海南野生鷓鴣茶資源調(diào)查與鑒定評價

顧文亮 莊輝發(fā) 王輝 張建禹 覃永蘭 張翠玲 秦曉威 譚樂和

摘 ?要 ?鷓鴣茶是具有海南地方和民族特色的代茶飲料植物和藥用植物，已開發(fā)成為廣受歡迎的特色旅游產(chǎn)品，但大規(guī)模的人為無序開發(fā)對野生資源造成了極大的破壞。通過對海南野生鷓鴣茶進(jìn)行資源調(diào)查、收集保存和保護(hù)利用等研究，結(jié)果表明：在海南全省10個市縣共13個調(diào)查地點(diǎn)中，僅2個地點(diǎn)的野生鷓鴣茶基本未受到人工影響，其余地點(diǎn)的野生植株長勢較弱，人為破壞較嚴(yán)重，部分生境已受到人工開墾的影響;先后收集保存285份鷓鴣茶種質(zhì)資源，并在異地建設(shè)種質(zhì)資源圃安全保存;對收集保存的285份資源進(jìn)行5個描述性狀和6個數(shù)值性狀的植物學(xué)鑒定評價，其中描述性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為0.69～1.74，數(shù)值性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為1.93～2.11，說明收集保存的鷓鴣茶種質(zhì)具有豐富的遺傳多樣性。本研究可為人工培育優(yōu)良鷓鴣茶無性品系提供了資源基礎(chǔ)和評價數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞 ?鷓鴣茶;資源調(diào)查;收集保存;遺傳多樣性

中圖分類號 ?S326 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ?A

Abstract ?Mallotus oblongifolius is a substitute tea beverage plant and medicinal plant with local and national characteristics in Hainan. It has been developed as a popular tourism product now. But large-scale development and utilization of wild Mallotus oblongifolius without plan has caused great damage to its germplasm resources. Wild resources investigation， collection and conservation as well as evaluation of M. oblongifolius were carried out in this research. The results showed that among the 13 survey locations in 10 cities of Hainan， wild M. oblongifolius grown in only 2 locations were not artificially affected. The growth of M. oblongifolius in the other sites were destructed artificially. Total 285 germplasm resources of M. oblongifolius were collected and safely preserved in different places. Botanical identification and evaluation of 5 descriptive traits and 6 numerical traits were carried out on these 285 germplasm resources. The variation range of diversity index of descriptive traits was 0.69～1.74 and the variation range of diversity index of numerical traits was 1.93～2.11， which indicating that the collected and preserved germplasms had rich genetic diversity. This research would provide resource basis and evaluation data for artificial breeding of excellent M. oblongifolius cultivars.

Keywords ?Mallotus oblongifolius （Miq.） Müll. Arg; resources investigation; collection and conservation; genetic diversity

DOI ?10.3969/j.issn.1000-2561.2019.11.023

鷓鴣茶[Mallotus oblongifolius （Miq.） Müll. Arg]是大戟科（Euphorbiaceae）野桐屬的多年生常綠灌木或小喬木[1]。鷓鴣茶又名山苦茶和五月茶，是深受海南當(dāng)?shù)匕傩障矏鄣奶厣胤讲瑁诤？凇⑽牟偤！⑷f寧、陵水、三亞、瓊中、保亭、五指山、樂東和東方等地均有野生植株分布[2]。據(jù)文獻(xiàn)記載，鷓鴣茶在我國廣東、廣西等省（自治區(qū)），以及中印半島和蘇門答臘島等國也有分布，但未見有作為特色茶飲用的記錄[3]。鷓鴣茶葉片曬干或風(fēng)干后具有零陵香氣，沖泡飲用時有淡淡的藥香味[4]，海南當(dāng)?shù)厝顺⑵溆米鼋庥湍仭⒅⑶鍩嵯詈椭箍噬虻睦习植琛ｚp鴣茶富含茶多糖、茶多酚、沒食子酸和多酚類等多種有效成分[5]，具有清除氧自由基[6]、抗動脈粥樣硬化[7]、促進(jìn)膽汁分泌[8]、抑制病菌活性[9]、抗疲勞衰老[10]與鎮(zhèn)靜止痛[11]等功效。當(dāng)前，海南地方企業(yè)將鷓鴣茶精深加工成復(fù)配茶[12]、涼茶飲料[13]或速溶茶粉[14]等產(chǎn)品，已成為廣受歡迎的海南特色旅游產(chǎn)品。

鷓鴣茶在海南已有悠久的飲用歷史，傳統(tǒng)上用來制茶的原料均是取自野生植株，鮮有人工種植，海南地方企業(yè)加工鷓鴣茶產(chǎn)品的原料亦是完全依賴野生資源。近年來，隨著海南自由貿(mào)易區(qū)（港）的持續(xù)建設(shè)和鷓鴣茶加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展壯大，長期的人工無序采摘對野生鷓鴣茶資源造成了嚴(yán)重的破壞，大規(guī)模的山林地開發(fā)也對其生境產(chǎn)生了較大的影響，對鷓鴣茶種質(zhì)資源進(jìn)行收集保存和創(chuàng)新利用是解決當(dāng)前問題的唯一途徑。本研究旨在通過對海南野生鷓鴣茶開展資源調(diào)查、收集保存和保護(hù)利用等方面的工作，摸清野生鷓鴣茶的生長狀況，同時在異地建設(shè)種質(zhì)資源圃保存野生鷓鴣茶資源，并對收集保存的野生鷓鴣茶資源進(jìn)行植物學(xué)性狀的鑒定評價，為人工培育優(yōu)良鷓鴣茶無性品系提供了資源基礎(chǔ)和評價數(shù)據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

供試鷓鴣茶來源于海南全島各市縣資源調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的野生植株，收集的枝條通過扦插繁育成苗[15]，經(jīng)統(tǒng)一編號后定植于種質(zhì)資源圃中，用于植物學(xué)鑒定評價的試驗(yàn)材料均采自種質(zhì)資源圃內(nèi)收集保存的種質(zhì)。

1.2 ?方法

1.2.1 ?資源調(diào)查方法 ?對海南多個市縣進(jìn)行野生鷓鴣茶的資源調(diào)查，拍照記錄野生植株，并詳細(xì)記錄其生長情況、生物學(xué)特征和生態(tài)習(xí)性。同時，詳細(xì)記錄調(diào)查地點(diǎn)的優(yōu)勢植物種類、生長情況和分布類別，并拍照記錄植株主要特征。優(yōu)勢植物種類鑒定為利用照片對比等方法，參考相關(guān)資料對植物種類進(jìn)行鑒定和歸屬[16]。

1.2.2 ?種質(zhì)保存方法 ?將采集鷓鴣茶植株的健康枝條經(jīng)扦插繁育后成苗，成苗的植株經(jīng)統(tǒng)一編號后定植于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所高龍?jiān)囼?yàn)示范基地內(nèi)的鷓鴣茶種質(zhì)資源圃中。野生鷓鴣茶資源在種質(zhì)資源圃中存活后，分別對每份資源編號并繪制田間分布圖，同時對每份資源的成熟葉片進(jìn)行圖像采集。

1.2.3 ?資源評價方法 ?對鷓鴣茶資源的葉片形狀、葉片顏色、葉柄顏色、葉片鋸齒和植株性別等描述性狀和葉柄長、葉片長、葉片寬、葉片長寬比、葉片周長和葉片面積等數(shù)值性狀進(jìn)行植物學(xué)的多樣性評價。每份鷓鴣茶資源隨機(jī)取3個植株，每個植株按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)至少取10片成熟葉片，利用LA-S植物圖像分析儀對葉片進(jìn)行數(shù)值性狀的測量;并對葉片顏色、葉片形狀和植株性別等描述性狀進(jìn)行觀察記錄。

1.2.4 ?數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法 ?根據(jù)香農(nóng)多樣性指數(shù)（Shannon's diversity index）的分析方法，人為將描述性狀按照1～6級賦值進(jìn)行記錄，描述性狀根據(jù)平均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（δ）分為10級，1級

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?資源調(diào)查

2.1.1 ?野生資源調(diào)查 ?從2015年1月至2018年1月，前往海南省海口、瓊中、萬寧、保亭、定安、瓊海、東方、白沙、樂東和陵水等10個市縣進(jìn)行野生鷓鴣茶的資源調(diào)查，每個調(diào)查地點(diǎn)至少考察2個以上野生居群，共計在10個市縣的不同

地域采集285份鷓鴣茶資源（表1）。在13個調(diào)查地點(diǎn)中，僅2個地點(diǎn)的野生鷓鴣茶植株健壯，生長良好，基本未受到人工影響，占比15.38%;8個地點(diǎn)的野生鷓鴣茶植株瘦弱矮小，有枯枝葉，長勢較弱，受到較嚴(yán)重的人為采摘影響，占比61.54%;3個地點(diǎn)的野生鷓鴣茶植株?duì)I養(yǎng)狀態(tài)較差，少有綠葉，人為破壞嚴(yán)重，占比23.08%。

2.1.2 ?野生生境調(diào)查 ?資源調(diào)查的野生鷓鴣茶分布在海拔50～500 m之間的生境中，野生生境中以巖石居多，土壤以砂壤土和黃壤土為主。低海拔的野生生境中，鷓鴣茶多生長在山林緩坡地帶或溝谷巖石灘邊緣，植被較少，人為開墾較嚴(yán)重，在調(diào)查中可見檳榔（Areca catechu）、椰子（Cocos nucifera）、巴西橡膠（Hevea brasiliensis）和柊葉（Phrynium capitatum）等人工種植作物。高海拔的野生生境中，鷓鴣茶多生長在山林溝谷或叢林小溪的兩岸，生境的腐殖質(zhì)積累較多，環(huán)境潮濕，植被較茂盛，生境植被多為熱帶低地雨林。根據(jù)調(diào)查，鷓鴣茶野生生境中的優(yōu)勢植物共有16個科，涉及29種植物，植物名錄詳見表2。

2.2 ?異地建圃保存資源

將在10個市縣采集的285份鷓鴣茶資源的健康枝條，扦插繁育成苗后分別編號進(jìn)行野生資源的異地保存，分批定植在中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所六甲基地。基地位于海南省萬寧市南橋鎮(zhèn)高龍村，內(nèi)部建設(shè)有鷓鴣茶種質(zhì)資源圃，種質(zhì)圃主要用于開展鷓鴣茶種質(zhì)資源的收集保存、鑒定評價、創(chuàng)新利用和種苗繁育等方面研究，見圖1。鷓鴣茶種質(zhì)資源圃占地約0.35 hm2，每份資源定植5株，截至2018年12月，鷓鴣茶種質(zhì)資源圃已保存資源285份。

2.3 ?資源的植物學(xué)性狀評價

根據(jù)對鷓鴣茶種質(zhì)資源成熟葉片的圖像采集（圖2），可見在葉片的形狀、大小和顏色等方面有著較為豐富的多樣性，為便于對鷓鴣茶種質(zhì)資源進(jìn)行植物學(xué)性狀的鑒定評價，在描述性狀中選擇葉片顏色、葉柄顏色、植株性別、葉片鋸齒和葉片形狀等5個性狀進(jìn)行評價，在數(shù)值性狀中選擇葉柄長、葉片長、葉片寬、葉片長寬比、葉片周長和葉片面積等6個性狀進(jìn)行評價。

2.3.1 ?描述性狀多樣性分析 ?對285份鷓鴣茶資源的5個描述性狀進(jìn)行分級和賦值，統(tǒng)計各個性狀的頻率并分別計算多樣性指數(shù)（表3）。根據(jù)表4可知，鷓鴣茶資源的描述性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為0.69～1.74，其中植株性別的多樣性指數(shù)最低（0.69），葉片顏色的多樣性指數(shù)最高（1.74）。收集保存的鷓鴣茶資源中葉片顏色、葉柄顏色和葉片鋸齒等3個性狀的多樣性指數(shù)大于1，而植株性別和葉片形狀等2個性狀的多樣性指數(shù)小于1。

根據(jù)表4可知，在收集保存的鷓鴣茶資源中，葉片顏色多為淺綠色（26.11%）、深綠色（19.87%）和綠色（18.37%）;葉柄顏色多為深綠色（29.39%）和綠色（26.63%）;葉片鋸齒多為稀（58.43%）和中（20.15%）;葉片形狀多為長圓形（67.46%）和橢圓倒卵形（19.47%）;植株性別則是雄性（56.24%）多于雌性（43.76%）。

2.3.2 ?數(shù)值性狀多樣性分析 ?對285份鷓鴣茶資源的6個數(shù)值性狀進(jìn)行多樣性指數(shù)分析，根據(jù)表5可知，鷓鴣茶資源在數(shù)值性狀上存在不同的遺傳變異，變異系數(shù)介于13.04%～45.00%，其中變異系數(shù)最大的為葉片周長（45.00%），變異系數(shù)最小的為葉片長/寬（13.04%）。鷓鴣茶資源的數(shù)值性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為1.93～2.11，其中葉片周長的多樣性指數(shù)最低（1.93），葉片長的多樣性指數(shù)最高（2.11）。收集保存的鷓鴣茶資源中，葉片長、葉片寬、葉片長寬比和葉片面積等4個性狀的多樣性指數(shù)大于2，而葉柄長和葉片周長等2個性狀的多樣性指數(shù)小于2。

3 ?討論

鷓鴣茶是助推海南島區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展的特色飲料植物，已經(jīng)被加工企業(yè)開發(fā)成為多種特色旅游產(chǎn)品，鷓鴣茶產(chǎn)業(yè)也發(fā)展成為帶動海南農(nóng)民脫貧致富的特色產(chǎn)業(yè)之一。但長期以來，對鷓鴣茶野生資源的過度利用導(dǎo)致其種質(zhì)資源受到嚴(yán)重破壞，林海等[18]在1992年指出海南沿海山丘野生鷓鴣茶資源破壞十分嚴(yán)重，數(shù)量急劇減少;劉國民等[19]在2007年發(fā)現(xiàn)野生鷓鴣茶資源日趨減少的局面非但沒有得到緩解，反而有所加劇;楊虎彪等[20]在2017年對鷓鴣茶的生態(tài)學(xué)特性研究中亦指出海南東部沿海的野生鷓鴣茶居群退化十分嚴(yán)重，過度采摘導(dǎo)致自然居群快速衰退。這說明對鷓鴣茶資源的全面保護(hù)已經(jīng)到了刻不容緩的程度，如不采取有效措施對野生資源進(jìn)行保護(hù)，部分性狀優(yōu)良的資源一旦消失將使得珍稀的遺傳資源無法復(fù)原。

針對鷓鴣茶種質(zhì)資源急劇減少、許多優(yōu)異種質(zhì)瀕臨消失的問題，國內(nèi)有關(guān)科研人員開展了鷓鴣茶種質(zhì)資源保存和人工馴化等方面的研究。李娟玲等[21]在2010年以保存在海南大學(xué)苦丁茶研究所內(nèi)的10個鷓鴣茶居群的種質(zhì)材料進(jìn)行ISSR標(biāo)記的引物篩選，供試的種質(zhì)材料主要來自于萬寧、三亞、文昌和保亭等4個市縣;楊虎彪等[22]在2017年對幼齡期鷓鴣茶的需光生理特性進(jìn)行研究，以期為人工馴化栽培奠定基礎(chǔ)。本研究始于2015年，先后在3年多的時間內(nèi)對海口、瓊中、萬寧、保亭、定安、瓊海、東方、白沙、樂東和陵水等全省10個市縣共13個地點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)的鷓鴣茶野外資源調(diào)查，同時將收集285份種質(zhì)資源安全保存在鷓鴣茶種質(zhì)資源圃中。同時，本研究還對285份鷓鴣茶種質(zhì)資源開展了5個描述性狀和6個數(shù)值性狀的植物學(xué)鑒定評價，其中描述性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為0.69～1.74，數(shù)值性狀的多樣性指數(shù)的變化范圍為1.93～2.11，這說明本研究收集保存的鷓鴣茶種質(zhì)具有豐富的遺傳多樣性。筆者認(rèn)為下一步應(yīng)當(dāng)實(shí)施鷓鴣茶資源的異地保存和原生境保護(hù)相結(jié)合的策略，并進(jìn)一步加快種質(zhì)資源的收集保存、鑒定評價與開發(fā)利用研究，選育出優(yōu)良鷓鴣茶無性品系并進(jìn)行規(guī)模化的商業(yè)種植，從而使得海南鷓鴣茶產(chǎn)業(yè)真正實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 吳德鄰. 海南及廣東沿海島嶼植物名錄[M]. 北京： 科學(xué)出版社， 1994： 84.

[2] 朱學(xué)雷， 安樹青， 張立新， 等. 海南五指山熱帶山地雨林主要種群結(jié)構(gòu)特征分析[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報， 1999， 10（6）： 641-644.

[3] Adam J H， Mamat Z. Floristic composition and structural comparison of limestone forests at three different elevations in Bau， Kuching， Sarawak， Malaysia[J]. Journal of Biological Sciences， 2005， 5（4）： 478-485.

[4] 林連波， 劉明生， 林 ?強(qiáng)， 等. 海南山苦茶揮發(fā)油成分的研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2001， 12（10）： 865-866.

[5] 林連波， 符小文， 艾朝暉， 等. 海南山苦茶葉的化學(xué)成分研究Ⅰ[J]. 中國中藥雜志， 2006， 31（6）： 477-479.

[6] 蘇冰霞， 張 ?月， 葛會林， 等. 山苦茶多糖的分離對抗氧活性的影響[J]. 食品科技， 2013， 38（9）： 160-164.

[7] 劉月麗， 王立群， 伍海濤， 等. 山苦茶提取物對動脈粥樣硬化防治作用的研究[J]. 海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2008， 14（6）： 608-611.

[8] 華運(yùn)群， 陳小川， 吳永強(qiáng)， 等. 山苦茶的利膽作用和毒性[J]. 中國藥理學(xué)通報， 1992， 8（5）： 334.

[9] 李彥軍， 王 ?勇， 高艷娟， 等. 鷓鴣茶提取物抑菌活性研究及其成分分析[J]. 食品工業(yè)科技， 2014， 35（10）： 202-204， 214.

[10] 劉月麗， 黃奕弟， 林連波. 海南山苦茶提取物對衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響[J]. 海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2012， 18（7）： 872-874.

[11] 華運(yùn)群， 歐樹安. 山苦茶的鎮(zhèn)痛作用[J]. 中國藥理學(xué)通報， 2003， 19（2）： 235-236.

[12] 王明強(qiáng)， 曹 ?兵， 李 ?翔. 復(fù)配袋泡鷓鴣茶的研究與開發(fā)[J]. 飲料工業(yè)， 2009， 12（7）： 8-10.

[13] 李 ?翔， 吳 ?霞， 羅 ?容， 等. 鷓鴣茶清熱復(fù)合飲料工業(yè)初探[J]. 食品科技， 2010， 35（7）： 127-130.

[14] 初 ?眾， 郭 ?瑩， 張彥軍， 等. 速溶鷓鴣茶的提取工藝優(yōu)化及揮發(fā)性成分分析[J]. 熱帶作物學(xué)報， 2018， 39（3）： 588-594.

[15] 顧文亮， 王 ?輝， 莊輝發(fā)， 等. 鷓鴣茶扦插繁育技術(shù)[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2016， 36（7）： 25-28.

[16] 黃圣卓， 段瑞軍， 王 ?軍， 等. 我國美濟(jì)礁引種植物調(diào)查[J]. 熱帶作物學(xué)報， 2019， 40（5）： 1022-1031.

[17] 胡建斌， 馬雙武， 李建吾， 等. 國外甜瓜種質(zhì)資源形態(tài)性狀遺傳多樣性分析[J]. 植物學(xué)報， 2013， 48（1）： 42-51.

[18] 林 ?海， 周 ?升. 海南山苦茶的生物學(xué)特性及其分布[J]. 海南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 1992， 10（4）： 32-34.

[19] 劉國民， 李娟玲， 王小精， 等. 海南鷓鴣茶的民族植物學(xué)研究[J]. 海南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2007， 20（2）： 167-172.

[20] 楊虎彪， 劉國道. 鷓鴣茶的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性研究[J]. 熱帶作物學(xué)報， 2017， 38（9）： 1583-1586.

[21] 李娟玲， 劉國民， 宮慶龍， 等. 鷓鴣茶種質(zhì)資源ISSR分子標(biāo)記中的引物篩選[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2010， 38（5）： 2257-2260.

[22] 楊虎彪， 劉國道. 不同光照強(qiáng)度對幼齡期鷓鴣茶生長的影響[J]. 熱帶作物學(xué)報， 2017， 38（11）： 2056-2059.