高效液相色譜法在肺結核患者利福平血藥濃度監測中的應用

邵海峰

(商水縣疾病預防控制中心，河南 周口 466100)

肺結核屬臨床常見嚴重慢性傳染性疾病，由結核分歧桿菌感染引起，可侵及機體多個臟器，多與患者免疫能力下降、細胞變態反應升高有關[1]。利福平是臨床治療肺結核的一線藥物，屬廣譜抗生素藥物，具有較強抗菌活性，可有效抑制致病菌RNA合成，阻斷其轉錄過程，影響DNA及蛋白合成。但患者服藥后血藥濃度個體差異較大，部分患者可因血藥濃度過低而影響治療效果，長期服藥后還可導致肝功能損傷、藥物半衰期縮短等不良影響，且易產生較高耐藥性[2]。因此，加強利福平血藥濃度監測，是保證臨床安全、合理用藥的關鍵。本研究選取商水縣疾病預防控制中心收治的127例肺結核患者，旨在分析高效液相色譜法在肺結核患者利福平血藥濃度監測中的應用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究經醫院醫學倫理委員會審批通過。選取2018年5月至2019年5月商水縣疾病預防控制中心收治的127例肺結核患者，其中男65例，女62例；年齡23～64歲，平均(44.38±9.58)歲。

1.2 納入及排除標準納入標準：(1)經影像學檢查、實驗室指標測定確診為肺結核；(2)痰菌檢查結果為陽性；(3)胸部X片結果顯示病變呈進展或空洞增大趨勢；(4)對本研究知情并簽署同意書。排除標準：(1)存在藥物使用禁忌證；(2)血液類疾?。?3)精神類疾??；(4)認知功能障礙；(5)妊娠、哺乳期女性；(6)肝腎功能異常；(7)代謝、內分泌、循環系統疾病。

1.3 測定方法

1.3.1治療方案 口服利福平(成都奧邦藥業有限公司，國藥準字H51020707，規格：0.15 g)實施聯合化療，晨起給藥，每日0.45 g。

1.3.2利福平血藥濃度線性關系測定 采用高效液相色譜柱(安捷倫，Symmetry C18)進行分析，選擇甲醇、乙腈、磷酸二氫鉀(30∶30∶40)為流動相，設置流速為1 mL·min-1，柱溫為40 ℃，檢測波長為340 nm，進樣體積為20 μL；精密吸取利福平對照品適量，加入到空白血漿，分別配制成1 mL血漿藥物濃度為0.3、0.5、2.4、5、10、15、20、25、30 μg·mL-1的樣品溶液，加入磷酸二氫鈉緩沖液10 mL，乙酸乙酯2 mL，漩渦混合2 min，以2 300 r·min-1轉速離心5 min，取上清液，采用0.45 μm濾膜過濾后取樣至進樣器小瓶進樣檢測，觀察色譜圖，作線性回歸方程，分析利福平血藥濃度線性范圍內與峰面積線性關系。

1.3.3患者血藥濃度測定 儀器及參數設定同1.3.2，于第5天給藥后8 h采用真空抗凝管采集血樣約2 mL，以3 000 r·min-1轉速離心15 min，取上層血漿300 μL，加入甲醇溶液0.5 mL，漩渦混合10 min，以3 000 r·min-1轉速離心15 min，取20 μL上層清液進樣檢測。

1.4 觀察指標(1)利福平血藥濃度線性范圍。(2)患者服藥5 d后利福平血藥濃度。

2 結果

2.1 利福平血藥濃度線性關系采用高效液相色譜法測定利福平血藥濃度線性范圍為0.3～30 μg·mL-1，根據線性回歸方程分析，血漿中利福平在0.3～30 μg·mL-1范圍內時，血藥濃度與峰面積線性關系良好(r=0.994 1)。

2.2 服藥5 d后利福平血藥濃度高效液相色譜法檢測結果顯示，127例肺結核患者中，血藥濃度0.3～0.5 μg·mL-19例，0.5～30 μg·mL-1117例，僅1例患者因血藥濃度<0.3 μg·mL-1未經高效液相色譜法測出，高效液相色譜法檢測有效率為99.21%(126/127)。

3 討論

肺結核主要通過呼吸道傳播，易出現低熱、乏力、咳嗽、咯血等臨床癥狀，嚴重威脅患者生命安全。

利福平是臨床治療肺結核的一線用藥，屬利福霉素類抗菌藥物，可有效殺滅結核分歧桿菌，且口服吸收較好，可于2 h左右達到血藥濃度峰值。由于個體差異較大，患者服藥后血藥濃度易受影響，長期服藥后可使藥物半衰期縮短，血藥濃度下降，還可產生耐藥性、肝功能損傷等毒副作用，影響治療效果。學者認為，應加強利福平血藥濃度監測，實現服藥劑量個性化，優化并縮短療程對肺結核患者的治療具有重要意義[3]。本研究采用高效液相色譜法對肺結核患者進行利福平血藥濃度測定，所用色譜柱可在乙腈-磷酸鹽體系中準確分離并分析利福平濃度，將檢測波長設置為利福平特征吸收波長，可有效避免溶劑峰對利福平濃度分析造成影響，且對溶劑無干擾作用。利福平為一種弱酸，在酸性環境下穩定性較高，在流動相配制及樣品提取中應采用緩沖液將流動相調節至弱酸性，既往多以乙腈作為流動相，可使利福平保持最佳穩定性，但價格較昂貴。本研究所用流動相為甲醇、乙腈、磷酸二氫鉀混合溶液，比例性質較穩定，且具有良好分離效果，經濟實用，長久放置后其質量及濃度不易發生變化[4]。本研究所建立的高效液相色譜血藥濃度線性范圍為0.3～30 μg·mL-1，結果顯示，在此范圍內血藥濃度與峰面積線性關系良好(r=0.994 1)，126例肺結核患者可通過高效液相色譜法檢測其血藥濃度，有效率為99.21%。這說明借助高效液相色譜法可實現肺結核患者利福平血藥濃度監測，及時發現個體差異引起的血藥濃度偏離，采取有效解決方案，為實現個體化治療提供數據支持。患者血藥濃度偏低則表示劑量不足，血藥濃度低、代謝快均是導致耐藥性發生的主要原因，通過血藥濃度監測有利于及時對患者實施足量給藥，減少耐藥性發生；其次血藥濃度過高可嚴重影響患者肝功能，根據血藥濃度監測結果及時減少用藥劑量，可有效避免毒副作用發生。通過高效液相色譜法對肺結核患者利福平血藥濃度進行監測，可為臨床安全合理用藥及不良反應監測提供參考依據，對臨床治療具有重要指導意義[5]。

綜上，采用高效液相色譜法可準確測定肺結核患者服用利福平治療期間血藥濃度，且操作簡便、快速，適用于肺結核患者治療監測，對臨床安全、合理用藥具有重要指導意義。