外源一氧化氮處理對山茶抗寒性的影響

周琳 楊柳燕 潘琦 張斌 房婉萍 朱旭君 張永春

摘要：以花鶴翎、六角大紅茶花為材料，以硝普鈉（SNP）為外源一氧化氮（NO）供體，研究外源NO對低溫脅迫條件下山茶花生理特性的影響。結果表明，在正常生長條件下，外源NO對2個山茶花品種的葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白、游離脯氨酸（Pro）含量以及 O-2·生成速率影響不顯著，但對超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和過氧化物酶（POD）的活性略有提高。低溫脅迫下，2個山茶花品種的葉綠素含量降低，可溶性糖、可溶性蛋白、Pro、過氧化氫（H2O2）、丙二醛（MDA）含量以及 O-2·生成速率顯著增加，SOD、CAT、POD活性顯著提高。低溫脅迫下，外源NO處理顯著減少了H2O2和膜脂過氧化物產物MDA的積累，顯著提高了葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白含量以及SOD、CAT、POD活性。低溫脅迫下，外源NO可通過提高山茶可溶性物質含量以及抗氧化酶活性，降低H2O2和MDA的積累，從而保護細胞膜結構的穩定性，最終減輕冷害脅迫對山茶花的傷害，增強其抗冷性。

關鍵詞：山茶;一氧化氮;生理生化;抗寒性

中圖分類號： S685.140.1?文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）20-0142-06

山茶花（Camellia japonica L.）屬山茶科山茶屬，主要分布于我國西南和南部溫暖地區。山茶具有葉色濃綠、常年不凋，花色花型多樣豐富等優點，是我國的十大傳統名花之一，也是世界馳名花卉。目前茶花栽培品種已達萬余個，在英、美、日、意、法等國家都有栽培和培育，成為各國不可或缺的庭院觀賞花木，具有較高的經濟價值。山茶花喜溫暖濕潤氣候，適宜溫度在20～25 ℃之間，在炎熱和寒冷地區其長勢較差，當溫度高于35 ℃則會引起葉片灼傷、花芽分化受阻、落蕾落花，嚴重時甚至導致干枯死亡[1]。雖然山茶大部分品種可耐-8 ℃低溫，淮河以南地區多數可自然越冬，但大多數山茶在北方地區不能安全越冬。因此，耐熱性和耐寒性是其應用推廣的重要基礎研究。目前，山茶耐熱性研究已引起了研究者的重視[2-3]，而耐寒性研究目前主要集中于山茶屬經濟作物茶樹上[4]，因此研究低溫脅迫下山茶的生理生化，提高山茶抗寒性具有重要意義，且對于豐富北方冬季園林景觀具有十分重要的價值。

一氧化氮（nitric oxide）作為易透膜且化學性質活躍的生物小分子，除了參與種子萌發、葉片伸展、根系生長、花芽分化、枝條抽生、花粉管生長、氣孔關閉以及細胞程序性死亡，還廣泛參與非生物脅迫下的信號傳導，在低溫脅迫、干旱脅迫、高溫脅迫、鹽脅迫、重金屬脅迫等非生物脅迫中作為信號分子起著重要作用[5]。外源NO在植物非生物脅迫中的作用已受到植物界的普遍關注，已有研究表明，施用外源NO可提高擬南芥、番茄、小麥、玉米、南瓜等植物的抗寒性[6-9]。隨著研究的深入，發現外源NO可通過上調抗氧化酶基因、Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因（P5CS1）和脯氨酸脫氫酶基因（ProDH）等滲透調節物質相關基因的表達，從而提高抗氧化酶活性以及滲透調節物質含量，減輕低溫脅迫對植物的傷害，并且提高植物抗寒性[8，10-11]。

山茶花品種花鶴翎花型漂亮、樹型美觀、病蟲害少且管理養護較為簡單，喜溫暖環境，其花期可從2月持續至5月，具有園林綠化應用前景;山茶花品種六角大紅為大紅色，基本為完全重瓣型，花期可從12月中下旬持續至4月初，花朵初放至凋謝期間，花瓣始終保持挺拔，無后翻和明顯褪色現象，即使低溫環境下，花瓣邊緣仍保持不焦枯。因此，本試驗針對山茶在我國北方冬季難以安全越冬問題，以花色艷麗、樹形美觀、具有園林綠化開發應用前景的茶花品種花鶴翎和六角大紅為試驗材料，研究外源施加NO對低溫脅迫下山茶生理特性的影響，探討外源NO對提高山茶抗冷性的作用，以期為北方地區山茶花有效防御冬季低溫冷害提供理論依據和技術支撐。

1?材料與方法

1.1?材料和試劑

選用浙江省金華市扦插繁殖2年生花鶴翎和六角大紅茶花，各150株。試驗于2017年4月在上海市農業科學院玻璃溫室和人工氣候箱中進行，晝夜溫度為25 ℃/20 ℃，光周期為12 h/12 h，相對濕度為75%～80%，所有山茶花在玻璃溫室中培養1個月用于后期研究。

試驗使用的NO供體為硝普鈉[Na2Fe（CN）5]，購自于Sigma公司，純度為98.5%，并用蒸餾水配制成5 mmol/L的母液，4 ℃保存，試驗時按所需濃度進行稀釋。

1.2?試驗設計

培養1個月后對2個品種的山茶花進行試驗處理。外源噴施SNP溶液和純水，均為對山茶苗葉片均勻噴霧，直至有水滴落下為止。試驗分為以下處理：（1）T1：噴施100 μmol/L SNP溶液，常溫處理;（2）T2：噴施純水后，0 ℃人工氣候箱低溫處理;（3）T3：噴施處理100 μmol/L SNP溶液，0 ℃人工氣候箱低溫處理。分別處理0、4、8、12、24、48 h時取山茶葉片，擦去葉片表面灰塵，稱質量后放入液氮速凍，- 80 ℃冰箱保存。

1.3?測定指標及測定方法

葉綠素含量測定參照李合生的方法[12];采用蒽酮比色法測定可溶性糖含量[13];采用考馬斯亮藍法測定可溶性蛋白含量[14];采用酸性茚三酮顯色法測定游離脯氨酸（Pro）含量[15];超氧陰離子自由基（O-2·）產生速率測定參照王愛國等的方法[16];采用劉俊等方法測定H2O2含量[17];采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛（MDA）含量[18];采用NBT（氮藍四唑）法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性[19];采用紫外吸收法測定過氧化氫酶（CAT）活性[20];采用愈創木酚法測定過氧化物酶（POD）活性[21]。以上所有指標均重復測定3次。

1.4?數據統計分析

試驗數據用軟件Excel 2010進行統計和SPSS 20.0進行分析，采用Duncan's新復極差法進行多重比較。

2?結果與分析

2.1?外源NO對低溫脅迫下山茶葉片葉綠素含量的影響

葉綠素是綠色植物進行光合作用的主要色素，對光能的吸收、傳遞和轉化起著極其重要的作用，因此葉綠素的含量與組成同植物光合作用有著密切的關系。外源NO處理下，山茶葉片葉綠素含量變化見表1。常溫下，外源SNP處理（T1處理）花鶴翎葉綠素含量不同處理時間之間不顯著，六角大紅在處理后的4 h時含量提高至3.48 mg/g，在12 h時下降至3.25 mg/g，24、48 h時升高至3.34、3.41 mg/g。在低溫脅迫下（T2處理），花鶴翎和六角大紅在4～48 h期間其葉綠素含量均顯著下降。花鶴翎和六角大紅在噴施SNP后，低溫脅迫處理下（T3處理），雖然葉綠素含量在4～48 h期間均顯著降低，但其含量均高于同時期的T2處理。此外，在T2、T3處理下，六角大紅葉綠素含量均高于同時期的花鶴翎。說明施加外源NO能夠增加低溫脅迫下山茶葉片的葉綠素含量，提高光合作用和生長。

2.2?外源NO對低溫脅迫下山茶葉片可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量的影響

可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸是植物細胞器滲透調節作用的重要物質。從表2可見，正常生長下噴施SNP（T1）對2個山茶花葉片的可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量無明顯影響。低溫脅迫下，2個山茶品種在4 h時可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量已顯著提高（P<0.05），且隨著脅迫時間的延長而顯著增加。低溫脅迫下，噴施SNP處理（T3）2個山茶品種的可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量在4～48 h期間顯著增加，且其含量始終高于同時期的低溫處理（T2）。低溫脅迫下（T2、T3處理），六角大紅的可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量始終高于花鶴翎。表明外源NO能提高山茶葉片中可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量，從而提細胞液濃度，降低質膜受凍害的程度，從而緩解低溫對山茶造成的傷害。

2.3?外源NO對低溫脅迫下山茶葉片O-2·生成速率和H2O2、MDA含量的影響

超氧陰離子自由基（O-2·）是分子氧單電子還原產生的陰離子自由基，在植物體內其不斷地產生也不斷被清除，而在逆境脅迫下，則導致其迅速積累[22]。常溫下，O-2·在外源NO處理下，其生成速率在0.37～0.40 nmol/（g·min）間浮動且差異不顯著。低溫脅迫下（T2），花鶴翎和六角大紅的生成速率則在4 h時已分別顯著提高至0.55、0.64 nmol/（g·min）;花鶴翎隨著低溫脅迫時間的延長，在48 h時已達 0.93 nmol/（g·min），而六角大紅則在4～24 h期間保持在0.65 nmol/（g·min）以下，在48 h時僅為 0.70 nmol/（g·min）。T3處理下，花鶴翎和六角大紅的 O-2·生成速率雖然隨著低溫脅迫時間的延長而顯著增加，但在4、12、24、48 h時均顯著低于同時期的T2處理（表3）。表明外源NO處理可減少山茶花葉片中O-2·積累。

低溫脅迫會引發H2O2的大量產生，過量的H2O2得不到及時清除，則會對植物造成毒害作用。丙二醛含量的變化反映著環境脅迫下細胞內氧自由基積累導致的脂膜過氧化程度，其含量越高表明植物受逆境脅迫傷害程度越大。正常生長條件下，花鶴翎和六角大紅在外源NO處理下，H2O2和丙二醛含量雖然分別在0.17～0.23 μmol/g、1.04～1.27 nmol/g之間浮動變化，但其含量始終都顯著處于較低水平，且顯著低于低溫脅迫時的含量。低溫脅迫下，2個山茶品種H2O2、丙二醛含量隨著脅迫時間的延長而顯著增加，在48 h時，花鶴翎和六角大紅的H2O2含量分別達到了0.82、0.70 μmol/g;丙二醛含量分別達到6.11、5.50 nmol/g。外源NO處理（T3）的2個山茶品種雖然變化趨勢和T2處理一致，但在處理期間H2O2和丙二醛含量均低于同時期的T2處理（表4）。表明常溫下外源NO雖然會引起山茶H2O2和丙二醛含量的變化，但并未對其造成傷害;而低溫脅迫下，外源NO處理能有效減少H2O2的大量產生，降低膜脂過氧化程度。

2.4?外源NO對低溫脅迫下山茶葉片抗氧化酶活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）是植物保護酶系統中的重要3種酶，在清除生物自由基上擔負著重要功能。SOD能將O-2·轉化為H2O2，而CAT和POD可將H2O2進一步清除產生H2O，三者協同作用可使自由基維持在一個較低水平，從而避免膜傷害，達到保護細胞的目的。由表5可知，正常生長條件下噴施SNP（T1）提高了山茶的SOD、CAT、POD活性，即使處理達48 h時，花鶴翎的酶活性分別為109.17、99.08、925.33 U/g，六角大紅的酶活性分別為114.18、160.12、952.00 U/g，均顯著高于0 h時的酶活性。2個品種的山茶在低溫脅迫下（T2），SOD、CAT、POD活性都顯著，在48 h時花鶴翎酶活性比0 h相比提高了73.54%、59.12%、52.45%，六角大紅則分別提高了168.77%、192.34%、53.03%。外源NO處理下（T3），SOD、CAT、POD活性隨著低溫脅迫時間的延長而顯著增強，且其活性始終高于同時期的T2處理。說明隨著低溫脅迫時間的延長，山茶細胞內 O-2·和H2O2含量已超出正常水平（表3、表4），觸發了細胞內抗氧化酶活性增強，其活性顯著上升表明低溫脅迫下其清除自由基的能力增強，從而緩解細胞內多余的自由基對細胞的傷害。同時，表明外源NO能有效提高SOD、CAT和POD的活性，以減輕低溫脅迫對山茶的傷害作用。

3?討論

3.1?外源NO對山茶葉片葉綠素含量的影響

植物光合作用中葉綠素在光能吸收、傳遞和轉化過程中起著重要作用，因此葉綠素含量是反映植物光合作用能力的一個間接指標[23]。研究結果表明，葉綠體對低溫敏感性較強，低溫處理下植物葉綠體發生膨脹變形、類囊體片層結構紊亂、葉綠體膜出現內吞現象等，伴隨著葉綠素含量降低，最終導致光合速率下降[24]。外源NO能提高低溫處理下一年生黑麥草[25]、棉花[11]、玉米[26]等植株葉片中葉綠素含量，本試驗的研究結果與之一致。此外，外源NO在鹽脅迫下能維持八寶景天光化學活性[27]，緩解鹽脅迫和高溫脅迫下水稻葉片葉綠素的降解[28]。非生物脅迫下，NO以濃度依賴的方式與活性氧（ROS）清除酶類共同作用應對抗氧化脅迫，或者直接作為抗氧化劑清除ROS[29]。這可能是因為外源NO可提高抗氧化酶活性，清除低溫脅迫產生的部分ROS，促進了低溫脅迫下山茶類囊體膜蛋白復合體的組裝和穩定，緩解了葉綠素的分解，保持葉綠體對光能的吸收和利用，從而促進了光合作用。

3.2?外源NO對山茶葉片可溶性物質含量的影響

植物對低溫脅迫的響應除了基因表達、膜組成變化、激素合成、抗氧化酶活性變化外，大量可溶性物質如可溶性糖、氨基酸、可溶性蛋白等的積累，增加了細胞液滲透壓，提高了細胞吸水和保水能力，避免原生質脫水凝固，從而保護植物細胞免受低溫傷害[30-31]。脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，研究結果表明低溫脅迫下脯氨酸可增加酶穩定性，保護酶活性，減輕質膜損傷，清除羥自由基，從而穩定蛋白質、DNA和細胞膜[32]。高等植物在逆境脅迫下，脯氨酸的積累是一種常見的生理反應。在植物體內，脯氨酸的合成由谷氨酸或鳥氨酸開始，其中谷氨酸合成途徑中，P5CS是該過程的限速酶。近幾十年來，P5CS基因反饋調節在控制植物脯氨酸水平上扮演著重要的角色，脯氨酸含量的變化也影響著植物對逆境脅迫的響應[33-34]。在擬南芥中低溫脅迫可通過NIA1基因的表達促進植物內源NO合成，上調P5CS基因的表達，促進脯氨酸的積累，提高植株的抗寒性。本研究結果表明，外源NO處理后的山茶在低溫脅迫下，其可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量均顯著高于低溫脅迫處理的山茶。王芳等用 0.10 mmol/L SNP處理低溫脅迫下的玉米幼苗，其可溶性蛋白和可溶性糖含量分別增加了19.25%、123.0%，可有效緩解低溫脅迫對玉米幼苗生長的抑制效應[26];杜卓濤等以 0.50 mmol/L SNP處理苦瓜幼苗時也顯著促進了滲透調節物質的合成，提高了低溫脅迫下植株生物量，增加了苦瓜的抗冷性[35]，本研究結果與之一致。說明外源NO可誘導可溶性糖和可溶性蛋白的積累，減輕低溫脅迫對植株造成的傷害，提高植株對低溫的適應性。牟雪姣等的研究結果表明，外源NO能夠提升常溫及低溫脅迫條件下蝴蝶蘭葉片內的滲透調節物質含量[36]，而本研究及楊美森等在棉花上的研究結果[11]則表明，常溫下外源NO處理植株滲透調節物質含量雖有一定量的增加但不顯著，這可能是使用SNP濃度不同或者不同植物對外源NO敏感性不同而引起的，其機理有待進一步研究。

3.3?外源NO對山茶葉片膜脂過氧化和抗氧化酶活性的影響

逆境脅迫下，植物細胞內ROS動態平衡受到破壞，導致O-2·、羥自由基、H2O2等活性氧迅速積累，活性氧能夠與植物體內的蛋白質、DNA和脂類物質反應，最終對植物體造成傷害[37]。MDA則是植物體在衰老或逆境條件下，發生膜脂過氧化作用的最終分解產物，能破壞細胞膜的結構，使細胞內溶物擴散到細胞外，逆境脅迫下會大量積累。SOD、CAT和POD是植物的抗氧化系統重要的保護酶，可保護植物免受活性氧的傷害。NO可通過增加SOD、CAT、POD等抗氧化酶活性來增強細胞抗氧化能力[28，38-39];外源NO在逆境脅迫下可提高植株抗氧化酶活性已在多種植物上得到證實[9，11，26，34]。本研究中，低溫脅迫下?O-2·生成速率加快，MDA和H2O2的含量顯著增加，SOD、CAT和POD的活性明顯增強;外源NO 處理提高了低溫脅迫下山茶SOD、CAT和POD的活性，降低了MDA和H2O2的含量，減緩了O-2·生成速率，緩解了冷害脅迫下膜質過氧化作用對細胞的傷害，提高了山茶的耐冷性，研究結果與南瓜[9]、棉花[11]、玉米[26]、蝴蝶蘭[34]等的研究結果一致。證明外源NO處理確實在一定程度上提高了山茶對低溫脅迫的適應性。低溫脅迫下，導致植物發生一系列的生理生化變化，包括ROS動態平衡也受到破壞[8]，而NO作為信號分子在逆境脅迫下可通過參與不同的過程基因，如信號轉導、防御和細胞死亡、轉運、代謝以及ROS產生和降解相關基因，以促進O-2·轉化成H2O2和O2，并且通過增強H2O2清除酶活性，最終抑制植物的氧化損傷[40-41]。

4?結論

低溫脅迫下，山茶幼苗葉綠素含量顯著降低，超氧陰離子自由基增加，膜脂過氧化程度增加，生長受到顯著影響。外源施加100 μmol/L SNP溶液，在低溫脅迫下顯著增加了可溶性物質含量，提高了抗氧化酶SOD、CAT、POD活性，降低了O-2·產生速率，減少了H2O2和膜脂過氧化物產物的積累，最終有效緩解了低溫脅迫對山茶花造成的傷害，從而增強了其抗寒性。2個品種相比，六角大紅O-2·生成速率、H2O2含量和MDA含量均低于花鶴翎，而其葉綠素、可溶性物質含量、抗氧化酶活性均顯著高于花鶴翎，因此六角大紅的抗寒性優于花鶴翎。外源NO能提高花鶴翎和六角大紅的抗寒性，花鶴翎和六角大紅花期不同、抗寒性不同，將花鶴翎和六角大紅配合栽植，并施以外源NO提高抗寒性，對北方山茶花品種引進以及安全越冬具有一定的指導意義。

除了山茶花具有較高觀賞價值以外，山茶屬植物都具有很高的利用價值，經濟植物茶樹是世界三大無酒精飲料之一;油茶組合紅山茶組種子含油量高;金花茶組種類繁多，是著名觀賞花木，然而這些重要經濟植物喜溫暖濕潤環境，目前主要分布于東亞北回歸線兩側。由于木本植物生長慢、育種周期長，外源NO處理已有效地提高了山茶的抗寒性，深入研究其在山茶屬植物低溫脅迫中的作用，對于擴大山茶屬植物的分布范圍，尤其是其北方分布，對于豐富北方道路、庭院、住宅、景點等花卉品種具有重要意義。

參考文獻：

[1]高繼根. 山茶屬植物主要原種彩色圖集[M]. 杭州：浙江科學技術出版社，2005.

[2]藍?芳，梁雅儀，王曉峰，等. 高溫高濕脅迫對大果山茶生理特性的影響[J]. 湖北農業科學，2017（9）：1678-1682.

[3]彭邵鋒，陸?佳，陳永忠，等. 高溫脅迫下21個山茶種質的生理生化響應[J]. 經濟林研究，2016，34（3）：121-125.

[4]王奎玲. 耐冬山茶種質資源研究[D]. 北京：北京林業大學，2006.

[5]Fancy N N，Bahlmann A K，Loake G J. Nitric oxide function in plant abiotic stress[J]. Plant Cell and Environment，2017，40（4）：462-472.

[6]Sehrawat A，Gupta R，Deswal R. Nitric oxide-cold stress signalling cross-talk，evolution of a novel regulatory mechanism[J]. Proteomics，2013，13（12/13）：1816-1835.

[7]Neill S J，Desikan R，Hancock J T. Nitric oxide signalling in plants[J]. New Phytologist，2003，159（1）：11-35.

[8]Siddiqui M H，Al-Whaibi M H，basalah M O. Role of nitric oxide in tolerance of plants to abiotic stress[J]. Protoplasma，2011，248（3）：447-455.

[9]吳旭紅，呂成敏，馮晶旻. 外源一氧化氮（NO）對低溫脅迫下南瓜幼苗氧化損傷的保護效應[J]. 草業學報，2016，25（12）：161-169.

[10]Zhao M G，Chen L，Zhang L L，et al. Nitric reductase-dependent nitric oxide production is involved in cold acclimation and freezing tolerance in Arabidopsis[J]. Plant Physiology，2009，151（2）：755-767.

[11]楊美森，王雅芳，干秀霞，等. 外源一氧化氮對冷害脅迫下棉花幼苗生長、抗氧化系統和光合特性的影響[J]. 中國農業科學，2012，45（15）：3058-3067.

[12]李合生. 植物生理生化實驗原理和技術[M]. 北京：高等教育出版社，2000：105-263.

[13]Yemm E W，Willis A J. The estimation of carbohydrates in plant extracts by anthrone[J]. Biochemical journal，1954，57（3）：508-514.

[14]Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Analytical Biochemistry，1976，72（1/2）：248-254.

[15]王學奎. 植物生理生化實驗原理和技術[M]. 2版.北京：高等教育出版社，2006：278-279.

[16]Wang A G，Luo G H. Quantitative relation between the reaction of hydroxylamine and superoxide anion radicals in plants[J]. Plant Physiology Communications，1990，26：55-57.

[17]劉?俊，呂?波，徐朗萊. 植物葉片中過氧化氫含量測定方法的改進[J]. 生物化學與生物物理進展，2000（5）：548-551.

[18]張志良，瞿偉菁. 植物生理學實驗指導[M]. 3版.臺北：藝軒圖書出版社，2009：274-276.

[19]Giannopolitis C N，Ries S K. Superoxide dismutases：Ⅰ. Occurrence in higher plants[J]. Plant Physiology，1977，59（2）：309-314.

[20]Aebi H. Catalase in vitro[J]. Methods in Enzymology，1984，105：121-126.

[21]Kong F X，Hu W，Chao S Y，et al. Physiological responses of the lichen Xanthoparmelia mexicana to oxidative stress of SO2[J]. Environmental and Experimental Botany，1999，42（3）：201-209.

[22]李國婧. 超氧陰離子的產生及其在植物體內作用的研究[J]. 生物技術世界，2012（4）：24-25.

[23]Li X G，Meng Q W，Jiang G Q，et al. The susceptibility of cucumber and sweet pepper to chilling under low irradiance is related to energy dissipation and water-water cycle[J]. Photosynthetica，2003，41（2）：259-265.

[24]許?楠，孫廣玉. 低溫鍛煉后桑樹幼苗光合作用和抗氧化酶對冷脅迫的響應[J]. 應用生態學報，2009，20（4）：761-766.

[25]馬向麗，魏小紅，龍瑞軍，等. 外源一氧化氮提高一年生黑麥草抗冷性機制[J]. 生態學報，2005，25（6）：1269-1274.

[26]王?芳，李永生，彭云玲，等. 外源一氧化氮對玉米幼苗抗低溫脅迫的影響[J]. 干旱地區農業研究，2017，35（4）：270-275.

[27]陳志新，陳偉楠，胡增輝，等. 一氧化氮對鹽脅迫下八寶景天葉片生理特性的影響[J]. 北京農學院學報，2018，33（3）：1-6.

[28]Uchida A，Jagendorf A T，Hibino T，et al. Effects of hydrogen peroxide and nitric oxide on both salt and heat stress tolerance in rice[J]. Plant Science，2002，163（3）：515-523.

[29]Arora D，Jain P，Singh N，et al. Mechanisms of nitric oxide crosstalk with reactive oxygen species scavenging enzymes during abiotic stress tolerance in plants[J]. Free Radical Research，2016，50（3）：291-303.

[30]Ma Y，Zhang Y L，Lu J，et al. Roles of plant soluble sugars and their responses to plant cold stress[J]. African Journal of Biotechnology，2009，8（10）：2004-2010.

[31]Knipp G，Honermeier B. Effect of water stress on proline accumulation of genetically modified potatoes （Solanum tuberosum L.） generating fructans[J]. Journal of Plant Physiology，2006，163（4）：392-397.

[32]Sinha S，Kukreja B，Arora P，et al. The omics of cold stress responses in plants[M]//Elucidation of abiotic stress signaling in plants. New York：Springer，2015：143-194.

[33]Armengaud P，Thiery L，Buhot N，et al. Transcriptional regulation of proline biosynthesis in Medicago truncatula reveals developmental and environmental specific features[J]. Physiologia Plantarum，2004，120（3）：442-450.

[34]Chen J B，Wang S M，Jing R L，et al. Cloning the PvP5CS gene from common bean （Phaseolus vulgaris） and its expression patterns under abiotic stresses[J]. Journal of Plant Physiology，2009，166（1）：12-19.

[35]杜卓濤，商?桑，朱白婢，等. 外源NO對低溫脅迫下苦瓜幼苗生長和幾個生理指標的影響[J]. 熱帶作物學報，2016，37（3）：482-487.

[36]牟雪姣，劉理想，孟鵬鵬，等. 外源NO緩解蝴蝶蘭低溫脅迫傷害的生理機制研究[J]. 西北植物學報，2015，35（5）：978-984.

[37]王海波，黃雪梅，張昭其. 植物逆境脅迫中活性氧和鈣信號的關系[J]. 北方園藝，2010（22）：189-194.

[38]Hung K T，Chang C J，Kao C H. Paraquat toxicity is reduced by nitric oxide in rice leaves[J]. Journal of Plant Physiology，2002，159（2）：159-166.

[39]Zhang F，Wang Y，Yang Y，et al. Involvement of hydrogen peroxide and nitric oxide in salt resistance in the calluses from Populus euphratica[J]. Plant，Cell & Environment，2007，30（7）：775-785.

[40]Shi Q，Ding F，Wang X，et al. Exogenous nitric oxide protect cucumber roots against oxidative stress induced by salt stress[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2007，45（8）：542-550.

[41]Zheng C，Jiang D，Liu F，et al. Exogenous nitric oxide improves seed germination in wheat against mitochondrial oxidative damage induced by high salinity[J]. Environmental and Experimental Botany，2009，67（1）：222-227.