宮頸癌組織中Ep-CAM和Ki67的表達及臨床意義

周 靜,李 智，周 玉，丁文文，楊雪琴

（1. 荊楚理工學院醫學院，湖北荊門 448000；2. 湖北省荊門市東寶區人民醫院醫務部，湖北荊門 448000；3. 湖北省荊門市第一人民醫院醫務部，湖北荊門 448000）

根據2018年《全球癌癥公報》，宮頸癌依然是嚴重威脅女性健康的一類疾病，其發病率和死亡率在全球女性位居第四位[1],我國宮頸癌的發病率目前占亞洲國家的22%，因此對宮頸癌基礎和臨床研究仍是緊迫的任務[2]。目前國內外關于上皮細胞黏附分子（epithelial cellular adhesion molecule，Ep-CAM）在宮頸癌的研究尚不多見，本研究通過對宮頸組織分類和分層進行Ep-CAM聯合細胞增殖核抗原67（Ki67）檢測，以期在分子水平探索對宮頸癌有價值的標志物。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年2月～2018年12月在荊門市第一人民醫院和荊門市東寶區人民醫院進行宮頸組織活檢的患者234例，均符合倫理委員會要求。年齡25～73歲，平均年齡46.3±8.6歲，其中宮頸癌94例（浸潤性鱗癌50例，腺癌44例），鱗狀上皮內病變（squamous intraeithelral lesion,SiL）90例（其中LSiL 45例，HSiL 45例），正常宮頸組織50例。宮頸癌患者IA～ⅡA期49例，ⅡB～Ⅳ期45例。所有病例均經病理科高級職稱醫師確診。

納入標準：所有研究對象均為初診，已婚女性，年齡25～75歲。宮頸原發性癌，LSiL和HSiL，正常宮頸組織（除外慢性宮頸炎）。研究對象均知情同意。

排除標準：年齡＜25歲或＞75歲，宮頸轉移性癌，病理診斷不夠明確者。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 主要儀器：SHANDON PATHCENTRE全自動密封式脫水機，MICROM石蠟包埋機（EC300），MICROM HM340E切 片 機，MICROM HMS760X染色機，奧林巴斯BX43顯微鏡。

1.2.2 實驗試劑：由AB公司提供的Ep-CAM試劑盒（批號2018091301）；DAKO公司提供的 Ki67試劑盒（批號20058907）；二抗選自德國Leica novocastra NovoLink聚合物檢測系統RE7280-K檢測試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 操作步驟：每個病例切4張石蠟切片，其中1張進行常規HE染色，核實診斷。另外3張進行免疫組織化學染色，具體操作：（1）福爾馬林固定組織；（2）脫水、包埋、切片3～4μm；（3）染色：脫蠟，抗原修復，滴加抗體，顯色、襯染、封片。

1.3.2 Ep-CAM陽性判斷[3]：觀察每高倍鏡視野下陽性細胞平均數的百分比，計分標準為：0%～5%計0分，6%～25%計1分，25%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分；染色強度依據多數陽性細胞的顯色特征為標準計分：無顯色計0分，顯淡黃色計1分，顯棕黃色計2分，顯棕褐色計3分。上述兩項分值相加得出結果，0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)。其中(-)和(+)記為低表達組，(++)和(+++)記為高表達組。

1.3.3 Ki67陽性判斷[4]：細胞胞核顯示棕黃色顆粒視為陽性細胞。每張切片選取一個高倍鏡視野，計算3張切片的平均陽性率。宮頸癌選取癌細胞浸潤區域。若陽性細胞數＜6%為（-），陽性細胞數6%～28%為（+），陽性細胞數29%～78%為（++），陽性細胞數＞78%為（+++），(++)和(+++)記為高表達組。

1.3.4 宮頸癌的臨床分期：參照Figo2018宮頸癌分期。

1.4 統計學分析 采用SPSS21.0進行統計學分析。計數資料用百分數表示，采用卡方檢驗，計算χ2值和P值，P＜0.05為差異有顯著性意義。

2 結果

2.1 不同狀態宮頸組織Ep-CAM，Ki67的陽性表達 見表1，圖1。Ep-CAM，Ki67在宮頸癌組織的陽性率與LSiL組織比較，差異有統計學意義（χ2=139.000，121.473，P=0.000）,與 正 常 宮頸組織比較，差異有統計學意義（χ2=144.000，133.164，P=0.000）；Ep-CAM在HSiL組 織 中的陽性率與宮頸癌組織比較，差異無統計學意義（χ2=2.326，P=0.124），而Ki67組 織 與 宮 頸癌組織陽性率差異有統計學意義（χ2=13.099，P=0.000）。

表1 不同狀態宮頸組織Ep-CAM,Ki67的陽性表達[n（%）]

2.2 宮頸癌組織不同病理類型Ep-CAM，Ki67高表達率的比較 結果見表2，圖2。分別對宮頸癌組織中浸潤性鱗癌和腺癌兩種病理類型進行Ep-CAM，Ki67高表達率的比較Ep-CAM差異有統計學意義（P＜0.05），而Ki67無統計學差異（P＞0.05）。

表2 宮頸浸潤性鱗癌和腺癌Ep-CAM，Ki67高表達率的比較[n（%）]

2.3 宮頸癌不同臨床分期Ep-CAM，Ki67高表達率的比較 見表3。94例宮頸癌患者IA～ⅡA期49例，ⅡB～Ⅳ期45例。比較不同臨床分期宮頸組織Ep-CAM，Ki67表達率，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

圖1 宮頸鱗癌Ep-CAM，Ki67陽性表達

圖2 宮頸腺癌Ep-CAM，Ki67陽性表達

表3 宮頸癌不同臨床分期Ep-CAM，Ki67高表達率的比較[（n（%）]

3 討論

近年來學者不斷致力于腫瘤分子的研究，希望給腫瘤患者的診療帶來更多的益處。Ep-CAM，亦被稱為CD326，是一種I型跨膜糖蛋白分子，表達于部分正常組織和上皮組織源性的惡性腫瘤，通過對腫瘤干細胞、實質與間質黏附力、腫瘤信號傳導、腫瘤微環境等方面的影響促進腫瘤細胞的增殖與擴散[5-6]。目前國內學者對于Ep-CAM在宮頸癌方面的研究非常少，國外學者報道Ep-CAM對宮頸癌的進展及嚴重程度有預測作用[7]。Ki67是一種與細胞增殖有關的核內蛋白，通過對細胞周期的影響促進細胞的增殖，能夠協助判斷腫瘤細胞的增殖狀態，從而判斷預后[8]。本研究對比其他宮頸組織，對宮頸癌組織進行Ep-CAM和Ki67聯合檢測，一方面研究Ep-CAM在宮頸組織不同狀態的表達情況，另一方面在Ki67的陽性表達基礎上，通過Ep-CAM的表達分析腫瘤細胞的生物學行為，并進一步對不同病理類型、不同臨床分期進行研究分析。

首先對Ep-CAM和Ki67在宮頸癌中的表達進行研究。結果顯示，Ep-CAM和Ki67在宮頸癌組織中的陽性率均為100%，在LSiL的陽性率分別為 0%和 9%，在HSiL的陽性率分別為91%和 87%，在正常宮頸組織的陽性率分別為 0%和6 %。對上述結果進行分析，相比較Ep-CAM，Ki67在LSiL和正常宮頸組織低表達，而在宮頸癌組織中高表達，差異具有統計學意義（P＜0.05）。宮頸癌Ep-CAM的陽性率雖然高于HSiL，但差異無統計學意義，兩者Ki67的陽性率有統計學差異（P＜0.05）。尤其是Ep-CAM值得一提，在正常宮頸組織和LSiL幾乎不表達，但在HSiL與宮頸癌中明顯表達，表明Ep-CAM能夠很好提示宮頸異型性細胞的存在，并與異型性程度呈正比，是宮頸癌敏感性很強的腫瘤分子。Ki67則能夠很好提示惡性腫瘤細胞的增殖。因此Ep-CAM和Ki67能反映宮頸癌細胞的分化程度，對臨床腫瘤診斷可起到輔助作用。

本研究還進一步對宮頸癌浸潤性鱗癌和腺癌兩種病理類型進行研究，分析比較Ep-CAM，Ki67的高表達率，結果表明宮頸浸潤性鱗癌Ep-CAM的高表達高于腺癌，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Ki67的高表達率兩者差異無統計學意義。說明Ep-CAM在鱗狀上皮中的表達強于腺上皮，可能不同腫瘤干細胞來源的細胞腫瘤分子的表達有差異。

本研究還對宮頸癌患者不同的臨床分期進行研究，比較早期宮頸癌與中晚期宮頸癌組織Ep-CAM，Ki67的高表達率。有研究表明，Ki67病變部位與陽性表達部位基本一致，并且病變部位級別越高陽性程度越高[9]。本研究結果表明，中晚期宮頸癌Ep-CAM和Ki67高表達率顯著高于早期，差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明Ep-CAM和Ki67兩個標志物通過各自不同的機制關聯宮頸癌細胞的浸潤與轉移。這一點不僅能夠幫助臨床從分子學角度進行預后評價，還可以為宮頸癌的分子治療提供理論依據。國外有學者[10]體外以Ep-CAM抗體為基礎進行免疫治療，為多種侵襲性腫瘤的治療帶來曙光。Ep-CAM抗體對宮頸癌的作用也仍然值得期待。

綜上所述， Ep-CAM和Ki67可作為宮頸癌的有效腫瘤標志物，既能提供協助診斷依據，還能評估癌細胞增殖狀態，預測浸潤及轉移。希望研究結果還能進一步為宮頸癌的抗體治療提供依據。本課題組還將繼續結合HPV的感染以及晚期患者的生存期進行研究，以期進一步明確Ep-CAM和Ki67在宮頸癌中的作用機制及臨床應用價值。