6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

陳麗萍，張怡，徐筆奇，賀麗萍，吳長(zhǎng)興，徐明飛，蒼濤

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所 浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021)

番茄是全球栽培最廣、消費(fèi)量最大的蔬菜作物，作為世界最大的生產(chǎn)和消費(fèi)國(guó)之一，番茄在我國(guó)的種植規(guī)模逐年擴(kuò)大[1]。然而，隨著病害的普遍發(fā)生，番茄的生產(chǎn)發(fā)展受到了嚴(yán)重制約。其中，由灰葡萄孢菌(BotrytiscinereaPers.)引起的番茄灰霉病是影響番茄栽培的重要病害之一，可引起爛苗、爛果，嚴(yán)重影響番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)[2-3]。該病害目前已在全國(guó)各地普遍發(fā)生，通常可造成減產(chǎn)20%～40%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)60%以上[4]。由于番茄抗灰霉病品種的缺乏[5]，目前對(duì)該病害的防治仍以化學(xué)防治為主。隨著殺菌劑的連續(xù)大量使用，農(nóng)藥殘留、病原菌抗藥性及環(huán)境污染等問(wèn)題日益凸顯[6]。為延緩病原菌的抗藥性發(fā)展和保證番茄的質(zhì)量安全，急需篩選高效防治番茄灰霉病菌的低風(fēng)險(xiǎn)殺菌劑。

殺菌劑對(duì)病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定和評(píng)價(jià)結(jié)果是篩選高效殺菌劑的重要基礎(chǔ)[7]。本研究通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法，選擇6種用于防治番茄灰霉病的殺菌劑[2，8-9]，測(cè)定其對(duì)番茄灰霉病菌的毒力作用，以期篩選出高效殺菌劑，為科學(xué)指導(dǎo)番茄灰霉病的防治和番茄的安全生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗(yàn)所用的番茄灰霉病原菌來(lái)源于紹興綠島基地番茄病葉，并通過(guò)分離培養(yǎng)獲得。

50%啶酰菌胺水分散粒劑[巴斯夫植物保護(hù)(江蘇)有限公司]；35%腐霉利懸浮劑(南京先達(dá)國(guó)際化工生物科技股份有限公司)；40%嘧霉胺懸浮劑(江西中迅農(nóng)化有限公司)；75%百菌清可濕性粉劑(江西中迅農(nóng)化有限公司)；50%異菌脲可濕性粉劑(蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司)；22.5%啶氧菌酯懸浮劑(美國(guó)杜邦公司)。各供試藥劑用滅菌水配制母液備用。

1.2 方法

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[10]對(duì)供試菌株進(jìn)行藥劑抑制率及室內(nèi)毒力測(cè)定。

1.2.1 含藥培養(yǎng)基配制

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，在無(wú)菌條件下，不同藥劑分別設(shè)Ⅰ～Ⅶ濃度梯度處理，用滅菌水對(duì)各藥劑母液進(jìn)行系列稀釋。各藥劑濃度梯度分別為啶酰菌胺為100、25、6.25、1.562、0.391 mg·L-1；腐霉利為0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.012 mg·L-1；嘧霉胺和百菌清均為100、50、25、12.5、6.25、3.125 mg·L-1；異菌脲為9、3、1、0.33、0.11 mg·L-1；啶氧菌酯為1 000、500、250、125、62.5、31.25 mg·L-1。用移液槍將各濃度藥液分別加入55 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中(1∶10)，充分搖均勻后倒入直徑為90 mm的培養(yǎng)皿中，配制成含系列濃度藥劑的培養(yǎng)基平板。每處理重復(fù)3次，以加入等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基為空白對(duì)照。

1.2.2 接種及結(jié)果調(diào)查

取預(yù)先準(zhǔn)備好的菌絲生長(zhǎng)旺盛的病菌培養(yǎng)物平板，在無(wú)菌條件下，用直徑為4 mm的打孔器從菌落外緣切取菌餅，用接種針接種到含藥培養(yǎng)基平板中央，置于相同光源、25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d(待空白對(duì)照快長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿時(shí))。采用十字交叉法逐一測(cè)定菌落直徑，并記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)各菌落直徑計(jì)算不同濃度藥劑對(duì)番茄灰霉病菌的抑制率，采用Duncan’s新復(fù)極差多重比較法進(jìn)行顯著性差異分析。根據(jù)藥劑濃度和相應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制率，利用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分別計(jì)算各藥劑的毒力回歸方程、EC50值、95%置信限及相關(guān)系數(shù)[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用

如表1所示，6種供試殺菌劑對(duì)番茄灰霉病病菌菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，且抑菌率均隨著藥劑濃度的升高而顯著增加。

表1 6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的抑菌作用

注：括號(hào)內(nèi)容為標(biāo)準(zhǔn)誤；同行無(wú)相同大、小寫(xiě)字母分別表示在0.01和0.05水平差異顯著。

2.2 6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力

如表2所示，6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力差異較大。由EC50值可知，腐霉利的毒力最強(qiáng)，異菌脲的毒力作用次之。根據(jù)95%置信區(qū)間，啶酰菌胺、嘧霉胺和百菌清對(duì)番茄灰霉病菌的毒力作用無(wú)顯著性差異，其EC50值分別為9.27、12.65和12.60 mg·L-1。與其他5種殺菌劑相比，啶氧菌酯對(duì)番茄灰霉病菌的EC50值高達(dá)479.39 mg·L-1，毒力最弱。

表2 6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力

3 小結(jié)與討論

根據(jù)本研究的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果，6種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力作用由高到低排序?yàn)楦估?異菌脲>啶酰菌胺>百菌清>嘧霉胺>啶氧菌酯。二甲酰亞胺類(lèi)殺菌劑(腐霉利和異菌脲)是20世紀(jì)70年代發(fā)展的一類(lèi)保護(hù)性殺菌劑，對(duì)灰霉孢屬病原真菌所致的病害有特效[12]。本研究結(jié)果顯示，二甲酰亞胺類(lèi)殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的抑菌作用最好，該結(jié)果與杜宜新等[13]的測(cè)定結(jié)果基本一致。另外，啶酰菌胺也對(duì)番茄灰霉病菌有較好的抑菌作用，該結(jié)果與大連部分地區(qū)番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定數(shù)據(jù)較為一致[14]。本研究測(cè)得嘧霉胺和百菌清對(duì)番茄灰霉病菌的EC50值分別為12.65和12.60 mg·L-1，毒力作用相近，但杜宜新等[13]測(cè)得嘧霉胺對(duì)番茄灰霉病菌的EC50值高達(dá)48.49 mg·L-1，而百菌清EC50值僅為0.52 mg·L-1，毒力作用相差較大。啶氧菌酯懸浮劑是近年來(lái)我國(guó)登記用于防治番茄病害的殺菌劑，前期研究表明，該藥劑對(duì)番茄灰霉病菌具有較好的毒力作用和防治效果[9，13]，與本研究的試驗(yàn)結(jié)果也不一致，究其原因可能是不同地域的病原菌菌株對(duì)殺菌劑的敏感性存在差異。

灰霉病菌具有繁殖速率高、遺傳變異大、適合度高的特性，連續(xù)使用一種殺菌劑，易使其產(chǎn)生抗藥性。目前國(guó)內(nèi)已監(jiān)測(cè)到番茄灰霉病菌對(duì)多種殺菌劑產(chǎn)生抗藥性[12，15]。有研究認(rèn)為，二甲酰亞胺類(lèi)殺菌劑為特殊位點(diǎn)抑制劑，目標(biāo)真菌的抗性為由單基因控制的質(zhì)量遺傳，且具有穩(wěn)定性，抗性風(fēng)險(xiǎn)高[16]。Zhang等[17]研究表明，啶酰菌胺與二甲酰亞胺類(lèi)殺菌劑無(wú)交互抗性，可用于防治該類(lèi)殺菌劑的抗性菌，但啶酰菌胺存在中度抗性風(fēng)險(xiǎn)，其抗性問(wèn)題也不容小覷[13]。根據(jù)本研究的測(cè)定結(jié)果，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)注意輪換使用對(duì)番茄灰霉病菌抑制效果較好的腐霉利、異菌脲和啶酰菌胺，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長(zhǎng)殺菌劑的使用壽命。

本研究的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果可為田間試驗(yàn)提供理論依據(jù)，然而其他研究顯示室內(nèi)藥劑篩選和田間試驗(yàn)結(jié)果可能有出入[18]。因此，下一步應(yīng)開(kāi)展田間藥效試驗(yàn)，并對(duì)各類(lèi)藥劑的應(yīng)用技術(shù)及殘留動(dòng)態(tài)進(jìn)行研究，結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)綜合分析各藥劑的防效和使用價(jià)值，從而為番茄灰霉病的田間防治提供科學(xué)指導(dǎo)。