MMP-7在直腸癌中的表達及臨床意義

崔廣賓

(商丘市第一人民醫院 胃腸肝膽外科三病區，河南 商丘 476100)

直腸癌根治術是治療直腸癌的主要手段，治療失敗主要是由于術后腫瘤的復發、轉移所致[1]。研究表明，手術切緣的腫瘤殘余是影響直腸癌根治術后預后的重要因素，其切緣徹底與否可直接影響直腸癌患者的預后情況[2]。目前，關于直腸癌安全手術切緣的定義存在較多爭議，傳統判定方法主要是基于病理診斷結果。病理診斷為切緣陰性的患者，其局部復發率仍較高。隨著腫瘤分子學研究的不斷深入，關于直腸癌手術安全分子切緣的概念成為研究的熱點之一。目前多數研究結果認為，腫瘤的發生、發展與腫瘤細胞的黏附以及穿破基底組織的能力密切相關。基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)可以降解細胞外基質中的膠原，促使一些惡性腫瘤細胞穿過基底膜屏障，從而發生腫瘤的侵襲、轉移。相關研究指出，基質金屬蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7，MMP-7)與結直腸癌的發展密切相關[3-4]。本研究采用免疫組織化學法檢測96例直腸癌組織及手術切緣中MMP-7的表達情況，為確定直腸癌手術切緣的安全距離提供一定的參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年10月至2018年8月商丘市第一人民醫院普外科確診的96例直腸癌患者標本。男56例，女43例；年齡49～79歲，平均(68.4±4.1)歲；腫瘤≤4 cm者40例，>4 cm者56例；管狀腺癌49例，乳頭狀癌28例，黏液腺癌19例；高分化癌42例，中分化癌25例，低分化癌29例；癌組織浸潤腸壁黏膜下層者12例，浸潤深肌層者39例，浸潤漿膜層者41例。TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期18例，Ⅲ期33例，Ⅳ期31例。所有患者均接受全直腸系膜切除術，選取直腸癌原發癌灶，同時在距癌組織遠端切緣1、2、3 cm處分別橫向剪取寬2 mm的黏膜組織作為手術切緣(分別標記為A組、B組、C組)，其中在高、中分化組中依次標記為A1組、B1組、C1組，低分化組中依次標記為A2組、B2組、C2組。50例輕微慢性直腸炎癥患者黏膜組織標本作為對照組(D組)。所有患者均首次來院且未進行其他相關治療。

1.2 試劑與方法抗MMP-7單克隆抗體、EliVisionTMplus兩步法試劑盒購自福州邁新生物制品有限公司。所有標本均經100 g·L-1的中性甲醛固定，石蠟包埋，常規制備4 μm厚切片，65 ℃烘烤備用。EliVisionTMplus免疫組化染色后光鏡觀察，染色步驟按試劑盒說明書，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作空白對照，以排除假陽性結果。

1.3 結果判定MMP- 7在直腸癌組織細胞中表達，陽性產物呈棕黃色細顆粒狀，定位于細胞質內。細胞染色結果由病理科兩名以上專家進行雙盲評估，最后結果由多名專家綜合評估。判斷標準：MMP-7的表達以陽性和陰性來表示，高倍鏡下取4個不同視野，各計數200個細胞，陽性細胞數<10%為(-)，10%～30%(+)，30%～50%(++)，>50%(+++)。

1.4 統計學方法采用SPSS 19.0統計軟件進行數據處理。MMP-7陽性表達情況以頻數和率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 直腸癌組織及非癌組織中MMP-7表達情況鏡下觀察直腸癌黏膜標本病理切片可見胞質呈棕黃色顆粒。見圖1。96例直腸癌組織中MMP-7陽性表達率為88.5%，50例輕微慢性直腸炎癥患者黏膜組織中MMP-7陽性表達率為16.0%，直腸癌組織中MMP-7陽性表達率高于直腸非癌組織，差異有統計學意義(P<0.05)。

圖1 MMP-7在直腸癌中的表達(HE，×40)

2.2 不同分化程度的直腸癌手術切緣MMP-7表達情況A1組、B1組MMP-7陽性表達率(86.6%、58.2%)均高于C1組、D組(23.9%、16.0%)，差異有統計學意義(均P<0.05)；C1組和D組MMP-7陽性表達率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。A2組MMP-7陽性表達率(86.2%)高于C2組(41.4%)，差異有統計學意義(P<0.05)；A2組、B2組MMP-7陽性表達率(86.2%、48.3%)均高于D組(16.0%)，差異有統計學意義(均P<0.05)；B2組和C2組MMP-7陽性表達率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；C1組MMP-7陽性表達率(23.9%)低于C2組(41.4%)，差異有統計學意義(P<0.05)；C2組MMP-7陽性表達率(41.4%)高于D組(16.0%)，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

直腸癌在消化系統腫瘤中較為常見，其發病率僅次于食管和胃惡性腫瘤，我國直腸癌發病率呈逐年上升趨勢。外科手術在消化系統惡性腫瘤治療方面占主導地位。雖然采用直腸癌根治性手術治療了許多直腸惡性腫瘤患者，但5年總體生存率仍較低，術后局部復發是治療失敗的主要原因[5]。局部復發是指直腸惡性腫瘤根治術后，原發腫瘤部位或術野范圍發生與原發癌灶相同的病變組織，包括吻合口、淋巴結復發或周圍臟器浸潤等情況[6]。因此，確定直腸癌手術切除范圍成為預防復發的關鍵措施。目前，關于直腸癌手術切除的范圍，尤其是距腫瘤切緣的安全距離尚無明確定論。

分子生物學研究表明，腫瘤在細胞形態發生改變之前，分子水平及生化代謝水平已發生異常改變，出現了功能異常的癌基因產物或產物表達相對增強。因此，探尋一種準確的判定方法對于明確手術安全切緣具有重要的理論價值和臨床意義。為提高病理陰性切緣處癌癥細胞的檢出率，提出了分子切緣的概念。研究證實，分子切緣可以預測多種癌癥的局部復發率[7-8]。因此，對臨床醫生來說，找到一種可以確定安全手術切緣的分子，對減少直腸癌的局部復發尤為重要。

惡性腫瘤的浸潤和轉移過程復雜，其中基底膜和細胞外基質的降解就是腫瘤浸潤和轉移發生的關鍵步驟。MMPs幾乎能降解所有基質蛋白和細胞外基質成分，在腫瘤細胞侵襲過程中起重要作用[9]。近年來，MMP-7備受關注。本研究顯示，MMP7在直腸癌組織中陽性表達率高于正常直腸組織，表明MMP7在直腸癌組織中發生了異常表達，可能參與直腸癌的發生、發展。一般情況下，腫瘤組織的分化程度與惡性程度成反比。以往研究發現，癌組織中MMP7的表達水平與患者性別、年齡、腫瘤直徑、病理分型無關，與組織浸潤深度、組織學分化、TNM分期有一定關系，MMP7高表達的患者預后較差[10]。

有研究認為，距離惡性腫瘤遠端正常腸管3 cm甚至2 cm對絕大多數患者來說屬于安全范圍[11]。國外有研究認為，對直腸癌采用直腸全系膜切除術，大部分情況下腫瘤遠側腸壁切除2 cm已經足夠，對位于直腸系膜遠側緣或更低直腸癌，遠側腸壁切除1 cm也可以[12-14]。有研究持不同的意見，認為下切緣≤1 cm不會對腫瘤的局部復發產生明顯影響[15]。病理學研究證明，直腸癌向遠側腸壁內播散達2 cm者僅占1%～2%，從理論上講下切緣長度2 cm較為合適[16]。楊建光等[17]研究發現，直腸癌術后復發率隨著癌組織分化級別降低而升高。Kim等[18]研究結果同樣表明，原發腫瘤病理類型、分化程度是直腸癌術后局部復發和預后的重要影響因素，惡性程度越高，越易導致局部復發。因此，應根據直腸癌分化程度的不同，選擇不同的手術切緣作為安全范圍。

本研究觀察MMP7在距直腸癌1 cm(A1組、A2組)、2 cm(B1組、B2組)、3 cm(C1組、C2組)及輕度黏膜慢性直腸炎癥組織(D組)中的表達，發現MMP7在各組中的表達呈下降趨勢。此外，本研究結果顯示，C2組MMP7表達率高于C1組、D組。因此，可以根據直腸癌病理分化的不同確定不同的安全手術切緣，在高、中分化直腸癌中切除至距腫物2 cm處的黏膜是比較安全的，但在低分化直腸癌中，至少切除距癌組織3 cm以上才認為是安全切緣，低分化且較肛緣近不能保證3 cm者，寧可行Miles也不宜強行保肛手術。但也應隨著腫瘤分化程度、浸潤深度選擇適當的下切緣安全距離。通過對安全切緣的檢測，在保證腫瘤徹底切除的基礎上，盡量減小切除范圍，保留肛門功能，以提高患者術后生存質量。

綜上，MMP7不僅可以預測直腸癌患者的預后，還可以根據其在手術切緣的表達狀況作為判斷安全手術切緣的參考。