淺析快速檢測技術在微生物菌落檢測中的應用與發展研究

莫冬松

（靈山縣疾病預防控制中心，廣西 欽州 535400）

1 微生物菌落快速檢測的現狀

在當前的食品種類和各種食品添加劑發展和應用中，可能會產生微生物菌落造成的致病問題，這種現象也日益増多，食品安全問題再次被擺放到了不可忽視的高度，也逐漸成為人們關注的焦點之一，不合格的微生物菌落隨食品進入人體后，根據WHO統計，會給生命健康帶來很嚴重的負擔，全球每年有300萬～1000萬件類似的傷亡事件，微生物菌群主要引起機體的慢性損傷，食源性疾病死亡案例已經成為當代社會發展的心結，但是這種損傷往往是不可逆的，毀滅性的。發達國家每年出現食源性疾病的比例逐年攀升，甚至與正常的人口互相分割，人數占總人數的1/3，而在醫療衛生技術更差一些的國家和地區更為嚴重，大部分發展中國家都高達1/2。這突顯出了微生物菌落檢測技術研究的重要意義，進行食品微生物檢測十分重要。

2 快速檢測的重要性

隨著食品行業的快速發展，在食品進入人體前進行標準化的檢測是必須的，首先應立足于控制污染源，整頓食品企業的添加劑等應用，從而減少致病微生物分子的含量，切實執行有關食品安全保護法規，同時根據《食品安全法》的規定，防止微生物菌落造成的食品安全質量下降等情況的發生。對于食品中微生物菌落這方面的檢測需要進一步加強，同時增強相關領域的監察與管控，擴大和加強對食品安全的監控，因而研究食品中微生物菌落快速檢測的常用技術，有利于更好的保障食品安全質量，提高食品中微生物菌落檢測技術水平，有利于從人的生命體之外進行健康防護，減少微生物菌落致病的可能。

3 常用的微生物菌落快速檢測技術

3.1 濾膜法

濾膜法常用于進行快速檢測，但主要的優點和缺點都比較明顯，用于可過濾樣品的微生物檢測。這種方法有一個非常受歡迎的優勢，就是靈敏度增大，可以呈現出較為清晰明了的檢測結果，菌落無擴散情況，便于計數。雖然由于儀器體積小，價格低，而較受歡迎，但也存在缺點，就是在基本的檢測設備之外，通常需要額外的支出購買真空泵，同時為了保證檢測的順利進行以及結果呈現，多聯支架及一次性濾膜也要有充足的備用。在這方面的額外支出成本還算其次，如果抽濾過程空氣潔凈度不夠，才是這個檢測方法最大的問題，一旦失誤就有可能造成二次污染，這其實對于很多食品的快速檢測來說是不能接受的，尤其是對菌數要求特別嚴格的情況下，在實際生產生活中，確實有很多的產品不能使用這樣的檢測方式，常見的就有如啤酒、澄清果汁、桶裝飲用水這類。稱取10 g固體樣品置于盛有90 mL無菌生理鹽水的無菌錐形瓶中，在旋轉式搖床上200 r/min充分振蕩30 min，制成1:10的樣品均液，即10-1稀釋液。用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品均液1 mL（吸取前需要搖勻1:10稀釋液），緩慢加入盛有9 mL無菌生理鹽水的無菌試管中，用漩渦振蕩器振蕩，混合均勻，制成1:100的樣品稀釋均液。制備10倍系列樣品稀釋液，每遞增稀釋一次，換用一次1 mL無菌吸管或吸頭。選擇3～4個適宜稀釋度的樣品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀釋液）。

3.2 皿膜法——以紙片法為代表

相對來說這是更加具備便捷性的方法，紙片法是目前被廣泛接受的方法，原理要依靠具有特效顯色反應的生物染色劑來實現，國標餐具大腸菌群采用的就是這種方法，整體上來說更能滿足“快捷檢測”的具體要求，紙片法通常通過浸漬附載到試紙上，同樣也是觀察化學反應產生的變化，優點是無需制備培養基，通過研究獲得試紙與微生物之間的轉換和較為明顯的調整，攜帶非常方便，能夠發現兩者的最佳反應條件。經試驗證明，這種方法在非漫延菌落計數時較為方便。可以較好的顯示出該試紙對微生物具有的選擇性，從而利用這一現象發現微生物菌落的存在。但是缺點是不能節省檢測時間，只是對檢測的簡化，還有很多需要做的準備工作，檢測成本相對應的問題，甚至于具體的前處理的方法未見報道，尤其金黃色葡萄球菌紙片存在明顯的問題，最突出的表現就是相對來說，其取樣量太低了。

3.3 電化學基因傳感技術

微生物菌群分子與探針反應，易攜帶且不破壞樣品，其原理是利用化學元素之間的關系，致病微生物特征基因與核算反應導致光、電信號的變化，從而明確具體食品中的某些特定靶生物分子，使用電化學核酸探針就能夠簡單、快捷、方便的實現結果觀測，同時可以捕捉存在的特定基因進行檢測。所以整個檢測的過程和具體的操作都比較容易實現，檢測方法長期使用技術成熟，在當前的多個國家和地區的食品中微生物菌群快速檢測方面，一直被作為快速檢測的首選方法。同樣的這種檢測也存在靈敏高、成本低、能耗少等非常實用的特點。

3.4 免疫熒光技術

通過該方法檢測時，選擇相應的抗體檢測抗原或抗原后，通過熒光素對其標記，形成特定的熒光抗體，對該抗體進一步檢測后，確定出微生物菌落情況。根據檢測原理的不同，能夠將其劃分成兩種類型，一種為直接法，即在樣品內，直接添加適量的熒光抗體，之后，通過洗滌處理后，利用顯微鏡進行觀察。另一種為間接法，樣品適當處理后，添加相應的細菌特異性抗體，靜止并洗滌后，放入熒光抗體，最后，利用顯微鏡進行觀察，以確定微生物菌落情況。對于這種方法來說，操作非常簡單，且能夠直觀顯示出群落的位置，具有較高的檢測效果。對于熒光素來說，主要有四種，每種熒光素具有不同的特點，具體如表1所示。

表1 主要熒光素及其特點

3.5 放射檢測技術

細菌增殖時，會排放出一定的CO2，通過對CO2的檢測，即可確定出微生物菌落情況。主要流程為：在碳水化合物內，注入適量的14C，以形成實驗底物。之后，將底物添加到待測樣品當中，通過對底物內14CO2含量的檢測，即可推算出菌落情況。生長時，細菌會吸收底物中的14C，并排除14CO2，對于14CO2來說，具有一定的放射性，之后，將底物放入到專業儀器中，即可測出14CO2的濃度，進而得出最終的檢測結果。這一方法具有很多的優勢，如操作相對較為簡單，能夠快速得到結果；由于應用了先進的檢測設備，因而能夠得到較為精準的檢測結果，且可以有設備自動完成，防止人員參與而對檢測結果造成干擾等。

4 總 結

食品檢測十分復雜且重要，尤其是在針對微生物菌落的相關檢測中，食品檢測工作包括很多方面，最主要的就是要以便捷、快速、低成本為標準，而快速檢測技術是食品檢測中常用的內容，因為基本可以滿足食品微生物菌落的檢測最重要部分的要求，其檢測的質量和水平將直接影響這批樣品的市場投放結果，以及對人民群眾安全的保障，食品整體的質量必須嚴格把關，從某種意義上來說，微生物菌落的快速檢測，密切關系看人們的生命安全。