良惡性膀胱腫瘤患者的PRMT5和Cox-2表達水平比較

郅玲然，王卉芳，蔡鳳梅，李元朋，焦向寧

（1.西安市第四醫院病理科，西安 710004；2.武警陜西省總隊醫院泌尿外科，西安 710054）

膀胱癌是指發生于膀胱黏膜移行上皮的惡性腫瘤，是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，在全球范圍內，膀胱癌發病率居惡性腫瘤的第11位，世界范圍內每年新增病例數約為1200萬，我國每年膀胱癌發病率約為6.69/10萬，其中男性發病率約為女性的3.7倍，且隨著近年來我國居民生活方結構的調整，膀胱癌發病率逐年遞增[1-3]。有研究發現，PRMT5在蛋白質甲基化中發揮重要作用，參與了細胞增殖、分化、凋亡和腫瘤形成等過程[4-5]；Cox-2屬于誘導酶的一類，越來越多的研究指出，其與腫瘤的發展、新生血管的形成等過程有密切聯系[6]。聯合檢測PRMT5與Cox-2在膀胱腫瘤良惡性的應用價值尚未見文獻報道。因此，本文對PRMT5和Cox-2在良惡性膀胱腫瘤患者表達水平進行了比較，以為良惡性膀胱腫瘤的診斷提供參考價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月—2018年1月我院經病理確診為膀胱腫瘤的患者83例，取其膀胱組織，分為良性組53例和惡性組30例，另選20例行前列腺增生癥開放術中所取膀胱黏膜組織且經病理檢查確定為正常的黏膜組織作為對照組。3組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法 良性組及惡性組均在經過尿道膀胱電切術或膀胱鏡術時取膀胱腫瘤組織，對照組為行前列腺增生癥開放術中所取膀胱黏膜組織且經病理檢查確定為正常的黏膜組織，均經10%甲醛固定、石蠟包埋，將包埋后的組織蠟塊行4 μm連續切片，之后采用免疫組織化學法[7-8]檢測PRMT5及Cox-2表達水平。兔抗人PRMT5單克隆抗體購自瑞士Enzo Life Sciences公司，羊抗兔二抗購自美國Invitrogen公司；Cox-2兔抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；即用型SP-9003 His-tostain TM-Plus Kits試劑盒（包括封閉用的生物素標記的抗山羊IgG、正常兔血清、辣根酶標記的鏈霉卵白素）購自美國Zymed公司；DAB顯色試劑購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 判斷標準 在裝有目鏡網格測微尺（80 μm×80 μm），×400倍視野下，每個組織切片隨機選取5個視野，每個視野計100個細胞中陽性細胞所占的百分比，結果取5個視野中陽性細胞所占百分比的平均值。PRMT5陽性染色判定為細胞漿或細胞核內出現黃色或褐色顆粒，Cox-2的陽性染色判定為細胞漿內出現黃色或褐色顆粒。5個視野中PRMT5陽性細胞所占百分比平均值≥6%記為PRMT5陽性；5個視野中Cox-2陽性細胞所占百分比平均值≥6%記為Cox-2陽性。根據病理學檢查結果對惡性組進行分級，分為低級別組與高級別組，低級別組11例，高級別組19例。

1.4 統計學方法 使用SPSS 16.0軟件，計數資料以頻數和百分率（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（） 表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組PRMT5及Cox-2陽性表達率對比 見表1。

表1 3組PRMT5及Cox-2陽性表達率對比 例（%）

2.2 不同病理分級惡性膀胱腫瘤組織PRMT5及Cox-2陽性表達率對比 見表2。

表2 不同病理分級惡性膀胱腫瘤組織PRMT5及Cox-2表達陽性率對比 例（%）

3 討論

膀胱癌是現階段泌尿系統最常見的惡性腫瘤，在我國男性癌癥發病率中居第8位，在女性中居第12位[9,10]。PRMT5是一類將S-腺苷甲硫氨酸上的甲基轉移至底物蛋白質中精氨酸胍基上的酶，在蛋白質甲基化中起著重要的作用。有研究[11]發現，PRMT5是一種表觀遺傳酶，可催化多種底物蛋白質甲基化，從而發揮不同的生物學功能，對多個靶基因和信號通路產生影響。張還添等[12]的研究指出，PRMT5既是一種表觀遺傳酶，同時也是介導實體瘤發生發展的重要基因，該基因在多種實體瘤中均呈現高表達，同時還與患者的病情及預后密切相關。張尤歷等[13]通過對肝癌患者的研究也發現，PRMT5對肝癌細胞的增殖、凋亡等過程會產生較大的影響，PRMT5會抑制cdc20、cdc25B等蛋白的表達，抑制細胞克隆形成能力，從而起到調控細胞周期的效果。

本研究也證實，惡性組的PRMT5及Cox-2陽性表達率明顯高于良性組和對照組，且良性組也高于對照組，說明在膀胱腫瘤組織中，PRMT5及Cox-2陽性表達率在惡性組織中表達高，分析其原因，Cox-2為可誘導性酶，主要存在于內質網和核膜中，正常情況下Cox-2水平較低，難以檢測到。但病理狀態下，患者體內Cox-2水平會大幅度上升，催化花生四烯酸轉化為前列腺素，促進細胞增殖、血管形成等進程，因而可以通過對Cox-2水平的監測來達到評估腫瘤狀態的效果。張軍衛等[14]的研究指出，Cox-2對膀胱癌診斷的敏感性為60.0%，特異度為92.0%，準確性為76.0%，提示該物質在腫瘤產生浸潤、轉移等過程中發揮重要作用。

同時本文通過將膀胱腫瘤患者惡性組織按照病理分級進行分組對比的方式發現，高級別組PRMT5及Cox-2表達陽性率明顯高于低級別組，說明在惡性組織中，惡化程度越嚴重，PRMT5及Cox-2表達陽性率越高。分析認為，其原因為兩種物質均在腫瘤細胞的增殖、轉移、浸潤過程中發揮較為明顯的作用，PRMT5能夠反映腫瘤細胞DNA復制、轉移的進程，而Cox-2可反映腫瘤組織新生血管的形成，膀胱的惡性病變會使PRMT5及Cox-2表達水平上升，遠高于良性病變者。同時隨著患者病情的加重，其膀胱組織中PRMT5及Cox-2會出現過表達現象，原因與腫瘤組織的轉移、浸潤會使PRMT5的合成激增，加快細胞的有絲分裂，而高級別組的膀胱癌細胞增殖分裂更為活躍，因而其PRMT5表達陽性率更高；Cox-2可通過誘導血管內皮生長因子的分泌促進新生血管的形成，而高級別組惡性腫瘤的浸潤增殖均需血管的營養，因而其Cox-2表達陽性率也較高。