妊娠期糖尿病患者脂肪細胞因子與TLR4/MyD88信號通路相關蛋白的關系研究及臨床意義①

郭志利 姚玉英 姚克青 張 梅 于洪斌 苗莉娜 王 茹 尹曉琳

(石家莊醫學高等專科學校微生物學和免疫學教研室,石家莊 050599)

目前，多數學者認為妊娠期糖尿病的進展同糖脂代謝異常變化緊密相關[1]，同時臨床發現由脂肪組織釋放的一系列脂肪細胞因子可對機體代謝活動產生影響，誘發胰島素抵抗[2，3]；妊娠期糖尿病進展和慢性炎癥存在一定關系，其中外周血單核細胞Toll樣受體(TLR)可在多種免疫細胞表達，而活化后的TLRs通路則能將髓樣分化因子88(MyD88)依賴性信號通路激活，使得機體過度釋放促炎因子。TLR4屬于TLRs家族中參與炎癥反應的一種重要受體，其能夠在腫瘤、腸道等多種疾病的炎癥反應中發揮作用，在早期一項有關2型糖尿病小鼠試驗模型的研究發現，其在小鼠體內高水平表達[4]。目前，臨床尚無有關脂肪細胞因子與TLR4/MyD88信號通路在妊娠期糖尿病關系的研究。本研究旨在探討妊娠期糖尿病患者脂肪細胞因子與TLR4/MyD88信號通路的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年2月至2017年12月于中國人民解放軍白求恩國際和平醫院診斷治療的妊娠期糖尿病患者，共計79例為研究對象，所有入組患者均符合國際糖尿病與妊娠關系研究協會制定的有關該病的診斷標準[5]。年齡20～30歲，平均年齡(28.11±1.31)歲；平均體質量指數(27.32±3.20)kg/m2；孕周24～28周，平均孕周(27.29±0.58)周。

1.2標本采集與檢測方法 采集所有入組人員晨起空腹肘部靜脈血5 ml，3 500 r/min離心5 min，分離血清后保存血液標本于-20℃環境以備檢測。采用流式細胞儀[富魯達(上海)儀器科技有限公司]測定并分析兩組入組人員TLR4/MyD88信號通路相關蛋白[TLR4、MyD88、腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF-6)、核因子κB(NF-κB)、白細胞介素1β(IL-1β)]水平變化，其中抗體分別為TLR4抗體、MyD88抗體、TRAF-6抗體、NF-κB抗體、IL-1β抗體。采用積分光密度(IOD)值確定上述指標陽性表達的強弱，N_101B型雙目生物顯微鏡(寧波永新光學股份有限公司)進行圖像采集，Image Pro Plus4.5 圖像分析軟件進行圖像分析。

1.3統計學方法 使用SPSS20.0軟件對研究數據進行統計學分析，采用Pearson法分析觀察組患者脂肪細胞因子與TLR4/MyD88信號通路相關蛋白(TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、IL-1β)相關性；同時采用回歸分析TLR4/MyD88信號通路相關蛋白與糖代謝情況的關系。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1觀察組患者糖代謝情況對脂肪細胞因子和TLR4/MyD88信號通路相關蛋白表達相關性分析 經Pearson法分析，結果顯示內脂素與MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相關(r=0.348、0.479、0.137、0.069、0.225，P<0.05)；脂聯素與MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平分別呈負相關(r=-0.317、-1.21、-0.24、-1.88、-1.33，P<0.05)；IL-6與MyD88、TLR4以及IL-1β水平分別呈正相關(r=0.712、0.612、0.254，P<0.05)，與TRAF-6、NF-κB水平分別呈現負相關(r=-0.553、-0.015，P<0.05)；TNF-α與MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相關(r=0.564、0.598、0.284、0.447、0.601，P<0.05)，FBG、PBG、HOMA-IR分別與MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相關(P<0.05)。

2.2觀察組患者TLR4/MyD88信號通路相關蛋白與糖代謝回歸分析 TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、IL-1β均與FBG、PBG以及HOMA-IR相關聯(P<0.05)。見表1。

3 討論

MyD88屬于一種可溶性蛋白，亦屬于機體細胞內含有TLR結構域的銜接蛋白之一，其能夠在炎癥反應中發揮明顯作用，并可較好傳輸機體炎癥通路中的信號，同時能夠在先天性或獲得性免疫應答反應中起關鍵作用，且TLR信號通路的傳導亦離不開該蛋白因子的參與。當相關因子處于非激活狀態時，MyD88-Toll相關蛋白復合物可較好同MyD88下游激酶IRAK相結合。目前，臨床研究發現，TLR2、TLR4、TLR7、TLR8以及TLR9的信號轉導均離不開上述途徑，其中TLR4在TLRs家族中發揮重要作用，并能在其介導的炎癥信號通路中起到明顯的開關作用，而MyD88屬于TLR4介導的炎癥通路中的下游效應分子，聯合機體內其他信號通路共同作用，使得IL-6、TNF-α等炎癥相關基因發生轉錄，并形成炎癥反應級聯放大[6]。TLR4信號可傳遞至MyD88，并且通過MyD88依賴信號轉導途徑更加刺激內皮細胞中的NF-κB和絲裂原活化的蛋白激酶信號轉導級聯，導致進入胞核內的活化NF-κB啟動核內相關基因轉錄，最終引發脂肪細胞因子水平異常表達。有研究指出[7]，TLR4/MyD88同卵巢癌的發生發展密切相關，該通路能夠參與機體局部慢性炎癥反應，導致該通路中的促炎、抗炎因子水平失衡，進一步導致疾病進展。本研究經Pearson法分析，結果顯示脂肪細胞因子和TLR4/MyD88信號通路相關蛋白表達具有相關性。說明TLR4/MyD88通路參與妊娠期糖尿病的發生發展過程，且脂肪細胞因子與該通路中的相關蛋白水平變化具有密切關系。但本研究納入樣本數量少，有關TLR4/MyD88通路在妊娠期糖尿病中的確切影響機制有待后續大規模多中心的深入研究。

表1 TLR4/MyD88信號通路相關蛋白與糖代謝回歸分析Tab.1 Regression analysis of protein and sugar in TLR4/MyD88 signal pathway

綜上所述，妊娠期糖尿病的進展不僅與機體分泌的脂肪細胞因子存在一定關聯，亦同MyD88/TLR4通路關系密切，而明確病因有助于臨床治療效果的提高。