苦參堿對(duì)阿爾茨海默癥學(xué)習(xí)記憶功能的影響及腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平的變化

鄭雙佳，魏成喜

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

0 引言

本文將結(jié)合苦參堿對(duì)阿爾茨海默癥學(xué)習(xí)記憶功能的影響與對(duì)腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平的變化結(jié)合大鼠試驗(yàn)進(jìn)行觀察研究與分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選用PC12細(xì)胞分別加入不同濃度Aβ25-35進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)，然后確定最終造模濃度；選用大鼠進(jìn)行本項(xiàng)試驗(yàn)，并將大鼠隨機(jī)分為5組，分別是空白組、模型組、模型+低劑量組、模型+中劑量組與模型+高劑量組，對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能以及腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平的變化進(jìn)行研究分析。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠60只，雄，體重于180～220 g，各組大鼠均符合試驗(yàn)動(dòng)物合格標(biāo)準(zhǔn)，分5組飼養(yǎng)，給予相同大鼠飼料，可自由飲水，溫度恒定25 ℃。

1.2.2 細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)

PC12細(xì)胞，5000/孔進(jìn)行鋪板；第2天：換液、加Aβ25-35，分 別 為0.125 μM、0.25 μM、0.5 μM和1 μM；孵育48 h后進(jìn)行MTT讀板，觀察細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛽p傷達(dá)50%即為造模成功，確定最終造模濃度。

1.2.3 藥品

苦參堿（河南萊爾因生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字L161216），1 g/支，純度為98%，溶劑為乙醇，試驗(yàn)劑量分別為0.1 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL。

1.2.4 儀器

二氧化碳保溫箱進(jìn)行培養(yǎng)，并結(jié)合倒置生物顯微鏡、臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)、海爾冰箱、潔凈工作臺(tái)作為試驗(yàn)儀器準(zhǔn)備、凝膠成像分析系統(tǒng)、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)儀、MDA（丙二醛）試劑盒、SOD（超氧化物歧化酶）試劑盒；將Aβ25-35（品牌：aladdin，貨號(hào)：A107853，批號(hào)：J1617015，規(guī)格：5 mg，純度：97%，分子量：1059）注入大鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)，觀察注射部位組織的變化。

表1 苦參不同劑量（）

表1 苦參不同劑量（）

1.3 療效標(biāo)準(zhǔn)

觀察細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛽p傷達(dá)50%即為造模成功；觀察Aβ25-35注射部位組織的變化；觀察苦參堿對(duì)大鼠腦組織中MDA含量以及SOD活性的影響。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將數(shù)據(jù)納入SPSS 17.0軟件中分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMT實(shí)驗(yàn)確定Aβ25-35最終造模濃度

觀察細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛽p傷達(dá)50%即為造模成功，確定最終Aβ 濃度為0.5 μM，詳見(jiàn)圖1。

圖1 Aβ25-35造模48 h濃度

2.2 觀察Aβ25-35觀察注射部位組織的變化

模型組將0.5 μM Aβ25-35注入大鼠的大腦皮質(zhì)，結(jié)果發(fā)生注射部位的組織壞死，同時(shí)周圍的神經(jīng)元發(fā)生缺失以及神經(jīng)角質(zhì)的增生。

與空白組相比，應(yīng)用苦參堿的各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能明顯更好，同時(shí)大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平降低，苦參堿各組也要明顯優(yōu)于空白組，見(jiàn)表1。

與空白組相比，模型組MDA含量以及SOD活性顯著降低，其中模型+高劑量組與模型+低劑量組對(duì)比MDA含量以及SOD活性顯著降低，差異顯著（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明苦參堿的劑量依賴性能夠顯著降低大鼠腦組織的氧化應(yīng)激水平，詳見(jiàn)表2。

表2 苦參堿對(duì)于大鼠腦組織MDA含量以及SOD活性比較的影響（）

表2 苦參堿對(duì)于大鼠腦組織MDA含量以及SOD活性比較的影響（）

3 討論

苦參堿是一種生物堿，由苦參的干燥根、植株與植柱以及乙醇等有機(jī)溶劑提取而來(lái)，苦參堿具有利尿、抗病原體以及抗HBV及降酶、抗炎抗過(guò)敏、抗肝纖維、抗病原體、抗肝炎病毒的作用，還對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用同時(shí)苦參堿具有良好的生物安全性與耐受性，通常無(wú)毒副反應(yīng)。結(jié)合本次實(shí)驗(yàn)研究，在對(duì)大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)用不同劑量，也可產(chǎn)生不同效用[1-5]。

Aβ 是指β-淀粉樣蛋白，可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，循環(huán)于血液、腦脊液和腦間質(zhì)液中，一般Aβ 沉積會(huì)與神經(jīng)元的退行性病變有關(guān)[6]。尤其它還在阿爾茨海默病的病程進(jìn)展中發(fā)揮著主要作用，使血管周圍沉積從而導(dǎo)致血管壁淀粉樣變從而導(dǎo)致血管硬化，甚至血管破裂或發(fā)生血栓等[7]。SOD能夠反映機(jī)體清除自由基的能力，而MDA是機(jī)體當(dāng)中一種重要的過(guò)氧化氫產(chǎn)物，對(duì)于細(xì)胞代謝以及功能也具有著重義，對(duì)于機(jī)體的氧化應(yīng)激水平可進(jìn)行反應(yīng)[8]。

結(jié)合本次實(shí)驗(yàn)，將Aβ 注入大鼠的大腦皮質(zhì)，結(jié)果發(fā)生注射部位的組織壞死，同時(shí)周圍的神經(jīng)元發(fā)生缺失以及神經(jīng)角質(zhì)的增生[9]。且當(dāng)Aβ 處于溶解狀態(tài)時(shí)能在短期內(nèi)導(dǎo)致神經(jīng)突的生長(zhǎng)，但對(duì)于沉積狀態(tài)的神經(jīng)元會(huì)加速其消亡，引起神經(jīng)突的退縮與變性，而這一點(diǎn)與阿爾茲海默癥的病理變化特點(diǎn)也十分類似[10]。

綜上所述，結(jié)合大鼠試驗(yàn)的結(jié)果分析，應(yīng)用苦參堿可以對(duì)阿爾茲海默癥的學(xué)習(xí)記憶功能進(jìn)行改善，也能有效降低其腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平。