妊娠高血壓患者免疫反應的表現及其機制

(河北港口集團有限公司港口醫院檢驗科，河北 秦皇島 066000)

目前，尚無單一檢測指標以預測妊娠高血壓(Gestational hypertension，GH)得到發生和發展，而高血壓是診斷GH的主要標志[1]。GH患者主要表現為水腫、體重突增、視力模糊和血壓升高等，但有些GH患者表現為無癥狀，因此難以發現和診治，危及患者及其胎兒健康[2-3]。研究表明，肥胖、年齡及糖尿病病史均為GH的危險因素[4]。因此，本文將對GH患者體內白細胞抗原和T淋巴細胞的變化及其對免疫反應進行分析，旨在為臨床診斷和治療GH提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至次年7月于本院分娩的42例GH患者作為觀察組，納入標準：符合GH診斷標準[5]，擇期進行分娩者，入院前2周無服用任何藥物者，同意參與本研究；排除標準：患其他妊娠合并癥，免疫功能和/或血液系統障礙(疾病)者，嚴重其他臟器疾病者，腫瘤患者。參照觀察組方式，選取同期分娩的50例正常患者作為對照組，兩組年齡、孕周、體重等一般資料差異不顯著(P>0.05)具有可比性，見表2。

1.2 樣品收集

血樣：于清晨(8∶30前)收取全部患者空腹靜脈血，移入抗凝管后靜置30 min，低溫離心分離血漿，獲取待測液。

組織樣：分娩后，在無菌狀態下取長寬高均為0.5 cm的胎盤絨毛組織塊5～10塊，用生理鹽水洗凈后摘取血管和膜組織，得到待測樣。

1.3 指標檢測

1.3.1 RT-PCR檢測HLA mRNA 使用RT-PCR檢測滋養細胞中人類白細胞抗原基因座G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)和人類白細胞抗原基因座C(human leukocyte antigen-C，HLA-C) mRNA表達。按照試劑盒(Trizol RNA抽提試劑盒，R&D Systems，美國)步驟抽提組織樣總RNA，以NCBI的GenBank中HLA-G、HLA-C和β-肌動蛋白(內參)基因序列為參照合成引物(見表1)，cDNA以RNA鏈為模板逆轉錄獲得。用20 μL體系進行RT-PCR，其中cDNA模板2 μL、EX Taq酶0.2 μL、上下游引物各0.5 μL、dNTP 0.4 μL、10×buffer 2 μL，加無菌水補齊至20 μL。以40個循環進行PCR，反應完成后，應用軟件計算相應熒光反應曲線，結果以循環數閾值(Ct值)表示[6]。

表1 HLA-G、HLA-C和β-肌動蛋白引物

1.3.2 酶聯免疫檢測 使用ELISA(吸附)試劑盒(R&D Systems，美國)檢測患者血清中白細胞抗原水平。

1.3.3 流式細胞儀術檢測 使用流式細胞儀(CytoFLEX FCM，Beckman，美國)檢測T淋巴細胞CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細胞百分比。

1.4 數據處理

用SPSS17.0軟件進行統計分析，計量數據使用(±s)表示，組間兩兩比較采用SNK法或t檢驗；計數資料使用百分數(%)表示，用χ2檢驗；以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者臨床資料

兩組患者年齡、孕周和體重無顯著差異(P>0.05)，舒張壓和尿蛋白差異明顯(P<0.05)，GH組存在血壓增高，尿蛋白體征。見表2。

表2 兩組患者一般資料

2.2 兩組白細胞抗原mRNA表達對比

與對照組相比，觀察組HLA-G和HLA-C mRNA表達量明顯降低(P<0.05)，說明GH患者免疫耐受降低(見表3)。

表3 兩組白細胞抗原mRNA表達對比

2.3 兩組血清白細胞抗原濃度對比

與對照組相比，觀察組血清組織白細胞抗原sHLA-G和sHLA-C濃度明顯降低,濃度具體，說明觀察組免疫耐受降低(P<0.05)(見表4)。

表4 兩組血清白細胞抗原濃度對比

2.4 兩組T淋巴細胞水平對比

與對照組比較，觀察組T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+水平均明顯增高，說明 GH患者機體內產生了不必要的免疫應答，見表4。

表5 兩組T淋巴細胞水平比較

3 討 論

GH主要表現為母體和胎兒綜合癥，包括母體高血壓、蛋白尿并伴體內臟器損傷；胎兒會因此生長受限，嚴重者會因宮內窘迫而引發早產，甚至死亡。目前認為，這種疾病是遺傳與免疫相互關聯和作用的結果，且互為因果[7-8]。在妊娠期間，胚胎作為母體的異己，理應引起母體免疫反應；但母體免疫反應又易導致流產，因此在妊娠期間母體存在一定程度的免疫耐受[9]。本研究對比正常妊娠患者和GH妊娠患者間白細胞抗原水平發現，GH患者白細胞抗原HLA-G和HLA-C不論是mRNA表達水平還是血清水平都明顯低于正常妊娠組。HLA是一種基因復合物，主要編碼人類組織相溶復合物蛋白以負責細胞表面蛋白對體內免疫系統的調節[10]。其中HLA-A和HLA-C都是MHC I類分子，它們綁定來自病原體的抗原，將其暴露于細胞表面呈遞給T細胞識別[11]。HLAs還能綁定自然殺傷(NK)細胞使其失效，故當體內HLAs水平下降時，在病毒感染或異常細胞介導下，促發NK細胞進行程序化細胞死亡[12]。此外，妊娠其前列腺素分泌也能影響淋巴細胞白細胞介素-2產生，達到抑制自然殺傷(NK)細胞的目的[13]。故HLAs水平降低可能導致免疫耐受降低，從而產生不必要的免疫應答。

另一方面，本研究發現觀察組患者T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+水平明顯更高。這一結果驗證了我們上述推測，機體內產生了不必要的免疫應答。在功能正常的免疫系統中，只允許不結合自身肽的T細胞離開胸腺，因此，T細胞與外源或異常肽結合并啟動細胞凋亡或程序性細胞死亡，完成對病原體的防御[14]。而GH患者HLAs水平下降，T淋巴細胞上受體無法與HLAs及其呈遞的肽結合并相互作用，致使T淋巴細胞異常活躍，因此高T淋巴細胞水平表征了機體內高免疫反應[15]。換而言之，高T淋巴細胞水平反應了GH患者機體內產生了不必要的免疫應答。

總之，妊娠高血壓患者體內白細胞抗原降低，T淋巴細胞增高，可能是導致妊娠高血壓患者免疫耐受降低的原因。