阿奇霉素聯合孟魯司特鈉對肺炎支原體肺炎兒童NOD樣受體蛋白-3炎癥小體通路的影響

段瑞強，李長青

（河南省新鄭市人民醫院 兒科，河南 鄭州 451100）

肺炎支原體肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia，MPP）發病比較復雜，與肺泡上皮細胞損傷或免疫炎癥反應存在一定的聯系，而NOD 樣受體蛋白 -3 （NOD-like receptor pyrin domain 3，NLRP3）炎癥小體是免疫炎癥反應領域的研究熱點［1］。目前該病臨床上主要采用大環內酯類抗生素治療，其中阿奇霉素為臨床大部分醫院首選抗生素，但單獨使用療程較長，癥狀改善緩慢［2］。而孟魯司特鈉為一種白三烯受體拮抗劑，能有效改善患兒的臨床癥狀［3］。本研究主要探討阿奇霉素聯合孟魯司特鈉對肺炎支原體肺炎兒童NLRP3炎癥小體通路的影響，為臨床治療提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017 年1 月至2019 年 1 月在本院接受治療的108 例肺炎支原體肺炎患兒作為研究對象。均符合臨床診斷標準［4］，均無先天性免疫功能缺陷和腫瘤疾病，近期未使用過激素治療；排除精神障礙患兒以及其他感染的患兒。所有患兒按照隨機數字表法分成兩組，對照組54 例，男32 例，女 22 例；年齡 3～12 歲，平均（7.25±1.27）歲；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。觀察組 54 例，男 32 例，女 22 例；年齡 3～12 歲，平均（7.25±1.27）歲；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。兩組患兒的性別、年齡、病程等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經院倫理委員會批準，所有患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

兩組均給予吸氧、化痰、止咳和抗感染治療，在此基礎上，對照組患兒采用注射用阿奇霉素（東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司，批號：H20000426）治療，10 mg/（kg·d），加 5% 葡萄糖125～250 mL 靜脈滴注，持續5 d。癥狀改善后，口服阿奇霉素干混懸劑（輝瑞制藥有限公司，國藥準字：H10960112），10 mg/（kg·d），3 d 后，停用 4 d，持續治療3 周。在此基礎上，觀察組加用孟魯司特鈉（魯南貝特制藥有限公司，批號：H20080340），1 次/d，≥6 歲的患兒 5 mg/次，＜6 歲的患兒 4 mg/次，治療3 周。

1.3 臨床療效

①顯效：發熱咳嗽等完全緩解，胸部X 線片及血常規指標完全正常；②有效：患兒癥狀、體征明顯改善，胸部X 線片及血常規指標好轉；③無效：上述癥狀、體征及檢查指標均無明顯好轉或惡化。總有效率=（顯效例數+有效例數）/總例數×100%。

1.4 樣本的采集及檢測

抽取空腹靜脈血10 mL 分裝乙二胺四乙酸抗凝管和非抗凝管。抗凝管肝素抗凝，加入人淋巴細胞分離液，2 000 rpm 離心15 min，分離外周血單個核細胞 （peripheral blood mononuclear cell，PBMC）。非抗凝管3 500 rpm 離心15 min，分離血清，酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA） 法測定白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18 水平。

1.5 實時定量聚合酶鏈式反應測定NLRP3、凋亡相關斑點樣蛋白、Caspase-1 mRNA水平

采用Trizol 試劑提取PBMC 總RNA，測定純度。按照逆轉錄試劑盒說明將總RNA 合成cDNA采用LightCycler 96 實時熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR） 儀 （Roche Diagnostics 公司，德國）進行基因擴增，引物序列由上海英駿公司提供。NLRP3 上游序列：5′-ACAGGCAATGCGTATCGTGA-3′，下游序列：5′-AAACCTAAACCAAAGGATCGGA-3′，產物 330 bp；ASC 上游序列：5′-TTACGGCTCGCACAGACAC-3′，下游序列：5′-TAGAGTGCTAGCAACGGCTTG-3′，產 物 141 bp； Caspase-1 上 游 序 列 ： 5′ -TCTAAAATCTCGCACGGGCA-3′，下游序列：5′-GACTCAACACAGCAACCAGC-3′，產物 182 bp；βactin 上游序列：5′-TCTTCTTCTGCAACTGGCG-3′，下 游 序 列 ： 5′-GACTGGGGTATCCAAGTGGG-3′，產物231 bp。采用相對定量2-△△Ct 法比較目的基因相對表達水平。

1.6 統計學方法

采用SPSS 17.0 軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗，臨床療效采用秩和檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床療效比較

觀察組總有效率為96.30%，優于對照組的83.33%，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組臨床療效比較

2.2 兩組IL-1β、IL-18水平比較

與治療前比較，兩組IL-1β、IL-18 水平均明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05）。治療后觀察組IL-1β、IL-18 水平均明顯低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平比較

與治療前比較，兩組NLRP3、凋亡相關斑點樣 蛋 白 （apoptosis-associated speck-like protein，ASC）、Caspase-1 水平均明顯下降，差異有統計學意義 （P＜0.05）。治療后觀察組 NLRP3、ASC、Caspase-1 水平均明顯低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組治療前后IL-1β、IL-18 水平比較 （，pg/mL）

表2 兩組治療前后IL-1β、IL-18 水平比較 （，pg/mL）

注：?與治療前比較，P＜0.01。

組別對照組觀察組t值P值IL-1β IL-18治療后128.28±16.57?101.48±15.29?8.735 0.000例數54 54治療前6.52±1.26 6.49±1.35 0.119 0.905治療后3.49±1.07?2.68±1.02?4.026 0.000治療前172.46±18.59 174.58±17.95 0.603 0.548

表3 兩組治療前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比較 （）

表3 兩組治療前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比較 （）

注：?與治療前比較，P＜0.01。

組別對照組觀察組t值P值ASC治療后1.53±0.15?1.32±0.11?8.296 0.000例數54 54 NLRP3治療前2.02±0.18 2.05±0.16 0.915 0.362治療后1.78±0.15?1.59±0.13?5.959 0.000治療前1.72±0.17 1.75±0.18 0.890 0.375治療后1.52±0.13?1.38±0.14?5.385 0.000 Caspase-1治療前1.89±0.16 1.87±0.15 0.252 0.504

2.4 不良反應

兩組患者治療后均未出現明顯的不良反應。

3 討論

MPP 是兒童常見臨床疾病，臨床上主要采用大環內酯類抗生素治療，最為廣泛的為阿奇霉素，該藥化學結構穩定，抗菌效果明顯，無明顯的副作用［5］。但單獨使用阿奇霉素對患兒的炎癥反應以及免疫機能的修復效果不明顯。而孟魯司特鈉可以拮抗白三烯受體，降低白三烯水平，并達到緩解機體的炎癥反應，緩解患兒的臨床癥狀。本研究中，觀察組采用阿奇霉素聯合孟魯司特鈉治療肺炎支原體肺炎，臨床療效明顯優于對照組，與既往研究結果一致［6］。

有文獻顯示，MPP 的發生與細胞的炎性反應存在一定的聯系，當MPP 發生時易誘發全身性炎性反應，并對機體造成損傷，促進機體免疫細胞分泌并釋放多種炎癥因子，加重機體的損傷［7］。IL-1β 來源于單核巨噬細胞，為一種前炎性因子，而激活的IL-1β 能誘導其他炎癥因子的表達，協同其他因子共同參與炎癥的發生和進展［8］。而IL-18來源于單核巨噬細胞和樹突狀細胞，IL-18 前體在IL-1β 的作用下，形成有活性的IL-18，參與MPP病理過程［9］。本研究中，患兒接受相應的治療后，觀察組患兒的IL-1β、IL-18 下降幅度明顯優于對照組，提示阿奇霉素聯合孟魯司特鈉能有效調節炎癥因子水平，發揮抗感染效果。

有研究顯示，MPP 的發生與過量的宿主免疫反應有關，固有免疫可以有效抵御病原微生物入侵，并通過活化下游信號通路，誘發免疫應答和炎癥反應［10］。NLRP3 為 NOD 樣受體家族成員，易被活性氧等因素活化。因此，MPP 發生后，氧自由基水平的增加是激活NLRP3 的重要途徑，并募集pro-caspase-1 和ASC 共同組建大分子蛋白復合體，即NLRP3 炎癥小體。NLRP3 炎癥小體被活化后，可調節Caspase-1 活化，并剪切IL-1β 前體，激活IL-1β 成熟和分泌，IL-1β 作為促炎因子誘導大量炎癥因子釋放［11］。本研究中，觀察組NLRP3、ASC、Caspase-1 水平明顯低于對照組，說明阿奇霉素聯合孟魯司特鈉對肺炎支原體肺炎兒童具有保護作用。

綜上所述，阿奇霉素聯合孟魯司特鈉治療兒童肺炎支原體肺炎臨床效果明顯，其機制可能與其調節者NLRP3、ASC、Caspase-1 炎性體基因的表達有關，但具體機制有待進一步研究。