重慶地區山羊化膿隱秘桿菌肺炎感染的調查研究

張素輝，沈克飛，許國洋，徐登峰，張成剛，付利芝

（重慶市畜牧科學院，重慶 榮昌 402460）

近年來，重慶地區山羊產業發展迅速，已成為助推農民脫貧致富的重要產業之一。然而，由于地方山羊養殖規模與技術水平參差不齊，山羊相關疫病對產業的影響日益明顯，其中以山羊化膿性感染尤其嚴重，幾乎遍布于所有羊場。山羊化膿性感染是由化膿菌（Pyogenic bacteria）感染羊受損的皮膚或黏膜而引起的一種傳染性疾病，常為多種病原菌混合感染[1]，表現為體表膿腫和臟器膿腫。其中，尤以化膿隱秘桿菌引起的山羊化膿性肺炎對山羊產業的危害嚴重。

鑒于化膿隱秘桿菌肺炎的廣泛流行[2]，本研究運用實驗室現有的分子診斷方法[3]和血清學診斷方法[4]對山羊化膿隱秘桿菌病的流行情況進行調查，并分析發病原因，為有效控制該病提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 病料的采集 2019年1～10月間，為解決大足、武隆、長壽3個區縣3家山羊養殖場因呼吸道疾病導致羔羊存活率低下的問題，研究人員固定跟蹤3家養殖場的羊群，針對病死羔羊進行解剖，快速采集胸腔內整個肺臟組織，冷藏保存，直接送往實驗室進行后續處理。

1.2 細菌的分離培養 將采集的肺臟組織在鄰近病變部位處直接劃開，無菌條件下劃線接種在含10%小牛血清的TSA瓊脂培養基上，37 ℃培養48～72 h后，進行細菌的純化培養、染色鏡檢[5]。

1.3 細菌的PCR檢測 挑取分離菌純培養物的單個菌落接種至含10%小牛血清的TSB 肉湯培養基中，37 ℃120 r/min振蕩培養24～48 h。采用OMEGA Bacterial DNA Kit試劑盒提取細菌基因組，運用針對化膿隱秘桿菌PLO毒力基因設計的引物（上游引物為5′-TTGATAACGGTCCACCACGG-3′，下游引物為5′-CACTGCCACGACCTACAAGT-3′）進行PCR檢測。

1.4 感染性抗體的檢測 參考本實驗室2018年申請的專利“一種山羊化膿隱秘桿菌感染檢測試劑盒及其檢測方法”[4]進行化膿隱秘桿菌感染性抗體的檢測。

2 結果

2.1 感染情況統計結果 2019年1～10月期間，共采集肺炎病羊20 份肺臟組織進行了化膿隱秘桿菌病原感染的診斷分析，結果見表1。

表1 3家羊場化膿隱秘桿菌肺炎的感染情況

從表1 可見，3 家羊場的羊群感染化膿隱秘桿菌的情況均較嚴重，尤以長壽區的羊場最為嚴重，化膿隱秘桿菌分離率達42.9%。

2.2 細菌分離鑒定結果 通過對病料直接觸片染色鏡檢和常規細菌分離培養，結果共分離到6株化膿隱秘桿菌，分離率為30%。

圖1 化膿隱秘桿菌PLO毒力基因PCR檢測結果

使用化膿隱秘桿菌PLO 特異性引物對分離菌株進行PCR擴增，均能擴增出264 bp的目的片段（圖1），測序后在GenBank上進行比對，與化膿隱秘桿菌CP012649的相似性大于99%。

2.3 感染性抗體檢測結果 對長壽區確診為化膿隱秘桿菌感染的某羊場進行抽樣檢測，共采集血清100份，經間接ELISA方法檢測，得到血清化膿隱秘桿菌抗體陽性樣本31份，說明該場山羊化膿隱秘桿菌的陽性感染率達31%。

3 討論

3.1 山羊化膿隱秘桿菌的危害 化膿隱秘桿菌屬于一種條件致病菌，主要寄生在動物上呼吸道、消化道、生殖道等黏膜上，常導致牛、羊、豬等多種動物的化膿性肺炎、肝膿腫、乳腺炎、子宮內膜炎、流產和死胎等疾病[6-8]。本次從有呼吸道癥狀的病死山羊的肺臟（圖2）、炎性淋巴結（圖3）、膿腫牙齦（圖4）等病灶中均分離到了化膿隱秘桿菌，并明確了其在山羊化膿性病例中的致病性。

圖2 化膿性肺炎：胸腔充滿膿性渾濁積液、肺臟有出血性黏膿性病變

圖3 淋巴結炎：髖部淋巴結腫大化膿

圖4 牙齦膿腫：牙齦根部組織潰爛，蓄積大量膿液

3.2 化膿隱秘桿菌病的流行原因 本次調查顯示，化膿隱秘桿菌病占呼吸道疾病的比例為20%～42.9%，證實該病已經成為山羊呼吸道疾病的重要病原，廣泛存在于當地羊群中。其中尤以長壽羊場化膿隱秘桿菌血清抗體陽性的比例最大，這與其養殖方式密切相關。該場采取散養不補飼的饑餓式飼養方式，一天只放牧一次，持續時間約為3 h，羊群缺乏營養，機體抵抗力較弱，一旦遇上氣溫驟降等外界因素變化，羊群就容易發病，故化膿隱秘桿菌感染率較高。大足羊場采取全舍飼養殖方式，武隆羊場采取舍飼加放牧的養殖方式，企業管理均較規范，營養供給較均衡，但后續調查羊舍消毒效果時發現其圈舍消毒程序還需改進，故這兩家養殖場仍存在化膿隱秘桿菌感染。

3.3 山羊化膿隱秘桿菌病的防治 化膿隱秘桿菌為條件性致病菌，多在不良誘因存在的情況下導致羊群發病，故養殖過程中應注意羊群的防寒保暖，保持圈舍清潔、干燥和良好通風，保證羊群充足的營養需求，尤其要為羔羊提供優質飼草，發現病羊及時隔離治療或處置，并對羊舍進行嚴密消毒。

山羊感染化膿隱秘桿菌后主要表現為漸進性消瘦、咳喘、流鼻液等臨床癥狀，病理組織學變化為化膿性炎癥［9］。如果養殖過程中未及時觀察到病羊，隨著病程延長，就會造成肺臟組織不可逆損傷，即使后期大量用藥羊只也依然死亡。故在山羊養殖過程中，必須仔細觀察羊群精神狀態、采食狀態，有無流鼻液、有無咳喘，盡量做到早發現、早治療。重慶地區的山羊化膿隱秘桿菌對頭孢菌素、桿菌肽、阿奇霉素、恩諾沙星、氟苯尼考、慶大霉素、卡那霉素等藥物敏感[5]，可選用以上藥物及早治療。

目前，針對化膿隱秘桿菌病的防控策略強調“早發現、早治療”，故在后期需要加強化膿隱秘桿菌病診斷試劑的研制，為盡早確診提供有效產品。同時，鑒于該病嚴重影響羔羊的存活率，故應加快化膿隱秘桿菌病有效疫苗的研發，為防控該病提供有效產品。