調(diào)q激光治療黃褐斑鼠模型的病理實(shí)驗(yàn)研究〔1〕

甘小艷，胡婷婷，蔣甜甜，馮浩*

(1.永州市中心醫(yī)院，湖南 永州 425000；2.湖南師范大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005)

黃褐斑是一種常見(jiàn)的后天色素沉著性皮膚病，女性多見(jiàn)，表現(xiàn)為雙面頰黃褐色或深咖啡色片狀斑[1]。目前臨床上治療方法多樣，而隨著激光技術(shù)的發(fā)展，調(diào)q激光在黃褐斑的治療中取得了明顯的效果[2]。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討調(diào)q激光治療黃褐斑的療效，并通過(guò)病理實(shí)驗(yàn)探討其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF級(jí)健康雌性豚鼠20 只，6～8 周齡，體質(zhì)量250～300 g，由湖南太平洋生物科技有限公司提供；黃體酮注射液(規(guī)格1 mL:20 mg)，購(gòu)自廣州白云山明興制藥有限公司；戊巴比妥鈉注射液購(gòu)自廣東邦民制藥廠有限公司；3%氫醌乳膏購(gòu)自廣東人人康藥業(yè)有限公司；HMB45鼠單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)abcam公司。

1.2 動(dòng)物模型制備、分組及處理

參照文獻(xiàn)造模方法[3-4]，選取豚鼠背部約3×3 cm范圍皮膚剃毛備用，于豚鼠后腿根部屈側(cè)肌肉注射黃體酮與0.9%的氯化鈉注射液混合液(比例為1∶1)20 mg/kg，每日1 次，左右腿交替，連續(xù)注射30 d，同時(shí)每日予以波長(zhǎng)為280～320 nm的中波紫外線(UVB)(上海季光特種照明電器有限公司)照射背部裸露的皮膚(紫外燈距離豚鼠背部約20 cm)，每日1 次，每次60 min，共30 d，建立黃褐斑鼠模型。留取一只模型鼠取造模處皮膚，進(jìn)行HE染色及免疫組化染色以確定造模成功。將20 只造模成功豚鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(調(diào)q激光治療組)與對(duì)照組(氫醌治療組)，每組10 只。實(shí)驗(yàn)組采用調(diào)q 1064 nm激光(Fotona歐洲之星激光公司)治療，能量1.3～2.4 J/cm2，光斑大小5 mm，治療頭垂直皮膚表面，平行均勻掃描患處3～4遍，1個(gè)月為一療程，共四個(gè)療程[5]。對(duì)照組于豚鼠背部病灶皮損處每日涂抹3%的氫醌軟膏一次。4個(gè)月后進(jìn)行檢測(cè)。肉眼觀察各組豚鼠治療后色斑面積及顏色深淺變化。

1.3 皮膚組織病理檢查

常規(guī)HE染色，并選用鏈霉菌素-生物素法標(biāo)記黑色素細(xì)胞。一抗選用鼠抗人單克隆抗體HMB45，己二酸二丁酯(DAB)顯色，蘇木素染色。用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照。

2 結(jié) 果

2.1 兩組豚鼠治療前后皮損肉眼觀察

治療前各組豚鼠皮損處均可見(jiàn)均一穩(wěn)定、邊界清晰的深褐色色斑。實(shí)驗(yàn)組治療后可見(jiàn)皮膚稍淡紅，無(wú)明顯色素沉著。對(duì)照組治療后可見(jiàn)皮膚顏色變淺，僅有局部小片色素沉著，治療過(guò)程中皮膚偶有干燥、脫屑(見(jiàn)圖1)。

A B C

A:調(diào)q激光組；B：氫醌治療組；C：模型組

圖1各組豚鼠治療前后皮損比較

2.2 各組豚鼠治療后皮損HE染色情況比較

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組豚鼠表皮的上皮層細(xì)胞增生明顯減輕，真皮層可見(jiàn)少許毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黑素細(xì)胞明顯較少。模型鼠表皮的上皮層細(xì)胞可見(jiàn)明顯增生，真皮層內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張，多量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，基底層可見(jiàn)黑素細(xì)胞連續(xù)分布(見(jiàn)圖2)。

A B C

2.3 各組治療后皮損免疫組化情況比較

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組豚鼠上皮基底層可見(jiàn)胞漿著色為深褐色的黑色素細(xì)胞，棘層及角質(zhì)層未見(jiàn)黑色素顆粒，黑色素細(xì)胞呈線狀或散在分布。模型鼠上皮基底層可見(jiàn)大量黑色素細(xì)胞，胞漿著色深褐色，棘細(xì)胞層亦可見(jiàn)多量黑色素顆粒(見(jiàn)圖3)。

A B C

3 討 論

黃褐斑是一種常見(jiàn)的難治性面部色素沉著性皮膚病，多發(fā)于顏面，影響美觀。雖然黃褐斑對(duì)人的身體健康無(wú)影響，但由于此病發(fā)生于面部，顏色深于正常皮膚，對(duì)患者心理和社會(huì)交往影響較大。因此，黃褐斑不僅僅是簡(jiǎn)單的色素代謝障礙性皮膚病，也是身心、心理疾病[6]。

黃褐斑的發(fā)病機(jī)制不明，目前認(rèn)為與日曬、遺傳因素、口服避孕藥、妊娠、內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂(如甲狀腺功能異常)、微量元素缺乏、睡眠障礙、皮膚抗氧化系統(tǒng)失衡等有關(guān)。但不管何種因素所致，組織學(xué)上多表現(xiàn)為黑素細(xì)胞的增多，黑素顆粒的分泌增加以及色素在局部組織的堆積、沉著[7]。調(diào)q激光治療原理主要為選擇性光熱作用，光熱作用被黑素顆粒或黑素小體吸收，因驟然受熱而發(fā)生爆破，爆破的細(xì)胞碎片可被細(xì)胞質(zhì)中的巨噬細(xì)胞吞噬而排出體外，從而達(dá)到祛除黑色素的目的[8]。調(diào)q激光的激光器是在納秒脈沖寬度選擇性破壞黑色素，因而可以不影響周?chē)M織，尤其是調(diào)q1064激光器的激光束能均勻地通過(guò)整個(gè)真皮層，能治療位于真皮深處的色素病變，因而在臨床上能使黃褐斑得到穩(wěn)定的治療效果。調(diào)q激光能夠利用光聲雙脈沖模式，是指連續(xù)的兩束光以極短的間隔發(fā)射，這樣協(xié)同產(chǎn)生的峰值功率更高，可以更好地減少不必要的不良反應(yīng)，如炎癥或皮膚刺激等。目前調(diào)q激光治療黃褐斑的臨床研究較多，但因黃褐斑發(fā)生于面部，取材不便，因而少見(jiàn)有關(guān)機(jī)制的報(bào)道，在黃褐斑鼠模型中的研究也較少。

本研究發(fā)現(xiàn)UVB誘導(dǎo)的黃褐斑豚鼠經(jīng)調(diào)q激光治療后，與模型鼠比較，色斑基本消退，皮損明顯改善；組織病理可見(jiàn)黑素細(xì)胞及黑素顆粒明顯減少，與氫醌霜比較類(lèi)似，但效果更佳。由此可見(jiàn)調(diào)q激光治療黃褐斑效果顯著，其機(jī)制可能與調(diào)q激光選擇性破壞黑素細(xì)胞減少黑色素生成有關(guān)。