MEK通路抑制劑對人胰腺癌細胞生長及細胞周期相關抑癌基因表達

吳小紅

（宜興市人民醫院，江蘇 宜興 214200）

胰腺癌是臨床常見惡性腫瘤病癥，近年來隨著國民生活方式的轉變和生活節奏的加快，國內胰腺癌發病率呈不斷升高趨勢[1]。胰腺癌患者病情隱匿，缺乏典型癥狀，大多數病例在發病時病情已發展成晚期，生存率較低[2]。本文就細胞外信號調節激酶信號通路（MEK）抑制劑對人胰腺癌細胞生長及細胞周期相關抑癌基因表達的影響，旨在為胰腺癌的臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

中科院上海細胞生物學研究所提供的人胰腺癌PANC1、CFPAC1細胞系；美國Sigma公司提供的MEK通路抑制劑PD98059、DMSO；BIOBASE酶標儀；賽默飛Attune NxT流式細胞儀；BiO-Rad公司提供的無血清RPMI1640培養基；BIO-RAD TC20自動細胞計數器。

1.2 方法

通過培養人胰腺癌PANC1、CFPAC1細胞系，用MEK通路抑制劑PD98059處理（加入濃度50 μmol/LPD98059）作為A組，用DMSO處理（加入濃度50 μmol/LDMSO）作為B組。培養后1/3/6 d隨機取三孔，使用細胞計數器完成細胞數檢測。取對數生長期細胞，使用培養基培養24 h以同步化，比較兩組干預24 h后的細胞周期，收集兩組細胞，制作為單細胞懸液，取2 ml懸液，固定處理后去乙醇后孵育，染色后使用流式細胞儀檢測細胞周期，重復3次。取干預24 h的兩組細胞，使用Trizol法完成細胞總RNA提取，逆轉錄為cDNA，使用實時熒光定量PCR測定p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表達。

1.3 統計學方法

將數據錄至SPSS 23.0，以x2檢驗定性資料（%、n），以t檢驗定量資料±s，P小于0.05，提示有差異。

2 結 果

2.1 人胰腺癌細胞的生長抑制情況

根據檢測結果可知兩組使用的藥物對人胰腺癌細胞的生長抑制效果，不同細胞系的細胞數如下，PANC1：1 d：A組為（17.37±3.83）×105/ml，B組為（16.42±3.17）×105/ml，t=1.351，P=0.090；3 d：A組為（1 8.4 7±2.3 8）×1 0 5/m l，B組為（25.53±2.29）×105/ml，t=15.115，P=0.000；6 d：A組為（1 9.3 6±2.2 9）×1 0 5/m l，B組為（63.16±6.13）×105/ml，t=47.329，P=0.000。CFPAC1：1 d：A組為（18.50±3.22）×105/ml，B組為（20.02±2.23）×105/ml，t=2.744，P=0.004；3 d：A組為（2 5.5 2±3.2 4）×1 0 5/m l，B組為（42.53±3.15）×105/ml，t=26.617，P=0.000；6 d：A組為（4 1.5 3±3.7 2）×1 0 5/m l，B組為（120.54±8.69）×105/ml，t=59.103，P=0.000。

2.2 胰腺癌細胞周期分布對比

不同細胞系的細胞周期分布如下：PANC1：G0/G1期：A組為（72.49±1.57）%，B組為（56.53±1.69）%，t=48.924，P=0.000；S期：A組為（5.14±1.10）%，B組為（14.32±1.31）%，t=37.947，P=0.000；G2/M期：A組為（24.83±3.38）%，B組為（25.16±1.42）%，t=0.636，P=0.263。CFPAC1：G0/G1期：A組為（80.25±1.63）%，B組為（68.22±1.74）%，t=35.678，P=0.000；S期：A組為（6.93±1.16）%，B組為（13.47±1.32）%，t=26.316，P=0.000；G2/M期：A組為（13.26±3.24）%，B組為（14.01±1.34）%，t=1.513，P=0.067。

2.3 A組經MEK通路抑制劑干預后抑癌基因mRNA表達變化

根據檢測結果可知A組不同細胞系經MEK通路抑制劑干預后抑癌基因mRNA表達：PANC1：p16INK4amRNA表達為（5.3 2±0.4 3），P 2 1 WA F l m R N A表達為（3.12±0.34），P27K1PlmRNA表達為（4.21±0.29）；CFPAC1：p16INK4amRNA表達為（5.52±0.48），P21WAFlmRNA表達為（4.51±0.32），P27K1PlmRNA表達為（3.42±0.23）。

3 討 論

胰腺癌中的RAS基因突變率較高，約為70～90%，可導致MEK轉導異常，激活癌基因，造成抑癌基因失活。隨著醫學技術的不斷發展，抑制MEK信號通路成為了抗腫瘤的靶點之一[3]。本次研究結果顯示，用藥1 d后，兩組PANC1、CFPAC1細胞系的細胞數比較無明顯差異，用藥3 d、6 d后，A組上述細胞系的細胞數低于B組，說明A組采用的MEK通路抑制劑PD98059能夠有效抑制人胰腺癌細胞生長、增殖。且A組PANC1、CFPAC1細胞系的G0/G1期細胞比例高于B組，S期細胞數比例低于B組，兩組G2/M期細胞比例比較無明顯差異，表明經過MEK通路抑制劑干預后，PANC1、CFPAC1細胞系的G0/G1期細胞比例明顯上升，S其細胞數比例下降，可抑制細胞周期進展。分析后可知，PD98059作為一種MEK抑制劑，對人體ATP并無明顯影響，抗腫瘤效果確切，可通過抑制人胰腺癌細胞系CFPAC1、PANC1生長，阻礙癌細胞由低分化期向高分化期轉化，達到抑制胰腺癌細胞生長、增殖、控制病情進展的干預目標。結合本次研究結果發現，A組經PD98059干預后，CFPAC1、PANC1細胞P21WAFl、P27K1Pl、p16INK4amRNA表達水平顯著上升，提示MEK通路抑制劑PD98059可能通過上調細胞周期相關抑癌基因表達水平，影響胰腺癌細胞生長、周期進展。

綜上所述，與MEK通路抑制劑DMSO相比較，PD98059可能通過上調細胞周期相關抑癌基因表達水平，阻礙病情進展。