加味勻氣熏洗顆粒薄層色譜鑒別研究

李文靜 王繼永 潘旭 劉軍 賽紀虎

【摘?要】?目的：制備加味勻氣熏洗顆粒并建立其定性鑒別質量控制方法。方法：通過對方中至少1/3藥味建立薄層色譜（TLC）定性鑒別方法以作為質量控制的鑒別項。結果： 白芷、川芎、紅花、干姜四味藥所建立的TLC法均通過方法學驗證且陰性均無干擾。結論：該方法簡單易操作，專屬性與耐用性良好，可用于加味勻氣熏洗顆粒的質量控制。

【關鍵詞】?加味勻氣熏洗顆粒;TLC;質量控制

【中圖分類號】R284.1?【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）24-0025-03

Abstract：Objective To preparate and establish the qualitative identification of Jiaweiyunqi fumigation Granules. Method Using TLC to establish qualitative identification of at least 1/3 herbs in the product.Result The method verification experiments of the four drugs （Angelica dahurica， Ligusticum chuanxiong Hort.， Zingiber officinale Rosc.and Carthamus tinctorius L.）were all passed and There was no interference in the negative control solution. Conclusion The method is simple and easy to operate and specific，and can be used for the quality control of Jiaweiyunqi Granules.

Keywords：Jiaweiyunqi Fumigation Granules;TLC;Quality Control

加味勻氣熏洗顆粒處方為我院協定處方，由干姜、白芷、川芎、零陵香、紅花等十味藥組成，有芳香健脾益腎、化瘀通絡之功效，主用于脾腎兩虛夾瘀、寒凝血瘀引起的糖尿病性周圍神經病變（DPN）、風濕骨痛等[1-2]。全方體現用“香”特色，采用芳香藥物進行淋浴、洗浴，藥液通過熏蒸的方法，使藥物有效成分穿過皮膚角質和表皮擴散、吸收，使脈絡組織代謝通暢，充分發揮寧夏地方特色及中醫藥優勢，為DPN治療尋求一種安全方便、價廉效佳的外治手段。目前臨床上多結合熏蒸針刺等療法進行治療且取得較好療效，但該臨方加工品種原劑型為粗粉，工藝較為落后，且缺乏質量控制標準。為了加快科技成果轉化和有效控制并改善其制劑質量，本研究對原工藝進行改進將其制備為顆粒劑，并對處方中至少1/3藥味進行TLC鑒別，旨在將其開發為醫院中藥制劑，擴充其使用范圍。

1?儀器與試藥

XA105電子天平;ZF1紫外分析儀（上海耶茂有限公司）;硅膠G板、H板（青島海洋化工廠分廠+煙臺市化學工業研究所），對照藥材均從中國食品藥品檢定所購買，其中川芎對照藥材（120918-201411）;紅花對照藥材（120907-201412）;干姜對照藥材（120942-201309）;白芷對照藥材（120945-201309）;加味勻氣熏洗顆粒為我院制劑中心自制（20180705、20180706、20180708）;水是蒸餾水，其他試劑都是分析純。

2?方法與結果

2.1?白芷TLC鑒別?取三批次本品各2g，加20mL石油醚（60～90℃），超聲15min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為樣品溶液，另取對照藥材，同法制成對照藥材溶液并依照加味勻氣顆粒處方制備工藝單劑量同法制成缺白芷的陰性對照液;參照藥典通則0502項下實驗，各吸取上述溶液10μL，分別點于G板，用石油醚（60～90℃）-乙醚（3∶2）層析缸內使展開[3]，取出，晾干，置254nm的紫外燈下檢視[4]。樣品色譜與對照藥材色譜主斑點位置統一，分離較好且陰性無干擾。如圖1所示。

2.2?干姜TLC鑒別?取三批次本品各5g，加水50mL，加熱回流30min，濾過，濾液濃縮至約20mL，放冷，用等體積乙酸乙酯連續萃取2次，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，加乙醇1mL使殘渣復溶，作為供試品溶液[5]。另取干姜對照藥材同法制成對照藥材溶液并照加味勻氣顆粒處方制備工藝單劑量同法制成缺干姜陰性溶液。照薄層色譜法（通則0502）實驗，各吸取上述溶液5μL，分點于同一硅膠G板，以石油醚（60～90℃）-氯仿-乙酸乙酯（2∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴適量2%香草醛硫酸溶液，105℃加熱，直到斑點清晰，在日光下檢視[6]。樣品色譜與對照藥材色譜主斑點位置統一，分離良好且陰性無干擾。如圖2所示。

2.3?川芎TLC鑒別?取三批次本品各1.4g，加石油醚（60～90℃）20mL，超聲15min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液，另取川芎對照藥材，同法制成對照藥材溶液且依照加味勻氣顆粒處方制備工藝單劑量制同法得缺川芎的陰性對照溶液[7]。照薄層色譜法（通則0502）實驗，各吸取上述溶液5μL，分點于同一硅膠G板上，用甲苯-乙酸乙酯（3∶1）在層析缸內展開[8]，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。樣品色譜與對照藥材色譜主斑點位置統一且清晰，分離較好且陰性無干擾。如圖3所示。

2.4?紅花TLC鑒別?取三批次本品各2g，加80%丙酮20mL，密塞，超聲30min（40HZ），靜置后過濾，取5mL濃縮至1mL，作為供試品溶液[9];另取紅花對照藥材，同法制成對照藥材溶液且按照加味勻氣顆粒處方制備工藝單劑量同法制缺紅花陰性溶液。參照藥典通則0502實驗，各吸取上述溶液10μL，分別點于同一硅膠H板，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（35∶10∶10∶2）為展開劑[10-11]，展開，取出，晾干。樣品色譜與對照藥材色譜中主斑點顏色及位置統一，分離較好。如圖4所示。

2.5?方法學驗證

2.5.1?專屬性考察?分別吸取白芷、紅花、川芎、干姜四味藥供試品溶液（批號：20180705、20180707、20180708）與對應對照藥材溶液和陰性品溶液，按其擬定的相應方法試驗。結果均未見陰性對照有干擾（如圖1～4所示）。

2.5.2?耐用性考察

2.5.2.1?不同廠家薄層板的比較?取青島海洋化工廠分廠及煙臺市化學工業研究所生產的薄層板（G、H），分別按四味藥擬定的方法試驗。結果無明顯差別。

2.5.2.2?不同溫度的比較?取點樣后的薄層板，分別在6℃和30℃中展開，結果表明在6～30℃范圍內試驗，對四味藥的鑒別均無明顯的影響。

2.5.2.3?不同相對濕度的比較?取點樣后的薄層板，分別在不同濕度的層析缸中展開，按擬定的方法試驗。其中38%、80%硫酸水溶液分別放置層析缸一側（約5～6mL以不溢至另一側為準）飽和30min后，另一側倒入展開劑，放入點好的薄層板。結果表明在相對濕度38%～80%之間試驗，對四味藥鑒別均無明顯的影響。

3?討論

3.1?工藝改進方面?加味勻氣熏蒸顆粒處方是在我院黨毓起主任團隊結合多年臨床經驗組成的協定方（加味勻氣散）基礎上進行工藝改進而來，組成有肉桂、干姜、炒桃仁、紅花、零陵香、地椒、白芷、川芎等，重用活血通絡、化瘀止痛藥物，有效改善局部組織細胞的通透性，以增強微循環血流，促進藥物吸收，從而達到改善DPN引起的涼、麻、瘙癢、疼痛等不適，更重要的是可保護局部神經損傷，具有止痛，尚能促進病變組織修復。采用濕法制粒將原散劑改進為顆粒劑并使用熱封型茶葉濾紙袋包裝，方便臨床熏蒸治療，且生產工藝簡單，藥味簡價廉，安全無創，易于DPN患者所接受，使內病外治，由表及里，舒筋通絡，使發汗不傷營衛，生產條件要求相對低，符合醫院制劑開發現狀。

3.2?鑒別藥味的選擇方面?本研究也曾對方中君藥肉桂、臣藥桃仁等進行薄層鑒別方法建立，但因陰性干擾嚴重未作為質控標準。白芷、川芎、紅花、干姜的TLC鑒別實驗均先參照藥典方法進行考察，除干姜外，展開劑或提取溶液等根據情況有所變動及調整。

3.3?川芎及白芷TLC建立?①樣品前處理方面：藥典中白芷及川芎飲片在薄層鑒別制備樣品液時均先用乙醚浸泡振搖提取，濾液揮干后乙酸乙酯復溶;由于白芷和川芎的乙醚提取液在紫外燈下斑點均不明顯，為提高提取效率，最終選擇極性相似的石油醚超聲提取制備供試品溶液，結果斑點清晰度增強，得到明顯改善。②展開劑方面：川芎在以正己烷-乙酸乙酯（3：1）為展開劑[12]時，陰性干擾嚴重;以石油醚（60℃）-乙酸乙酯（4∶1），主斑點RF值偏低，陰性有干擾;結合文獻屢次試驗后川芎以甲苯-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑。③薄層板選擇：實驗發現該制劑中川芎參照藥典使用GF254點板后，斑點不清晰。后使用硅膠G板在254nm下紅花色譜造成的紅色背景消失，主斑點清晰，故最終選用硅膠G板。

3.4?紅花TLC建立?以藥典展開劑乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）展開后，RF值過大，不在0.2～0.8之間，故將水的比例降低，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（35∶10∶10∶2）為展開劑展開后RF值=0.68，3批樣品液圖譜與紅花對照藥材圖譜上紅色主斑點位置一致，斑點清晰且陰性無干擾。

目前該協定處方已完成穩定性考察，擬近期備案為醫療機構中藥制劑從而服務更多DPN患者，擴展其使用范圍。

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（收稿日期：2020-07-03?編輯：程鵬飛）