肢傷愈合劑中川芎、赤芍的薄層色譜探析

馬夢(mèng)黎　文金隆　莊彥

【摘 要】 目的：建立肢傷愈合劑的薄層定性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：通過(guò)不同提取方法、不同展開劑、不同檢視方法等對(duì)比，采用薄層色譜法對(duì)肢傷愈合劑中的主藥藥味川芎、赤芍進(jìn)行薄層鑒別，并對(duì)確定方法進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便可靠，重復(fù)性好，可作為肢傷愈合劑的定性鑒別。

【關(guān)鍵詞】 肢傷愈合劑;薄層色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R285 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）23-0044-03

The Thin Layer Chromatography Anslysis of Chuanxiong Rhizoma and Paeoniae Rubra Radix in the Zhishangyu Mixture

MA Mengli WEN Jinlong ZHUAN Yan

Yuxi Municipal Hospital of TCM，Yuxi? 653100，China

Abstract：Objective To estalblish the qualitative quality standard of the Zhishangyu mixture.Methods Different extraction methods， different developing solvent and different inspection methods were compared. TLC was used for TLC identification of Chuanxiong Rhizoma and Paeoniae Rubra.Results The determination method was verified Results TLC spots were clear and specific， and the negative control had no interference.Conclusion This method is simple， reliable and repeatable， which can be used as the qualitative identification of the Zhishangyu mixture.

Keywords：Zhishangyu Mixture; TLC; Quality Standard

肢傷愈合劑（肢傷1號(hào)合劑）是玉溪市中醫(yī)院在肢傷1號(hào)方的基礎(chǔ)上自主研發(fā)的新制劑，由川芎、赤芍等7味中藥組成，具有行氣活血、祛瘀止痛的功效，用于氣滯血瘀型骨折創(chuàng)傷早期。肢傷1號(hào)方是在經(jīng)方“四物湯”的基礎(chǔ)上，結(jié)合骨折創(chuàng)作早期的病理特點(diǎn)，經(jīng)臨床實(shí)踐加減化裁而來(lái)。處方分析全方主藥為川芎、赤芍。川芎活血行氣，祛風(fēng)止痛，是血中氣藥;赤芍清熱涼血、散瘀止痛，善散邪行血。現(xiàn)代藥理研究表明川芎中的阿魏酸是公認(rèn)的活性成分，具有抗腫瘤、抗菌和舒張血管的作用，在很多制劑中作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的考察指標(biāo)。赤芍抗炎的化學(xué)成分及作用機(jī)制研究主要集中在芍藥苷。為了更好地對(duì)該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，保證臨床用藥安全有效，本研究對(duì)其中的川芎、赤芍進(jìn)行薄層色譜鑒別研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 YXQ-28OSI手提式壓力蒸汽滅菌器（嘉興市中并報(bào)醫(yī)療儀器有限公司）;KH-50B型超聲波清洗器（昆山和創(chuàng)超聲儀器有限公司）;BSA224S型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）;ZF-2型三用紫外儀（上海安亭電子儀器廠）;HH-S2電熱恒溫水浴鍋;ZBY149-83型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱;Canon PowerShot G15數(shù)碼照相機(jī)（Canon INC）;

1.2 材料 硅膠G板（MERCK、青島海洋化工、自制板）;試劑均為分析純。阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：110773-201012）、芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：11C736-201438）、川芎對(duì)照藥材（批號(hào)：120918-201411）、當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)：120927-201516）、赤芍對(duì)照藥材（批號(hào)：121092-201003）等均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，肢傷愈合劑（批號(hào)：20150807、20151016、20160526）由玉溪市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 川芎的薄層鑒別 取本品50mL，加乙醚振搖提取2次，每次25mL，合并乙醚液，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1g，加水煎煮2次，每次50mL，煮沸，并保持微沸20min，脫脂棉濾過(guò)，合并濾液，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。再取阿魏酸對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（4∶3∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn);在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.2 赤芍的薄層鑒別 取本品50mL，加入25mL經(jīng)水飽和的正丁醇振搖提取，分取正丁醇層，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解（必要時(shí)加中性氧化鋁1g，攪拌，蒸至近干，殘?jiān)靡掖?0mL分次洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解），作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含4mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖2、圖3。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)初期逐一對(duì)該制劑中的主要藥味進(jìn)行提取對(duì)照，并制作了相應(yīng)的陰性對(duì)照液一起實(shí)驗(yàn)。綜合制劑的藥理作用和現(xiàn)代有效成份的研究，選擇主藥的主要藥理成分阿魏酸和芍藥苷作為最終對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)操作中對(duì)以下項(xiàng)目進(jìn)行優(yōu)化。

3.1.1 供試品溶液的提取和前處理對(duì)比 阿魏酸項(xiàng)采用酸性條件下乙醚萃取、乙醚直接萃取作比較，結(jié)果酸性條件下的乙醚萃取液在薄層色譜法中有一明顯灰色干擾斑點(diǎn)，與阿魏酸對(duì)照品的位置較接近。而乙醚直接萃取既減少操作，又可得到較好地結(jié)果。芍藥苷項(xiàng)采用醇提不能清晰地分離出來(lái)，改用正丁醇提取基本可以分離出來(lái)。但在某些批次的產(chǎn)品提取后所得供試液較濃，干擾大。加入中性氧化鋁處理后可得到較好結(jié)果。

3.1.2 展開系統(tǒng)優(yōu)化 阿魏酸展開劑分別嘗試正己烷-乙酸乙酯（4∶1）（9∶1）、環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酸-甲酸（4∶1∶1∶0.1）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶2∶0.1）（2∶1.5∶0.05）等多種展開劑進(jìn)行展開對(duì)比，根據(jù)展開顯色效果最終確定展開劑甲苯-醋酸乙酯-甲酸（4∶3∶0.1）為展開劑。芍藥苷項(xiàng)薄層試驗(yàn)的展開經(jīng)驗(yàn)，分別嘗試用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶1∶4∶1）、三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）多次進(jìn)行展開對(duì)比。在實(shí)際工作中，因濃氯試液在貯存過(guò)程因貯存時(shí)間、環(huán)境等原由，會(huì)導(dǎo)致濃氨試液的濃度下降導(dǎo)致影響結(jié)果。最終決定選擇后者作為展開劑。

3.1.3 檢視方法選擇 阿魏酸分別嘗試直接觀察、紫外觀察、顯色劑顯色觀察對(duì)所得的薄層板進(jìn)行檢視。最為方便的是紫外燈下檢視，故最終確定為紫外365nm檢視。芍藥苷項(xiàng)分別嘗試5%香草醛硫酸液、10%硫酸乙醇液、5%硫酸乙醇液顯色。5%香草醛硫酸液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，10%硫酸乙醇液對(duì)霧化器的要求較高。結(jié)合我院制劑實(shí)驗(yàn)室的條件，最終選擇5%硫酸乙醇液。加熱顯色時(shí)選擇105℃烤箱加熱、電吹風(fēng)熱風(fēng)逐步加熱作對(duì)比。105℃烤箱加熱掌握不好時(shí)間，容易加熱過(guò)導(dǎo)致顯色斑點(diǎn)效果不好，不能看到斑點(diǎn)顯色變化。熱風(fēng)吹則可人為控制加熱程度，更好更明顯地看到斑點(diǎn)的顯現(xiàn)及變化情況。

3.1.4 對(duì)照物質(zhì)的選用 選用相應(yīng)的對(duì)照藥材、對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照。川芎項(xiàng)陰性對(duì)照中阿魏酸對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置顯相同顏色的對(duì)照斑點(diǎn)，所以保留了對(duì)照藥材與對(duì)照品兩項(xiàng)對(duì)照。赤芍項(xiàng)陰性無(wú)干擾，為方便實(shí)際生產(chǎn)檢驗(yàn)控制，最終標(biāo)準(zhǔn)確定為芍藥苷項(xiàng)，不再保留赤芍對(duì)照藥材。

3.2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 在實(shí)際的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中，產(chǎn)品批次、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)器材、實(shí)驗(yàn)人等均是標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用的主要影響因素，為使所確定的專屬性薄層項(xiàng)在實(shí)際的應(yīng)用質(zhì)控時(shí)能較好地指控產(chǎn)品質(zhì)量。選擇不同產(chǎn)品批次、不同薄層板、不同的操作者對(duì)該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證。

3.2.1 薄層板驗(yàn)證 不同薄層板對(duì)實(shí)驗(yàn)的承載量等均有所不同，分離效果亦不相同，所以根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行點(diǎn)樣量的范圍界定。對(duì)比三種薄層板，Merck板的分離度最高，承載量最小，青島板次之。自制板分離度最低，承載量最大，需要加大點(diǎn)樣量方可得到滿意的結(jié)果圖。故而在點(diǎn)樣量中取一個(gè)中間點(diǎn)樣量。

3.2.2 斑點(diǎn)顯色情況 斑點(diǎn)顯色與薄層板、顯色時(shí)間、加熱程度及放置時(shí)間等息息相關(guān)。一般初期的斑點(diǎn)顏色偏艷，放置空氣中較長(zhǎng)時(shí)間后變淡。

綜上，通過(guò)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的優(yōu)化與驗(yàn)證，本文建立的肢傷愈合劑的川芎、赤芍的薄層鑒別項(xiàng)色譜斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。實(shí)際應(yīng)用中簡(jiǎn)單方便，重復(fù)性好，可作為肢傷愈合劑的定性鑒別。曾嘗試用高效液相對(duì)其阿魏酸和芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，因現(xiàn)實(shí)條件等問(wèn)題暫不定為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)。可在以后的標(biāo)準(zhǔn)提升中再進(jìn)一步確定。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]孔菲，丁瑩，梁雪，等. 川芎、當(dāng)歸的薄層層析鑒別[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2013，41（2）：56-57

[3]何薇，曾祖平. “本草熱湯包”中當(dāng)歸、川芎的薄層層板鑒別[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13（9）：553

[4]馬新民. 補(bǔ)腎養(yǎng)血生發(fā)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究[J].中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，30（7）：181-182

[5]肖婷，崔炯謨，安曄，等. 復(fù)方川芎滴丸的質(zhì)量控制研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2014，37（5）：427-430

[6]梁娜，孫少平，羅躍娥，等. 阿魏酸的研究進(jìn)展[J].黑龍江中醫(yī)藥，2009（3）：39-40

[7]張欣，高增平. 阿魏酸的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2020，22（1）：138-147

[8]張育貴，張淑娟，邊甜甜，等. 芍藥苷藥理作用研究新進(jìn)展[J].中草藥，2019，50（15）：3735-3740

[9]張紅星. 祛寒止癢顆粒中的麻黃、赤芍薄層色譜鑒別研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013（6）：14

[10]王迎春，甄亞欽，高佳明，等. 赤芍配方顆粒與水煎中主要化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2016，25（16）：17-20

[11]周鴻，黃含含，張靜澤，等.川芎-當(dāng)歸藥對(duì)研究進(jìn)展[J].中成藥，2015，37（1） ：184-187.

[12]陸小華，馬驍，王建，等.赤芍的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2015，46（4） ：595-600.

[13]王薇.赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].黑龍江科技信息，2015（17）：109.

[14]唐靖雯，盧禮平，楊桃，等.當(dāng)歸調(diào)經(jīng)顆粒（無(wú)糖型）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2019，28（20）：40-44.

[15]趙超，白曉丹，李銳莉，等.川參膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究[J].中國(guó)藥房，2019，29（21）：2902-2906.

（收稿日期：2020-06-08 編輯：劉斌）

基金項(xiàng)目：云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目（中醫(yī)聯(lián)合專項(xiàng)2017FF116-046）;中醫(yī)藥傳承與創(chuàng)新（歧黃工程）。

作者簡(jiǎn)介：馬夢(mèng)黎（1977-），女，漢族，本科，副主任中藥師，研究方向中藥制劑研究。E-mail：aline50@163.com