羥氯喹與青蒿素的體外抑菌實驗及其對治療系統性紅斑狼瘡的猜想

林舉達 熊素素 葉小清 吳鵬 謝丹萍 梁道蘭

（1 廣東醫科大學附屬醫院精神心理科 廣東 湛江 524000）

（2 廣東省湛江市原佳彩印包裝材料有限公司微生物檢驗室 廣東 湛江 524000）

抗瘧藥用于治療系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)已有100多年的歷史[1]，其中羥氯喹是一種喹諾酮類抗瘧藥，其主要成分是4-氨基喹啉，羥氯喹可通過抑制抗原呈遞、阻斷Toll樣受體的活性等發揮免疫抑制作用，同時還有光保護作用，減少紫外線照射后皮膚中白細胞介素6,白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α的mRNA的產生，從而抑制皮膚炎癥介質的產生, 該藥是目前治療SLE的基礎藥物[2,3]。而同樣作為抗瘧藥的青蒿素對SLE也有治療作用，近期屠呦呦科研團隊提出雙氫青蒿素片增加SLE適應癥的新藥申請，并通過國家食品藥品監督管理總局審批，獲得藥物臨床試驗批件[4]。本研究選取羥氯喹和青蒿素做微生物抑制實驗，探討其在體外的抑菌作用，為臨床應用提供實驗依據。

1.資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 藥物試劑 頭孢呋辛酯片（0.25g/片）；硫酸羥氯喹片（0.1g/片)；98%青蒿素純品。

1.1.2 微生物 含有多種混合細菌生長的消防水。

1.1.3 試劑與儀器 無菌超凈工作臺；立式高壓滅菌鍋；生化培養箱；胰酪大豆胨瓊脂培養基；烘箱；吸管；無菌鑷子；培養皿等。

1.2 體外抑菌實驗

1.2.1 配置培養基 加蒸餾水1000ml到容量為1000ml的無菌燒瓶中，并稱取胰酪大豆胨瓊脂培養基40g放入燒瓶中，常溫溶解，搖勻，再放入高壓滅菌鍋經121℃高壓滅菌15min，經冷卻后備用。

1.2.2 藥液的制備 取頭孢呋辛酯片0.25g、硫酸羥氯喹0.1g及青蒿素20mg分別置于無菌培養皿中，再用吸管吸取1ml無菌生理鹽水加入各培養皿中，放置大約20分鐘至藥物完全溶解。

1.2.3 微生物抑制實驗 向盛放各藥液的培養皿中分別加入1ml消防水，用玻璃棒攪勻，再加入25ml培養基，然后另取一培養皿加入1ml消防水和25ml培養基，最后將所有接種好的培養皿置于溫度為35℃生化培養箱中，培養三天后檢測菌落數。

2.實驗結果

培養的第3天檢測菌落數：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素2cfu、消防水25cfu。培養的第4天檢測菌落數：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素3cfu、消防水56cfu。培養的第5天檢測菌落數：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素3cfu、消防水249cfu。本實驗結果顯示：羥氯喹和青蒿素均有類似于頭孢呋辛酯的體外抑制細菌生長的作用。

表 藥物微生物抑制實驗結果

3.討論

SLE是臨床上常見的自身免疫系統性疾病，此病常引起患者身體多個系統及器官損傷，病情嚴重時甚至可導致患者死亡[5]。目前該病的發病機制尚不明確，有研究者認為，此病的發生是在遺傳因素、環境因素和雌性激素的相互作用下，引起機體的免疫系統出現紊亂，使其自身產生大量的T、B細胞，導致機體的淋巴細胞被異常活化產生大量抗體，并與其體內的自身抗原結合，形成免疫復合物，進而導致多系統及器官的嚴重損傷[6]。還有部分學者認為，遺傳因素、感染、內分泌失調和免疫系統異常均與SLE的發生、發展密切相關[7]。羥氯喹能通過抑制細胞膜中溶酶體的活性，從而增強溶酶體的穩定性，同時還對淋巴細胞、TNF及IL-1A具有明顯的阻滯作用，可以消除炎性介質，從而發揮治療SLE的作用[8]。而青蒿素及其衍生物則具有雙向免疫調節作用，對于治療SLE等自身免疫性疾病有確切的療效，屠呦呦科研團隊通過雙氫青蒿素治療自發型系統性紅斑狼瘡小鼠(BXSB小鼠)，發現雙氫青蒿素通過抑制B淋巴細胞增殖，并且促進CD8+T細胞的增殖抑制自身抗體產生，發揮雙向調節免疫功能，降低體液免疫反應，減輕免疫復合物的形成，從而達到治療SLE的作用[9]。而筆者在臨床上觀察到SLE病人常有發熱、感染、皮疹與關節腫痛等癥狀，實驗室檢查也發現血白細胞計數（WBC）和中性粒細胞比例（NE）增高、血抗鏈球菌溶血素O（ASO）增高、血沉增快、尿WBC增高，或存在咽扁桃炎、鼻竇炎、胃炎等現象，據此，筆者推測SLE的發病機制可能是體表皮膚黏膜潛伏著慢性隱性細菌感染，細菌長期釋放毒素入血，致遠隔組織器官毒素性損害伴炎癥免疫性反應，從而引起的全身性多系統損害[10]。本次研究我們也發現羥氯喹與青蒿素具有與抗生素相似的抗菌作用，因此羥氯喹和青蒿素在治療SLE中既發揮了目前人們普遍認為的抗炎及調節免疫的作用，同時也可能具有與抗生素相似的抗菌作用，可消除或控制患者體內慢性隱性細菌感染，起到SLE的病因學治療的作用。但是由于目前對SLE的細菌感染機制認識不足，不能充分徹底地對SLE進行病因學治療，因此導致SLE療效欠佳，病情遷延，反復發作。本研究還是一個初步的探索，在未來研究中，我們還需要開展更嚴謹規范的實驗去進一步證實羥氯喹與青蒿素的抗菌作用。