染病例遍布我國(guó)，蛋雞、商品白羽肉雞、黃雞等各種品種的雞群大面積流行，給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大損失。流行的初期，關(guān)于鴨感染腺病毒的報(bào)道相對(duì)較少，沒(méi)有關(guān)于鴨群感染腺病毒造成大面積傷亡的報(bào)道。

隨著對(duì)FAdV 病原研究和疫苗防治的開(kāi)展，很多新的問(wèn)題不斷被發(fā)現(xiàn)，病原的來(lái)源、流行性毒株血清型的變化和鴨感染病例的增多是最為值得關(guān)切的問(wèn)題，本文對(duì)近些年來(lái)FAdV 病毒、血清型變化的分子機(jī)制、不同宿主的特異性變化進(jìn)行綜合分析，探討鴨感染腺病毒發(fā)病可能的原因和規(guī)律，為解決該病尋求技術(shù)突破。

1 腺病毒的分類(lèi)與血清型變化

根據(jù)國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)（ICTV）分類(lèi)，腺病毒科Adenoviridae 下設(shè)5 個(gè)屬，其中包括禽腺病毒屬（Aviadenovirus）和富AT 腺病毒屬（Atadenovirus）。禽腺病毒屬包括三個(gè)群，目前認(rèn)為引起當(dāng)前雞腺病毒流行的為I 群禽腺病毒的不同血清型，包括鴨腺病毒2 型。而鴨腺病毒A 型是富AT 腺病毒屬的代表種[1]，其與近兩年鴨群感染腺病毒病例逐漸增加的關(guān)系還有待于進(jìn)一步研究。有學(xué)者建議將鴨腺病毒2 型明確為腺病毒科禽腺病毒屬（Aviadenovirus）的一個(gè)新種，將鴨腺病毒A 型命名為鴨源富AT 腺病毒A 型。

前人研究報(bào)道認(rèn)為，F(xiàn)AdV 不同血清型甚至相同血清型的不同毒株致病性差異很大[2]，引起當(dāng)前我國(guó)FAdV 主要流行毒株為C、D、E 三個(gè)種，其中C 種FAdV 以血清4 型和E 種血清8 型為主[3,4]。尹燕博等[5]研究顯示，對(duì)2007-2017 年從我國(guó)主要養(yǎng)殖區(qū)臨床病料中分離的86 株禽腺病毒（FAdV）血清型鑒定結(jié)果表明，我國(guó)流行的主要血清型為FAdV-11、FAdV-4、FAdV-8b 和FAdV-8a，其中商品蛋雞主要是FAdV-4（88.9%）和FAdV-11（11.1%）；商品白羽肉雞主要是FAdV-11（47.6%）和FAdV-8b（28.6%），同時(shí)也有FAdV-8a 和FAdV-4 檢出；其研究還發(fā)現(xiàn)2017 年FAdV-8b 的檢出率出現(xiàn)異常增高。朱小甫等[6]2017年對(duì)雞群FAdV分析發(fā)現(xiàn)主要流行株屬于FAdV-4型，且與山東鴨源株以及印度、韓國(guó)毒株具有很高的同源性。

鴨感染腺病毒的報(bào)道逐漸增多，隨著樣本數(shù)的擴(kuò)大，結(jié)果并不完全一致。陳仕龍等[7]從雛番鴨流行一種以肝臟腫大、顏色變淡呈黃白色、表面有斑駁狀或散在點(diǎn)狀出血點(diǎn)為主要特征的新疫病中分離到多株病毒，證實(shí)該病是由一種有別于EDSV 和禽腺病毒血清4 型的新型鴨腺病毒感染導(dǎo)致的，鑒定為鴨2 型腺病毒。人工感染鴨出現(xiàn)與臨床相似的病癥和剖檢病變，與攻毒鴨同居感染的雛番鴨也能發(fā)病和死亡。劉吉山等[8]2016 年對(duì)山東省某鴨場(chǎng)養(yǎng)殖25 日齡麻鴨進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷，證實(shí)該鴨群系感染FAdV-4，發(fā)生心包積水綜合征并導(dǎo)致死亡。江斌等[9]2017 年于福建某番鴨場(chǎng)25 日齡番鴨檢測(cè)出I 群2 型腺病毒病。番鴨腺病毒病會(huì)導(dǎo)致感染鴨的肝臟出現(xiàn)腫大、壞死、變白的特征性病理變化，分析該病毒的靶器官在肝臟。劉新勃等[10]檢測(cè)泰安地區(qū)的櫻桃谷鴨，檢測(cè)到的FAdV 主要為血清4 型，也檢測(cè)到1 例血清8b 型。Marek 等[11]采用高通量測(cè)序技術(shù)獲得了法國(guó)株的全基因序列。接著國(guó)內(nèi)學(xué)者在雛番鴨急性死亡、肝臟出血和發(fā)黃的病料中檢測(cè)到鴨2 型腺病毒，并獲得了病毒全基因序列[12-14]。

綜上所述，對(duì)鴨群流行的腺病毒類(lèi)型可以概括為鴨腺病毒A型、I 群腺病毒2 型、FAdV-4 和FAdV-8b 等幾種類(lèi)型，其中鴨腺病毒A 型的分類(lèi)地位和流行情況尚需深入證實(shí)；鴨腺病毒2 型被認(rèn)為是僅發(fā)生于番鴨的類(lèi)型，這種感染機(jī)制需要更深入的研究來(lái)證實(shí)，從其他病原在番鴨和其他品種鴨群上的差別來(lái)看，宿主細(xì)胞對(duì)病毒感染的差異是存在的，而FAdV-4 和FAdV-8b 在雞群上大面積發(fā)生而又轉(zhuǎn)到對(duì)水禽的感染，則是近年來(lái)與其它種類(lèi)疾病具有共同的流行特點(diǎn)，這給疾病的不斷變化、流行范圍和疾病控制都帶來(lái)很大的難度，從防治研究上意義重大。

2 腺病毒引起不同宿主感染的機(jī)制研究

FAdV 基因組為雙股線性DNA，基因組大小約為43～45kb，由二十面體對(duì)稱(chēng)的蛋白質(zhì)外殼包裹著核酸構(gòu)成的核心，外殼主要由六鄰體（hexon）、五鄰體（penton）、纖維蛋白（fiber）等構(gòu)成[15]。Hexon 基因是腺病毒科所有病毒的必需功能域基因[16]，存在于所有腺病毒科病毒；hexon 蛋白是FAdV 的主要免疫保護(hù)性蛋白，含有主要的種屬特異性抗原決定簇，具有被中和抗體識(shí)別的表位，當(dāng)hexon 蛋白出現(xiàn)替代或突變將會(huì)導(dǎo)致中和免疫缺失[17,18]。

目前對(duì)腺病毒變化的跟蹤主要是基于對(duì)hexon 基因的研究和 分 析，Sheppard 等[15]將FAdV-10 hexon 分 為loop 區(qū) 和pedestal 區(qū)，前者又分為L(zhǎng)1、L2、L3 和L4；pedestal 分為P1和P2。Loop1、Loop2 及P1 區(qū)在hexon 基因的前段和中段，主要有大量抗原和親水性基團(tuán)，高度保守且能誘導(dǎo)較高特異性的抗體，是FAdV 基因分型的靶基因，其變化對(duì)病毒的影響極為關(guān)鍵[19]。鄒開(kāi)宇等[20]對(duì)我國(guó)I 群禽腺病毒主要流行血清型hexon 蛋白序列分析及抗原表位預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)loop 區(qū)為FAdV-I 主要可變區(qū)，在hexon 蛋白氨基酸序列L1 區(qū)第132～289 位、L2 區(qū)第363～507位和L4 區(qū)第793～878 位存在可變區(qū)預(yù)測(cè)到FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b 和FAdV-11 的代表株hexon 蛋白分別有40、37、38 和37 個(gè)抗原表位，并分別有16 個(gè)、3 個(gè)、6 個(gè)和3 個(gè)特異性抗原表位。劉榮昌等[21]通過(guò)克隆分析鴨腺病毒A 型的hexon 基因序列，推測(cè)禽腺病毒屬存在特異性感染鴨群的腺病毒，近年來(lái)關(guān)于分離到鴨腺病毒2 型（duck adenovirus 2）的報(bào)道證實(shí)了這種推測(cè)[13,22]。牛登云等[4]對(duì)hexon 基因測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，2015 年4 型流行毒株的hexon 基因出現(xiàn)17 個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，8b 型流行毒株則出現(xiàn)84 個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，氨基酸突變率分別達(dá)到2.9%和10.4%。

根據(jù)FAdV感染主要病理變化，分為雞包涵體肝炎（Inclusion bodyhepatitis，IBH）、心包積水綜合征（Hydropericardium syndrome，HPS）和肌胃糜爛（Gizzarderosions，GE）三大類(lèi)。研究報(bào)道認(rèn)為IBH 與HPS 的流行和FAdV 血清型相關(guān)，在流行規(guī)律和病變特征上有很大差異，12種血清型均可以引起包涵體肝炎，以FAdV-8a/b 為主，引起心包積水綜合征僅FAdV-4 型[22]。臨床病理學(xué)觀察中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AdV-4 可引起雞肝細(xì)胞核爆炸式碎裂，心包腔中有淡黃色清亮積液，肺水腫，肝臟腫脹和色變，腎臟腫大伴有腎小管擴(kuò)張，心臟和肝臟出現(xiàn)多發(fā)性局灶性壞死，同時(shí)伴有單核細(xì)胞浸潤(rùn)[23]；FAdV-8b 特別偏好在肝細(xì)胞生長(zhǎng)，且在特定情況下能導(dǎo)致嚴(yán)重的肝損傷（IBH），導(dǎo)致肝臟蒼白、質(zhì)脆、腫脹，肝和骨骼肌會(huì)有出血點(diǎn)和出血斑，也可導(dǎo)致雞淋巴器官中淋巴細(xì)胞大量崩解，并引起典型的腺胃炎[5]。劉東等[24]研究認(rèn)為，目前國(guó)內(nèi)I 群腺病毒主要有2 個(gè)血清型，臨床表現(xiàn)包涵體肝炎的為FAdV-8a/b 型，表現(xiàn)為心包積液綜合征的為FAdV-4 型。

綜合來(lái)看，鴨源腺病毒的來(lái)源有富AT 腺病毒屬的鴨腺病毒A 型和禽腺病毒屬兩個(gè)來(lái)源，目前的研究認(rèn)為鴨腺病毒A 型只有1 個(gè)血清型，而來(lái)源于禽腺病毒屬的不同血清型的報(bào)道并不一致，且在不斷發(fā)生變化。來(lái)源于富AT 腺病毒屬的鴨腺病毒A 型致鴨群發(fā)病的研究數(shù)據(jù)偏少，禽腺病毒屬在鴨上面的感染血清型的變化需要持續(xù)的跟蹤。根據(jù)已有的數(shù)據(jù)來(lái)看，由雞源腺病毒到鴨群的傳播值得懷疑，鴨群感染導(dǎo)致不同血清型感染雞的情況更為復(fù)雜，系統(tǒng)防治措施有待于進(jìn)一步完善。

3 腺病毒的防治

隨著獸用生物制品的發(fā)展和市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)的活躍，越來(lái)越多的疫苗產(chǎn)品用于畜禽疾病的防治，然而系統(tǒng)的防治不能僅僅寄希望于疫苗，在系統(tǒng)的防治體系當(dāng)中，完備的生物安全措施、正確的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)手段以及合理的免疫評(píng)估是解決疾病的根源。目前對(duì)腺病毒抗原、抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室方法均有報(bào)道，Saifuddin 等[25]建立了組織或血液中檢測(cè)FAdV 抗原的ELISA 方法，可檢測(cè)出感染低于100TCID50/mL 的病毒。Marek 等[26]用六鄰體表達(dá)的重組蛋白作為包被抗原，建立了一種檢測(cè)FAdV 的ELISA 方法和斑點(diǎn)ELISA 方法。文艷玲[27]將hexon 表達(dá)的抗原蛋白作為包被抗原，建立檢測(cè)FAdV 抗體的間接ELISA 方法，其對(duì)免疫的雞血清中的抗體具有很高的敏感性。然而無(wú)論抗原還是抗體的檢測(cè)方法，都沒(méi)有開(kāi)發(fā)為方便規(guī)模化養(yǎng)殖使用的檢測(cè)產(chǎn)品，這對(duì)于評(píng)估養(yǎng)殖鴨群或雞群的感染情況的評(píng)估，以及指導(dǎo)和制定合理的程序都具有很大的缺陷。

FAdV 流行血清型的多樣性是防治的最大難題，血清型之間的交叉保護(hù)研究報(bào)道很多，觀點(diǎn)并不完全一致。Steer 等通過(guò)交叉中和試驗(yàn)證實(shí)，F(xiàn)AdV-1 和8b 型不能相互中和，韓國(guó)學(xué)者報(bào)道FAdV-4 滅活疫苗可交叉保護(hù)FAdV-5、8a、8b 和11 型。國(guó)內(nèi)有報(bào)道稱(chēng)，F(xiàn)AdV-4 滅活疫苗只能交叉保護(hù)FAdV-8b，但不能完全保護(hù)FAdV-8a 的攻擊。尹燕博等[5]研究發(fā)現(xiàn)FAdV-4 可以中和FAdV-11，F(xiàn)AdV-11 的血清卻不能中和FAdV-4，而且FAdV-4、8a 和8b 型之間均不能相互中和，F(xiàn)AdV-8b 和11 型之間能相互中和。從目前國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)反饋的情況來(lái)看，不同血清型存在于不同的養(yǎng)殖區(qū)域，不同血清型產(chǎn)品的保護(hù)效果差異顯著，有報(bào)道稱(chēng)用FAdV-2 型、4 型、8a/b 型、10 型、12 型等地方分離株，根據(jù)區(qū)域流行的血清型制備的二價(jià)或多價(jià)油乳劑滅活苗，保護(hù)效果明顯提高。另外，深入研究和開(kāi)發(fā)亞單位和載體疫苗，避開(kāi)使用全病毒制備疫苗，具有很大的優(yōu)勢(shì)和前景。Shah 等[28]將原核表達(dá)的五鄰體核衣殼蛋白制成亞單位疫苗，用于免疫肉雞，疫苗保護(hù)率達(dá)90%以上。對(duì)所有畜禽疾病而言，在開(kāi)發(fā)免疫產(chǎn)品的同時(shí)，配套開(kāi)發(fā)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)產(chǎn)品，是有益于養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的正確道路，值得研究者共同探討。對(duì)鴨群防治FAdV 來(lái)說(shuō)，建立快速有效檢測(cè)鴨群感染血清型的方法和疫苗免疫評(píng)估方法，是研究FAdV 防治的重點(diǎn)方向之一。

生物安全措施永遠(yuǎn)都是疾病防治的第一關(guān)口，從目前我國(guó)養(yǎng)鴨的規(guī)模和發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，規(guī)模化的速度很快但仍存在較多的問(wèn)題，一方面出現(xiàn)了高感染率禽病轉(zhuǎn)移到鴨群的情況，比如禽流感、新城疫、腺病毒；另一方面出現(xiàn)了很多新病，比如鴨坦布蘇病、鴨長(zhǎng)舌病、星狀病毒等。由于發(fā)展速度快，規(guī)范程度低，產(chǎn)品和技術(shù)更新滯后，造成鴨群使用的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)層次不齊，垂直傳播的疾病和產(chǎn)品原輔料污染是最大問(wèn)題。周斌等[29]從污染的疫苗中分離到禽腺病毒，其造成的影響是非常巨大的，市場(chǎng)流通的粗制抗體、不合規(guī)的治療性產(chǎn)品極大的增加了病毒感染鴨群的風(fēng)險(xiǎn)，生物安全的問(wèn)題不從根源上加以控制，會(huì)有更多的鴨群疾病出現(xiàn)，對(duì)整個(gè)養(yǎng)禽業(yè)的疾病控制帶來(lái)更為復(fù)雜的問(wèn)題，也為病毒的生存留下更多空間。因此，我們應(yīng)當(dāng)從生物安全、產(chǎn)品安全、檢測(cè)到位、監(jiān)測(cè)及時(shí)、程序規(guī)范、評(píng)估有效等系統(tǒng)開(kāi)展疾病的防治研究，將疾控當(dāng)成一個(gè)系統(tǒng)工程有效控制病毒的擴(kuò)散和傳播。█