ALDH1和PLK4蛋白表達水平變化與卵巢腫瘤良惡性的關系

(武漢大學人民醫院婦科，湖北 武漢 430060)

部分地區的流行病學研究發現，卵巢癌的發病率可超過485/10萬人[1]，在合并有遺傳易感高危因素的人群中，卵巢癌的發病率可進一步的上升。臨床上卵巢癌的發生，能夠導致患者近期高腫瘤負荷的發生，并能夠增加患者遠期病死的風險[2]。在研究卵巢癌的發病機理的過程中，發現細胞因子的變化，或者腫瘤相關蛋白的改變，能夠通過影響到卵巢上皮細胞的異常分裂、增殖等過程，進而促進卵巢癌的發生。乙醛脫氫酶(ALDH1)能夠通過其對于卵巢上皮細胞轉錄基因的激活，從而促進上皮細胞早期異常持續增殖，并能夠降低癌細胞的錯配修復能力[3]；Polo樣蛋白激酶4(PLK4)是著絲粒調節蛋白，其能夠通過對于著絲粒的調控，增加非整倍體發生的風險，最終促進癌細胞的發生和腫瘤的進展[4]。為了揭示ALDH1和PLK4的表達與卵巢癌的病情關系，從而為臨床上卵巢癌的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2017年1月至2018年1月本院收集的卵巢癌組織標本100例，探討了ALDH1和PLK4的表達及其與卵巢癌的病情關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院經病理學檢查確診的卵巢癌組織100例、卵巢良性腫瘤組織200例(良性組)，標本收集時間2017年1月至2018年1月。

卵巢癌，年齡32～65歲，平均53.8±6.6歲，參考國際婦產聯盟分期(FIGO)標準：其中Ⅰ期卵巢癌16例、Ⅱ期卵巢癌30例、Ⅲ期卵巢癌38例、Ⅳ期卵巢癌16例；根據病學分化程度：高、中、低分化分別為27例、35例、35例；黏液性囊腺癌73例、其他23例。良性組，年齡29～65歲，平均51.5±8.0歲，漿液性囊腺瘤78例、粘液性囊腺瘤68例、成熟性囊性畸胎瘤34例、其他類型20例。兩組年齡比較均衡，具有可比性(P>0.05)。

納入標準：(1)卵巢惡性腫瘤的診斷依據病理學檢查結果進行判斷，參考《外科學》人衛第八版中的標準[5]；(2)既往無放化療及免疫學治療病史；(3)兩組患者的各項資料收集完善，可進行統計學分析；(4)研究方案涉及患者隱私等因素均予以保密，并申請醫學倫理委員會批準。

排除標準：(1)合并其他部位惡性腫瘤；(2)類風濕、免疫學疾病患者；(3)肝腎功能疾病患者；(4)合并其他系統的重大疾病。

1.2 免疫組化染色法

石蠟包埋，連續性切片厚度3 μm，60 ℃烤片60 min，常規脫水后，采用EDTA進行抗原修復，加入10ul蒸餾水，加入10%過氧化氫5il，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次*3 min，加入ALDH1和PLK4蛋白的單克隆抗體(1∶1 000購自羅氏檢測公司)，37 ℃孵育60 min，PBS洗滌3次*3 min，加入HRP標記的ALDH1和PLK4蛋白二抗(1∶2 000 購自羅氏公司)，37 ℃孵育20 min，PBS洗滌3次*3 min，加入DAB后，PBS沖洗和復染，脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 SP染色結果評價標準[6]

PLK4表達于細胞核，ALDH1表達于細胞漿，陽性染色分別為黃色、棕黃色、褐色或者黑色，(1)根據染色強度評分：無色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色或者黑色(3分)；(2)依據陽性細胞所占的比例：比例≤10%(1分)、占比范圍11%～50%(2分)、占比范圍51%～75%(3分)、占比范圍>75%(4分)，染色強度積分與陽性細胞占比積分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.4 統計學方法

采用SPSS16.0版本軟件包進行分析統計。年齡等計量資料采用均數±標準差表示，比較分析采用t檢驗或單因素方差分析法；計數資料用百分率(%)表示，分析采用χ2檢驗；以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率比較

卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率分別為65.00%、70.00%，良性組卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率分別為21.50%、19.50%，兩組ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率差異具有統計學意義(P<0.05)；(表1、圖1)。

表1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率比較 (例，%)

圖1 ALDH1表達的SP染色結果(SP 200×)A為卵巢良性腫瘤組織、B為卵巢癌組織

圖2 PLK4表達的SP染色結果(SP 200×)A為卵巢良性腫瘤組織、B為卵巢癌組織

2.2 ALDH1和PLK4蛋白陽性表達在不同病理學特征卵巢癌組織中的表達差異

卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白在不同FIGO分期、不同的組織分化程度、是否發生淋巴結轉移的組織中表達差異具有統計學意義(P<0.05)；見表2、表3。

表2 ALDH1蛋白陽性表達在不同病理學特征卵巢癌組織中的表達差異

3 討 論

異常病理狀態下卵巢生發上皮細胞的持續性增殖，能夠顯著促進卵巢癌的發生，在游離性激素受體敏感性上升或者雌孕激素波動明顯的群體中，卵巢癌的發生風險可進一步的上升[6]。臨床上的觀察發現[7-8]，卵巢癌患者的5年生存率不超過35%，不同措施治療后卵巢癌患者的病情進展率仍然超過了25%?，F階段缺乏對于卵巢癌病情評估的血清學腫瘤蛋白指標，雖然部分研究者主張通過糖鏈蛋白125(CA125)進而評估患者的病情。但國外有研究發現[9]，依靠CA125評估卵巢癌病情或者臨床轉歸的一致性率仍然較低，其評估的靈敏度不超過45%。本次研究通過對于卵巢癌患者病灶組織中ALDH1和PLK4的表達分析研究，能夠在深入揭示卵巢癌病情進展機理的同時，為臨床上卵巢癌的診療提供理論方面的參考。

表3 PLK4蛋白陽性表達在不同病理學特征卵巢癌組織中的表達差異

ALDH1是脫氫酶家族成員，其能夠通過誘導癌細胞內結構蛋白的脫氫，進而導致腫瘤生物學特征的惡化。ALDH1結構上含有的絲氨酸-脯氨酸重復結構，能夠誘導癌細胞內腫瘤信號通路MAPK的激活，加劇癌細胞的異常轉錄和復制。相關基礎方面的研究認為，ALDH1能夠提高癌細胞的浸潤和粘附能力，增加癌細胞突破卵巢基底膜組織的風險，并最終促進卵巢惡性腫瘤的發生和轉移[10]；PLK4是著絲粒調控蛋白，其不僅能夠通過影響著絲粒的功能狀態，進而導致卵巢上皮細胞的惡變，同時還能夠干預到上皮細胞的周期，從而增加G1/S期的細胞比例[11]。國外有學者[12]已經探討了ALDH1的表達與卵巢癌的病情關系，認為在卵巢癌患者中，ALDH1蛋白的表達陽性率明顯上升，但對于PLK4的分析較少。

本組研究中，卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率顯著高于良性組卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達率，差異具有統計學意義，提示了ALDH1和PLK4的高表達均能夠影響到卵巢癌的發生發展過程。分析ALDH1和PLK4的高表達對于卵巢癌的發生內在影響，考慮由于下列因素有關[13-14]：(1)ALDH1的表達上升，能夠促進癌細胞轉錄上游啟動子的激活，提高了其對于癌細胞異常轉錄的激活作用；(2)PLK4的上調，能夠提高上皮細胞異常有絲分裂的風險，導致上皮細胞癌基因突變風險的上升，從而促進了卵巢癌的發生。俞嵐等[15]研究者也發現，在卵巢癌患者病灶組織中，ALDH1蛋白的表達陽性率可平均上升45%以上，在合并有明顯的腫瘤惡病質或者遠處轉移的患者中，ALDH1蛋白的表達陽性率可進一步的上升。免疫組化的染色分析可見，ALDH1和PLK4蛋白均主要表達于細胞核或者細胞漿，特別是在癌細胞異型性較為明顯的區域，ALDH1和PLK4蛋白的染色強度更深。進一步的研究發現，卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白在不同FIGO分期、不同的組織分化程度、是否發生淋巴結轉移的組織中表達差異具有統計學意義，提示了ALDH1和PLK4的表達與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于ALDH1和PLK4的上升，能夠通過導致癌細胞生物學特征的惡化，提高癌細胞的上皮-間質轉換能力，促進癌細胞對于淋巴結組織的粘附，提高了癌細胞的浸潤深度，從而最終促進了淋巴病理特征的進展。臨床上可以通過檢測ALDH1和PLK4，進而評估卵巢癌的臨床病情。本次研究未探討ALDH1和PLK4的表達與卵巢癌患者遠期預后的關系，存在一定的不足。

綜上所述，在卵巢癌患者病灶組織中，ALDH1和PLK4蛋白的表達陽性率均明顯上升，同時ALDH1和PLK4的表達與卵巢癌患者的組織學分級、臨床分期等臨床病理特征密切相關。