HPLC法測定抱莖苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量

郝羚竹，翟宏宇，閆茹月

（1.吉林省藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117）

0 引言

抱莖苦荬菜，又名苦碟子、滿天星等，是一種干燥而飽滿的抱莖苦荬菜屬植物[Ixeris sonchifolia（Bge.）Hance]，主要分布于中國內蒙古、東北地區等[1]。這個藥材是菊科植物抱莖苦荬菜經采收、摘選后干燥的地上部分。于大約夏季六月至七月期間，花開時進行采收，先除去根部，再除去其雜質，最后曬干而得[2]。

它是抱莖苦荬菜屬的多種可防病、治病的植物之一，值得注意的是，抱莖苦荬菜整棵植物都可以入藥使用。其藥效包括清熱、解毒、涼血、促進血液循環、緩解組織膿液所導致疼痛的作用[3]。它可用于治療頭痛、牙痛、胸痛、胃腹部疼痛、手術后中小疼痛，治療闌尾炎、痢疾、腸炎、嘔吐血液等[4]。相關學者曾進行研究，結果表明，抱莖苦荬菜還具有防止糖尿病等功效[5-6]。因為它可以良好地保護心肌細胞，并使微動脈中的血液和微靜脈中的血液二者之間的循環有效改善，促進血液中的各種物質和組織之間交換的特性，所以它常用于治療冠狀動脈血管發生動脈粥樣硬化病變而導致的各種癥狀的心臟病[7-9]。柳曉琳等人[10]的研究表明，抱莖苦荬菜還具有抗癌功效。

本文采用高效液相色譜法測定抱莖苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量并對其方法學進行考察（圖1～4）。該方法分離效果好，簡便、快速，可作為抱莖苦荬菜的質量控制指標。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀；BS 124S型電子天平（德國Sartorius）；KQ-700DV超聲波清洗器。

1.2 試藥

圖1 供試品

圖2 對照藥材

圖3 對照品

圖4 陰性

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111968-201602，純度97.7%)；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。樣品由華夏藥業提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18：82）；流速：0.8 mL·min-1，柱溫：35 ℃，檢測波長：348 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含32 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取抱莖苦荬菜藥材粉末約0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重，加熱回流提取1 h，冷卻至室溫，再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3 方法學考察

3.1 線性關系考察

精密吸取“2.2.1”項下木犀草素-7-Oβ-D-葡萄糖醛酸苷對照品溶液1、3、5、8、10、12、15 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行分析測定，以峰面積為縱坐標，以對照品含量為橫坐標繪制標準曲線，其回歸方程為Y=2687.4X+14.451（=0.9998）。結果表明，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在0.04318～0.6477 μg，呈良好的線性關系。

3.2 精密度試驗

精密吸取同一批抱莖苦荬菜供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行分析，連續進樣測定6次，記錄峰面積值，其RSD為1.58%，表明儀器具良好的精密性。

3.3 穩定性試驗

精密吸取同一批抱莖苦荬菜供試品溶液，分別在0、1、3、12、22、32 h進樣測定峰面積，RSD為1.29%，表明木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在32 h內穩定性良好。

3.4 重復性試驗

精密稱取同一批抱莖苦荬菜藥材6份，按“2.2.2”項下方法制備成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析測定，計算樣品中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量，其結果RSD為1.44%（n=6），表明該方法的重現性良好。

3.5 回收率試驗

分別稱取已知含量的抱莖苦荬菜藥材粉末（批號：1707006）6份，每份0.4 g，精密稱定，分別精密加入木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對照品溶液（濃度0.01608 mg/mL）50 mL，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣分析測定，計算回收率。結果其平均回收率為98.92%，RSD ＝0.51%（n=6）。

3.6 樣品含量測定

取10批抱莖苦荬菜藥材，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣分析測定，計算含量。結果顯示，10批抱莖苦荬菜藥材中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量分別 為0.306%、0.214%、0.228%、0.321%、0.289%、0.247%、0.198%、0.277%、0.180%、0.256%。

4 討論

4.1 色譜柱的選擇

本試驗考察了Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Luna C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）三種色譜柱，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷均可達到基線分離，以Apollo C18色譜柱柱效最高。

4.2 柱溫的選擇

本試驗考察了30 ℃、35 ℃、40 ℃三種條件下的柱溫，以35 ℃時測定木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的分離效果為最好。

4.3 檢測波長的選擇

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對照品溶液于200～400 nm波長范圍內進行紫外掃描。結果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在210 nm、255 nm、348 nm波長處有最大吸收，在348 nm波長下，供試品色譜中雜質峰少。因此選定檢測波長為348 nm。